close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9055

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 9055
(13) C1
(19)
(46) 2007.04.30
(12)
7
(51) G 01N 33/48,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ
УЛЬТРАФИОЛЕТОВОГО ОБЛУЧЕНИЯ КРОВИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ
БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ
(21) Номер заявки: a 20020427
(22) 2002.05.20
(43) 2003.12.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Царев Владимир Петрович;
Кирковский Валерий Васильевич;
Потапова Светлана Михайловна;
Ровдо Игорь Михайлович (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Белорусский государственный медицинский университет"
(BY)
BY 9055 C1 2007.04.30
A 61N 5/06
(56) Захараш М.П. и др. Лабораторная диагностика. - 1998. - № 2. - С. 21-23.
Царев В.П. и др. Актуальные вопросы
современной медицины: Материалы
юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ. Ч. 2. - Мн.,
2001. - С. 235-237.
Царев В.П. и др. Труды молодых ученых. Юбилейное издание. Сб. научных
работ. - Мн., 2001. - С. 156-159.
Кирковский В.В. и др. Актуальные вопросы современной медицины: Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ.
Ч. 1. - Мн., 2001. - С. 184-186.
Ткаченко Ю.Я. Применение ультрафиолетового облучения аутокрови в
комплексной терапии больных бронхиальной астмой: Автореф. дис. …Киев, 1992. - С. 6-17.
(57)
Способ контроля эффективности ультрафиолетового облучения крови при лечении
бронхиальной астмы, отличающийся тем, что до и после ультрафиолетового облучения
из периферической крови больного выделяют лимфоциты, культивируют в течение 72 ч
на питательной среде с фитогемагглютинином и определяют процентное содержание
апоптических лимфоцитов и, если после ультрафиолетового облучения крови оно увеличилось на 10 % и более, констатируют хороший эффект облучения в пределах от 5 до 10 %
- удовлетворительный, а до 5 % - недостаточный.
Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии, и касается
контроля эффективности применения ультрафиолетового облучения крови (УФОК) при
бронхиальной астме (БА).
Известен способ контроля эффективности УФОК при БА, основанный на изучении
динамики клинических симптомов заболевания (частоты и выраженности приступов удушья и кашля, количества и отхождения мокроты, выраженности одышки, количества сухих хрипов при аускультации легких, динамики суточных доз бронхолитиков и глюкокортикостероидов) после проведенного лечения (Ткаченко Ю.Я. Применение ультрафиоле-
BY 9055 C1 2007.04.30
тового облучения аутокрови в комплексной терапии больных бронхиальной астмой. Автореф. дис. … канд. мед. наук. - Киев, 1992. - С. 6-17).
Его недостатком является необходимость контроля за большим количеством показателей, невозможность применить методы вариационного и корреляционного анализа в
связи с использованием приемов описательной статистики.
Известен также способ контроля эффективности УФОК при БА, основанный на исследовании пролиферативной активности Т-лимфоцитов периферической крови (Кирковский В.В. и др. Актуальные вопросы современной медицины: Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 80-летию БГМУ. Ч. 1. - Мн., 2001. - С. 184-186).
Недостатками этого способа являются недостаточная чувствительность и специфичность, так как выявляемое снижение спонтанной пролиферативной активности отмечается
не у всех больных и недостаточно коррелирует с динамикой выраженности клинических
симптомов и показателей функции внешнего дыхания.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ определения эффективности УФОК при БА, основанный на изучении динамики содержания среднемолекулярных
пептидов в крови больных после лечения (Захараш М.П. и др. Лабораторная диагностика. - 1998. - № 2. - С. 21-23).
Однако в связи с тем, что содержание среднемолекулярных пептидов в большей степени отражает выраженность эндогенной интоксикации, а не активность аллергического
процесса в дыхательных путях, известный способ не обеспечивает высокой чувствительности и точности.
Задачей изобретения является повышение точности способа.
Поставленная задача достигается тем, что в способе контроля эффективности ультрафиолетового облучения крови при лечении бронхиальной астмы до и после ультрафиолетового облучения из периферической крови больного выделяют лимфоциты, культивируют в
течение 72 ч на питательной среде с фитогемагглютинином и определяют процентное содержание апоптических лимфоцитов и, если после ультрафиолетового облучения крови
оно увеличилось на 10 % и более констатируют хороший эффект облучения, в пределах от
5 до 10 % - удовлетворительный, а до 5 % - недостаточный.
При осуществлении способа, в динамике (до и после УФОК), определяется процентное содержание апоптических лимфоцитов в 72-часовой культуре этих клеток периферической крови больных БА, стимулированных фитогемагглютинином (ФГА). При увеличении количества апоптических клеток более, чем на 10 % констатируют хороший эффект
УФОК, от 5 до 10 % - удовлетворительный эффект, а до 5 % - недостаточную эффективность УФОК у больных БА. На сегодняшний день Т-лимфоциты рассматриваются в качестве главного звена прогрессирования БА у взрослых как на местном, так и на системном
уровнях. Это позволяет использовать ФГА-индуцированный апоптоз этих клеток как интегральный показатель эффективности применяемого метода лечения, что значительно
повышает точность исследования.
Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью. Так, у больных БА показатель ОФВ1 достоверно коррелировал с уровнем индуцированного ФГА апоптоза лимфоцитов крови через 72 ч наблюдения (r = 0,667; р < 0,01) и отрицательной динамикой выраженности клинических симптомов (приступы удушья, кашель, одышка, отхождение
мокроты, хрипы в легких). Таким образом, предложенный способ при достаточной чувствительности и точности значительно упрощает и облегчает контроль эффективности
УФОК при БА.
Предложенный способ осуществляется следующим образом. Кровь из локтевой вены
натощак путем венепункции забирают в полистироловую пробирку объемом 5 мл с 0,5 М
раствора ЭДТА. Лимфоциты периферической крови выделяют центрифугированием на
градиенте плотности фиколл-верографин при 400 g в течение 30 мин. Клетки интерфазы
отмывают питательной средой RPMI-1640 (F1OW) с 1 % АВ-сыворотки. Осадок ресус2
BY 9055 C1 2007.04.30
пендируют в питательной среде RPMI-1640 с добавлением 10 % АВ-сыворотки, 2 мм Lглутамина, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина.
Процентное содержание апоптических клеток определяют в 72-часовой культуре стимулированных ФГА (10 мкг/мл) лимфоцитов. После двукратной отмывки холодным PBS
(без ионов Са2+) клетки (1×106) фиксируют капельным добавлением 1 мл холодного 70 %
этанола в PBS и инкубируют 30 мин при 4 °С. После осаждения клетки дважды отмывают
холодным PBS (без ионов Са2+) и ресуспендируют в растворе пропидиум иодида (25
мкг/мл). Инкубируют 30 мин при 4 °С.
Аналитическую цитометрию проводят на проточном цитофлюориметре с аргонионным лазером (15 мВт 488 нм) и 585/42 (FL 2) дискриминационным фильтром. Данные
анализируют после выделения логического гейта бластной популяции в dot/plot распределении клеток по их линейному переднему (FSC) и боковому (SSC) светорассеиванию. На
пробу анализируют минимум 10000 клеток. Сбор и анализ данных проводят с помощью
программы LYSIS II software (Becton Dickinson).
Пример 1.
Больной М., 43 лет, поступил в клинику с диагнозом: бронхиальная астма, смешанная
форма, тяжелое течение, гормонозависимый вариант, фаза обострения ДН3. Предъявлял
жалобы на одышку в покое, приступы удушья каждые 3-4 ч, не купирующиеся однократным приемом β2-агонистов, потребность в бронходилятаторах до 12-15 раз в сутки, возникновение приступов удушья каждую ночь 1-2 раза. БА страдает в течение 12 лет, после
перенесенной острой пневмонии. Из них в течение 6 последних лет в связи с тяжелым течением астмы принимает преднизолон внутрь в дозе 10 мг в сутки. При поступлении
ФГА-индуцированный апоптоз Т-лимфоцитов периферической крови в их 72-часовой
культуре составлял 6,1 %. После включения в комплексное лечение курса УФОК на аппарате типа "Надежда" (5 процедур через 1 день, мощность облучения - 600 Дж/м2, длина
волны 250 нм) с использованием в качестве генератора УФ лучей лампы ПРК-2 и кюветы
из кварцевого стекла размерами 100×20×2 мм процентное содержание апоптических клеток в крови значительно повысилось и составило 18,9 %. По окончании курса лечения установлено значительное улучшение клинико-лабораторных и функциональных показателей. Частота приступов удушья снизилась до 3-5 в неделю, ночные симптомы отсутствовали, исчезли одышка и тяжесть в грудной клетке, сухие хрипы в легких. При выписке
поддерживающая доза глюкокортикостероидов составила 5 мг преднизолона в сутки. Суточный разброс ПОС составил 7 %. В контрольной спирограмме выявлена существенная
положительная динамика: ЖЕЛ - 127 %, ОФВ1 - 113 %, МОС50 - 70 %, МОС75 - 79 %,
ОФВ1/ФЖЕЛ - 92 %. Достигнутое улучшение сохранялось на протяжении года при постоянном приеме дозы преднизолона 5 мг в сутки внутрь, то есть в 2 раза ниже установившейся в качестве привычной до лечения. Значимой отрицательной динамики со стороны
показателей ФВД и лабораторных данных в течение года не отмечалось, сохранялись признаки незначительной обструкции мелких и средних бронхов при отсутствии возрастания
бронхиального сопротивления по данным ФВД.
Пример 2.
Больной П., 30 лет, доставлен в клинику с диагнозом: бронхиальная астма, аллергическая форма, тяжелое течение, гормонозависимый вариант, фаза обострения, ДН3. При поступлении жаловался на приступы удушья каждые 3-4 ч, в том числе и ночью, затяжного
характера, плохо купирующиеся бронхолитиками, слабость, сердцебиение, одышку в покое. БА страдает с детства. В семье БА у отца и аллергический ринит у брата. Последние
1,5 года для контроля над заболеванием вынужден постоянно принимать преднизолон в
дозе 5 мг в сутки. При поступлении одышка в покое 24-26 в 1 мин. Аускультативнорассеянные свистящие хрипы, больше на выдохе. Компьютерная спирография выявила
резкое снижение ФВД по обструктивному типу: ФЖЕЛ - 66 %, ОФВ1 - 34 %, МОС25 3
BY 9055 C1 2007.04.30
24 %, МОС50 - 19 %, МОС75 - 16 %, ОФВ1/ФЖЕЛ - 53 %. Содержание апоптических лимфоцитов в периферической крови - 5,6 %. Несмотря на проведенное лечение: первые 3 дня
преднизолон внутривенно капельно в суточной дозе 60 мг и внутрь 15 мг в сутки, теотард
600 мг в сутки, ингакорт 2000 мкг в сутки, 6 процедур УФОК через 1 сутки на аппарате
"Надежда", состояние больного улучшилось незначительно: количество приступов удушья уменьшилось до 3-4 за сутки с эпизодами ночного пробуждения, сохранялся кашель с
плохим отхождением мокроты, одышка при физической нагрузке, сухие хрипы в легких.
Показатели ФВД улучшились незначительно. Процент апоптических лимфоцитов после
их культивирования в среде с добавлением ФГА в течение 72 ч увеличился на 2,3 % и составил 7,9 %. Состояние больного несколько улучшилось только после включения в комплексное лечение курса лечебного плазмафареза, что позволило перевести его на амбулаторное лечение с поддерживающей дозой преднизолона 7,5 мг в сутки.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить точность и повысить чувствительность контроля эффективности применения УФОК при БА и отличается тем, что
определяется динамика выраженности ФГА-индуцированного апоптоза лимфоцитов периферической крови больных через 72 ч их культивирования в процентах. При разнице
показателя до и после применения УФОК менее 5 % диагностируется низкая эффективность этого метода гемокоррекции, а при разнице более 10 процентов - высокая эффективность экстракорпорального вмешательства.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
86 Кб
Теги
by9055, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа