close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY8624

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8624
(13) C1
(19)
(46) 2006.10.30
(12)
7
(51) C 12Q 1/04,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЯ
УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ CHLAMYDIA TRACHOMATIS,
MYCOPLASMA HOMINIS ИЛИ UREAPLASMA UREALYTICUM К
ПРИРОДНОМУ ИЛИ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОМУ АНТИБИОТИКУ
ТЕТРАЦИКЛИНОВОГО РЯДА
(21) Номер заявки: a 20030986
(22) 2003.10.29
(43) 2005.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение образования "Белорусская медицинская академия последипломного образования" (BY)
(72) Авторы: Хулуп Геннадий Яковлевич; Костюк Светлана Андреевна
(BY)
BY 8624 C1 2006.10.30
G 01N 33/50
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение образования "Белорусская
медицинская академия последипломного образования" (BY)
(56) Соловьева С.В. и др. Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 1. С. 43-46.
Roberts M.C. et al. Molecular and Cellular
Probes. - 1993. - No 7. - Р. 387-393.
Васильев М.М. и др. Инфекции, передаваемые половым путем. - 2003. № 1. - С. 24-27.
(57)
Cпособ определения устойчивости возбудителя урогенитальной инфекции Chlamydia
trachomatis, Mycoplasma hominis или Ureaplasma urealyticum к природному или полусинтетическому антибиотику тетрациклинового ряда путем осуществления полимеразной цепной реакции со специфическим реагентом, кодирующим Tet-гены устойчивости к антибиотику, и выявления последовательностей Tet-M и Tet-O генов, отличающийся тем, что
полимеразную цепную реакцию осуществляют с последовательностями Tet1 5’-TCA AGG
TGG CTT AGG AAA GAC CCG AAG-3’ и Tet2 5’-AAG AAC TTA TGT GGC TCG TCC
CTA AAG AGG-3’, и при выявлении у возбудителя фрагментов ДНК Tet-M и Tet-O генов
размером 407 пар нуклеотидов судят о наличии у него устойчивости к антибиотику тетрациклинового ряда, а при отсутствии таковых судят о чувствительности возбудителя к данному антибиотику.
Изобретение относится к медицине, к разделу клинической лабораторной диагностики.
Известен способ определения устойчивости Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis
и Ureaplasma urealyticum к тетрациклину путем осуществления полимеразной цепной реакции, при котором определяют устойчивость возбудителей только к природному тетрациклину, и при наличии в исследуемом образце синтезированного фрагмента молекулы
ДНК Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, определяющего
устойчивость к природному тетрациклину, судят об устойчивости к природному тетрациклину. Данный метод является прототипом по отношению к заявляемому способу [1].
BY 8624 C1 2006.10.30
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является определение устойчивости к тетрациклинам Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum путем осуществления полимеразной цепной реакции с электрофоретическим разделением продуктов амплификации.
Однако указанный способ обладает следующими недостатками:
определяет устойчивость возбудителей только к одному природному антибиотику тетрациклину и наличие в исследуемом образце синтезированного фрагмента молекулы
ДНК, указывающего на устойчивость к антибиотику, оценивают путем сопоставления расстояния пробега ДНК в исследуемой пробе с расстоянием пробега в пробе положительного контроля, но сложности в оценке результатов искажают точность определения.
Задачей заявляемого способа является расширение спектра исследований на устойчивость возбудителей к антибиотикам и повышение точности их определения.
Поставленная задача достигается следующим способом.
Предложен способ определения устойчивости возбудителей урогенитальных инфекций Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis или Ureaplasma urealyticum к природному
или полусинтетическому антибиотику тетрациклинового ряда путем осуществления полимеразной цепной реакции со специфическим реагентом, кодирующим Tet-гены устойчивости к антибиотику, и выявления последовательностей Tet-M и Tet-О генов, причем
полимеразную цепную реакцию осуществляют с последовательностями Tet1-5'-TCA AGG
TGG CTT AGG AAA GAC CCG AAG-3'; Tet2-5'-AAG AAC TTA TGT GGC TCG TCC СТА
AAG AGG-3', и при выявлении у возбудителя фрагментов ДНК Tet-М и Tet-О генов размером 407 пар нуклеотидов судят о наличии у него устойчивости к антибиотику тетрациклинового ряда, а при отсутствии таковых судят о чувствительности возбудителя к данному антибиотику.
Поскольку устойчивость возбудителей к природным и полусинтетическим антибиотикам тетрациклинового ряда определяется Tet-M и Tet-О генов, которые выявляют различные изменения рибосом, способных изменять участки распознавания антибиотиков,
вследствие чего сродство антибиотиков группы тетрациклина к местам узнавания на рибосоме падает и они оказывают подавляющее действие на возбудитель, то определение у
возбудителей в ДНК фрагментов Tet-M и Tet-О генов дает возможность установить их устойчивость к природным и полусинтетическим антибиотикам тетрациклинового ряда.
Пример 1.
Необходимо выявить наличие феномена устойчивости к антибактериальным препаратам группы тетрациклина у Chlamydia trachomatis, выделенной из эпителия цервикального
канала у пациента А. с клиническим диагнозом - эндоцервицит, эрозия шейки матки.
Для выявления микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам тетрациклинового ряда
применяют специфические реагенты, соответствующие участкам ДНК, определяющим
устойчивость возбудителей к природным и полусинтетическим антибиотикам группы тетрациклина. Они имеют консервативные нуклеотидные последовательности к тетрациклинам Tet-M и Tet-O: Tet1-5'-AGT TCC ACC GAA TCC TTT CTG GGC ТТС-3'; Tet2-5'-TTC
TTG AAT АСА CCG AGC AGG GAT TTC ТСС-3'. Полученные фрагменты ДНК разгоняют электрическим током при электрофорезе с фиксированным напряжением 150 В "Эльф2" (ДНК-технология) в 1,5 % агарозном геле, содержащем 1 % бромистый этидий, в течение 30 мин при напряжении 10 В/см. Анализ результатов проводят с использованием
трансиллюминатора Н-2 ("Петротерм", Россия), с применением видеосистемы для регистрации гелей "Gel-Imager" ("Петротерм", Россия), с помощью программы "Gel Exploer" версия 1,0 на базе компьютера Intel Pentium-4. Положительным контролем наличия устойчивости к антибиотикам группы тетрациклина является плазмида с фрагментом Tet-M и
Tet-О детерминанты ДНК размером 407 пар нуклеотидов.
Идентификацию ПЦР-результатов проводят по следующим критериям:
выявление в биологических пробах специфического ПЦР-продукта;
соответствие размера ДНК-продукта в клиническом образце размеру ДНК-продукта
контрольной пробы.
2
BY 8624 C1 2006.10.30
В таблице представлены размеры фрагмента ДНК возбудителей в исследуемых пробах
пациентов, из которых видно, что синтезированные фрагменты ДНК Chlamydia trachomatis в пробе у пациента А. имеют фрагмент Tet-M и Tet-О генов ДНК размером 407 пар, а
следовательно - устойчивость к природным и полусинтетическим тетрациклинам.
Размер фрагментов ДНК возбудителей в исследуемых пробах
пациента А., пациента В., пациента С.
Характеристики
Проба пациента А.
Проба пациента В.
Проба пациента С.
фрагментов ДНК
Количество н.п.
407
407
Присутствие у ChlaПрисутствие у MyОтсутствие у Ureamydia trachomatis
coplasma hominis
plasma urealyticum
Интерпретация
фрагментов Tet-M и фрагментов Tet-M и
фрагментов Tet-M и
Tet-О генов
Tet-O генов
Tet-О генов
Пример 2.
Необходимо выявить наличие феномена устойчивости к антибактериальным препаратам группы тетрациклина у Mycoplasma hominis, выделенной из плоского уретрального
эпителия у пациента В. с клиническим диагнозом - хронический уретрит.
Аналогичным образом, как в примере 1, определяют фрагменты Tet-M и Tet-О генов
ДНК возбудителя в исследуемом материале у пациента В. с клиническим диагнозом хронический неспецифический уретрит.
В таблице представлены размеры фрагментов ДНК возбудителей в исследуемых пробах пациентов, из которых видно, что синтезированные фрагменты ДНК Mycoplasma
hominis в пробе у пациента В. имеют фрагменты Tet-M и Tet-О генов ДНК размером 407
пар, а следовательно - устойчивость к природным и полусинтетическим тетрациклинам проба № 2.
Пример 3.
Необходимо выявить наличие феномена устойчивости к антибактериальным препаратам группы тетрациклина у Ureaplasma urealyticum, выделенной из цервикального эпителия у пациента С. с клиническим диагнозом - эндоцервицит.
Аналогичным образом, как в примере 1, определяют фрагменты Tet-M и Tet-О генов
ДНК возбудителя в исследуемом материале у пациента С. с клиническим диагнозом - эндоцервицит.
В таблице представлены размеры фрагментов ДНК возбудителей в исследуемых пробах пациентов, из которых видно, что синтезированные фрагменты ДНК Ureaplasma
urealyticum в пробе № 3 фрагментов Tet-M и Tet-О генов не имели, а следовательно были
чувствительны к природным и полусинтетическим антибиотикам тетрациклинового ряда.
Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ позволяет получить
следующее преимущество:
возможность полимеразной цепной реакцией определить устойчивость Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к природным и полусинтетическим
тетрациклинам, что позволяет расширить спектр исследований на устойчивость возбудителей к антибиотикам и повысить точность их определения.
Источники информации:
1. Соловьева С В., Гой E.Г., Зигангирова Н.А, Гамова Н.А., Раковская И.В. Применение ПЦР для выявления тетрациклиноустойчивых штаммов урогенитальных микоплазм //
Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 1. - С. 43-46 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
82 Кб
Теги
by8624, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа