close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9182

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 9182
(13) C1
(19)
(46) 2007.04.30
(12)
7
(51) A 23C 21/02
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ
ДОБАВКИ (ВАРИАНТЫ)
BY 9182 C1 2007.04.30
(21) Номер заявки: a 20040550
(22) 2004.06.15
(43) 2005.12.30
(71) Заявитель: Научно-производственное республиканское дочернее унитарное предприятие "Институт мясо-молочной промышленности" Республиканского унитарного предприятия "Научно-практический центр
Национальной академии наук Беларуси по продовольствию" (BY)
(72) Авторы: Ласковнева Ольга Владимировна; Дудко Наталья Владимировна; Сафроненко Людмила Владимировна (BY)
(73) Патентообладатель: Научно-производственное республиканское дочернее
унитарное предприятие "Институт мясо-молочной промышленности" Республиканского унитарного предприятия
"Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по
продовольствию" (BY)
(56) RU 2183935 C2, 2002.
RU 2207019 C1, 2003.
EA 200101262 A1, 2002.
RU 2209630 C2, 2003.
WO 00/078322 A1.
RU 2084233 C1, 1997.
RU 2076716 C1, 1997.
RU 2132615 C1, 1999.
RU 2104706 C1, 1998.
RU 2099956 C1, 1997.
BY 3754 C1, 2000.
RU 95110211 A1, 1996.
RU 2161887 C1, 2001.
(57)
1. Способ производства биологически активной добавки, отличающийся тем, что
включает сбор обезжиренной молочной сыворотки, осветление ее на ультрафильтрационной установке, доведение pH до значений, близких к нейтральному, отделение осажденных белков, высокую пастеризацию или стерилизацию, охлаждение до температуры
культивирования, раздельное культивирование пробиотических культур Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus plantarum, инокулированных в количестве 7 % от объема сыворотки, до pH 3,9-4,4 и конечной концентрации лактобацилл в суспензии не менее 108 КОЕ/мл
и смешивание полученных суспензий в соотношении 1 : 1.
2. Способ производства биологически активной добавки, отличающийся тем, что
включает сбор обезжиренной молочной сыворотки, осветление ее на ультрафильтрационной установке, доведение pH до значений, близких к нейтральному, отделение осажденных белков, высокую пастеризацию или стерилизацию, охлаждение до температуры
культивирования, раздельное культивирование пробиотических культур Lactobacillus acidophilus и Lactobacillus plantarum, инокулированных в количестве 7 % от объема сыворотки, до pH 3,9-4,4 и конечной концентрации лактобацилл в суспензии не менее 108 КОЕ/мл,
смешивание полученных суспензий в соотношении 1 : 1 и добавление бифидобактерий
видов Bifidobacterium adolescentis и/или Bifidobacterium bifidum, и/или Bifidobacterium
BY 9182 C1 2007.04.30
longum, и/или Bifidobacterium breve в жидком виде или в виде сухого бакконцентрата в
расчетном количестве, обеспечивающем содержание бифидобактерий в добавке не менее
107 КОЕ/мл.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в производстве
пробиотических препаратов.
Известны биологически активная добавка к пище и способ ее приготовления, предусматривающий приготовление гидролизатной среды на основе гидролизата белкового
компонента, введение в гидролизат добавок и суточной культуры микроорганизмов. Белковый компонент подвергают ферментативному гидролизу, смешиванию с уксусной кислотой, кипячению, фильтрации, разведению.
Гидролиз проводят в два этапа, один в кислой среде с использованием пепсина, другой в щелочной среде с использованием панкреатина с концентрацией 5-10 г/л. В готовый
гидролизат вводят стабилизирующие добавки в количестве не менее 0,59 об. %.
В приготовленную среду вводят суточную культуру микроорганизмов Bifidumbaсterium, Lactobacillus, Streptococcus (патент RU 2207019, 2003.)
Биологически активная добавка может использоваться в качестве закваски для приготовления оздоровительных продуктов.
Известен способ получения биологически активной добавки "Милканг", включающий
очистку сырья центрифугированием, сорбацию белков на ионообменнике, хроматографическое их разделение, элюирование, определение фракции, диализ и стабилизацию. В качестве сырья используют нативные низкомолекулярные катионные вещества молочного
происхождения (молоко, или молозиво, или обезжиренное молоко, или подсырную сыворотку, или творожную сыворотку). Биологически активная добавка может дополнительно
содержать лизоцим, панкреатическую РНКазу и полипептиды. Данный способ позволяет
получить биологически активную добавку, содержащую в нативном виде ангиогенин, лизоцим, панкреатическую РНКазу и полипептиды, которая обладает ранозаживляющим и
общеукрепляющим действием (патент RU 2183935, 2002).
Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является получение биологически активной добавки на основе молочной сыворотки, обладающей лечебно-профилактическими свойствами для коррекции микробиоценоза влагалища и кишечника.
Поставленная задача решается следующим образом.
Молочную сыворотку осветляют на ультрафильтрационной установке УФ-6 и раскисляют 40 % раствором гидроокиси натрия до pH 7,2-7,5, выдерживают 10-15 мин для
осаждения белков и фильтруют. Стерилизуют при 1 атм 12-15 мин. Охлаждают до оптимальной температуры и инокулируют 5-7 % от объема сыворотки культурами Lactobasillus asidophilus, Lactobasillus plantarum. Культивируют каждую культуру отдельно:
Lactobasillus asidophilus при 37 °С до значений 3,9-4,4 ед. pH; Lactobasillus plantarum при
35 °С до тех же значений ед. pH. Полученные суспензии смешивают в стерильной емкости в соотношении 1 : 1 и разливают в стерильные флаконы по 50 или 100 мл, получая
таким образом "Биосыворотку-L". Готовый препарат содержит не менее 108 КОЕ/мл
жизнеспособных клеток лактобацилл.
Способ производства биологически активной добавки по варианту производится следующим образом.
Молочную сыворотку осветляют на ультрафильтрационной установке УФ-6 и раскисляют 40 % раствором гидроокиси натрия до pH 7,2-7,5, выдерживают 10-15 мин для осаждения белков и фильтруют. Стерилизуют при 1 атм 12-15 мин. Охлаждают до оптимальной температуры и инокулируют 5-7 % от объема сыворотки культурами Lactobasillus
asidophilus, Lactobasillus plantarum. Культивируют каждую культуру отдельно: Lactobasil2
BY 9182 C1 2007.04.30
lus asidophilus при 37 °С до значений 3,9-4,4 ед. pH; Lactobasillus plantarum при 35 °С до
тех же значений ед. pH. Полученные суспензии смешивают в стерильной емкости в соотношении 1 : 1 и вносят бифидобактерии видов Bifidobaсterium adolescentis и (или) Bifidobaсterium bifidum, и (или) Bifidobaсterium Longum, и (или) Bifidobacterium breve в жидком
виде или в виде сухого бакконцентрата в расчетном количестве, обеспечивающем содержание бифидобактерий не менее 107 КОЕ/мл, получая "Биосыворотку-LB". Готовый препарат содержит не менее 108 КОЕ/мл жизнеспособных клеток лактобацилл и не менее
107 бифидобактерий.
Известно, что основным представителем вагинальной микрофлоры является палочка
Додерлейна, которую в настоящее время отождествляют с видом Lactobasillus asidophilus
и другими видами рода Lactobasillus. Однако в последние годы все чаще встречаются случаи нарушения нормального состава вагинальной микрофлоры, что выражается в исчезновении активных бактерий-антагонистов и замене их на представителей патогенных и
условно-патогенных видов. Причинами дисбактериозов женских гениталий являются острые и хронические гинекологические заболевания в репродуктивном возрасте, возрастные
кольпиты и вульвовагиниты, а также поступление в организм антибиотиков, сульфаниламидов и других противомикробных препаратов. Дисбактериоз поддерживает патологические процессы не только в полости влагалища, но и в кишечнике, изменяя нормальную
кислую реакцию среды. До последнего времени для санации влагалища применяли различные химические антисептические или антибиотические вещества (фурацилин, риванол, эмульсия синтомицина и др.), действие которых проявляется в равной степени против
микроорганизмов как патогенной и условно-патогенной, так и полезной бактериальной
флоры. Все это свидетельствует об актуальности применения пробиотических микроорганизмов для восстановления нормальной микрофлоры влагалища и кишечника самостоятельно и после приема фармокопейных препаратов.
На основании проведенного скрининга коллекционного фонда промышленно ценных
культур молочнокислых бактерий и бифидобактерий отобраны штаммы-пробиотики, способные развиваться в молочной сыворотке в предельно сжатые сроки и иметь достаточно
высокий титр жизнеспособных клеток. Молочная сыворотка используется в качестве питательной среды для выращивания микроорганизмов различных групп, так как в ней содержится более 200 жизненно важных и биологически активных веществ, представленных
сывороточными белками (лактоглобулином, лактоальбумином, альбумином сыворотки
крови, иммуноглобулинами). В сывороточных белках содержатся незаменимые аминокислоты - лизин, фенилаланин, тирозин, цистин. Углеводный состав молочной сыворотки
и молока аналогичен: моносахариды (глюкоза, галактоза), дисахарид-лактоза и более
сложные олигосахариды. Желтовато-зеленый оттенок сыворотки обусловлен наличием
рибофлавина. Из органических кислот в ней присутствуют молочная, лимонная, муравьиная, пропионовая; из минеральных веществ - калий, магний, кальций, натрий, фосфор, железо. Все это позволяет использовать молочную сыворотку в качестве питательной среды
для культивирования микроорганизмов, в том числе пробиотических культур - лактобацилл и бифидобактерий. Данные исследований по отбору штаммов-пробиотиков представлены в табл. 1.
Показатели активности роста культур L.plantarum, L.acidophilus свидетельствуют о
достаточно высоком титре клеток как в питательной среде, так и в молочной сыворотке.
Используемые штаммы лактобацилл и бифидобактерий обладают высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Кроме того, эти культуры отобраны по резистентности к антибиотикам и устойчивы
к амикацину, клиндомицину, гентамицину, рифампицину, левомицитину, линкомицину,
тетрациклину и др.
"Биосыворотка-L", содержащая культуры в L.plantarum, L.acidophilus, предназначена
для восстановления микрофлоры полости влагалища. "Биосыворотка-LB", содержащая
3
BY 9182 C1 2007.04.30
культуры латобацилл и бифидобактерий, предназначена для приема внутрь для восстановления микрофлоры кишечника. В табл. 2 представлены основные качественные показатели "Биосыворотки-L" и "Биосыворотки-LB".
Пример 1.
Две колбы, содержащие по 0,5 л осветленной на ультрафильтрационной установке
УФ-6 молочной сыворотки, стерилизуют при 1 атм 15 мин. Охлаждают до температуры
культивирования (L.acidophilus до 37 °С, L.plantarum до 35 °С), инокулируют 7 % от объема сыворотки культурами лактобацилл. Термостатируют до интенсивного помутнения
культуральной среды до pH 4,0. C соблюдением правил асептики в стерильном стакане
смешивают полученные суспензии в соотношении 1 : 1, получая таким образом биологически активную добавку "Биосыворотка-L". Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный запах, светло-зеленый цвет. В 1,0 мл
"Биосыворотки-L" содержится 6,0×109 жизнеспособных клеток лактобацилл.
Пример 2.
Две колбы, содержащие по 0,5 л осветленной на ультрафильтрационной установке
УФ-6 молочной сыворотки, стерилизуют при 1 атм 15 мин. Охлаждают до температуры
культивирования (L.acidophilus до 37 °С, L.plantarum до 35 °С), инокулируют 7 % от объема сыворотки культурами лактобацилл. Термостатируют до интенсивного помутнения
культуральной среды до pH 4,0. С соблюдением правил асептики в стерильном стакане
смешивают полученные суспензии в соотношении 1 : 1, вносят концентрат бифидобактерий видов B.adolescentis и (или) В.longum, и (или) B.bifidum, и (или) В.brevе, содержащий
в 1 г 1,0×1011 КОЕ, добавляют в количестве 0,1 г на 1,0 л препарата, получая таким образом "Биосыворотку-LB". Перед внесением бакконцентрат бифидобактерий тщательно растирают в стерильной ступке до однородной массы, добавляя небольшое количество
стерильного физраствора. Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный вкус и запах, светло-коричневый цвет. В 1,0 мл "Биосыворотки-LB" содержится 6,0×109 КОЕ лактобацилл и 1,0×108 бифидобактерий.
Пример 3.
"Биосыворотку-LB" изготавливают аналогичным способом, приведенным в примере 2,
с внесением жидкой суспензии бифидобактерий видов B.adolescentis и (или) В. Longum, и
(или) B.bifidum, и (или) В.breve, содержащей в 1 мл 3,0×109 КОЕ, добавляют в количестве
10,0 мл на 1,0 л препарата. Готовый препарат имеет однородную слабовязкую консистенцию, чистый кисломолочный вкус и запах, светло-коричневый цвет. В 1,0 мл "Биосыворотки-LB" содержится 6,0×109 КОЕ лактобацилл и 1,0×108 бифидобактерий.
Результаты проведенных клинических исследований показали, что биологически активные добавки "Биосыворотка-L" и "Биосыворотка-LB" могут применяться как самостоятельно, так и в сочетании с лекарственными препаратами. Самостоятельное
применение показано при кольпитах, вызванных патогенной и условно-патогенной микрофлорой (гардинеллы, хламидии, дрожжеподобные грибы). После назначения "Биосыворотки-L" и "Биосыворотки-LB" одновременно у 68 % обследованных женщин
отмечался положительный клинический результат: произошло значительное снижение
посторонней микрофлоры, исчез зуд, у некоторых произошло полное восстановление
микробиоценоза влагалища и кишечника. Биологически активные добавки рекомендованы для массового производства с целью использования их в лечебной практике для коррекции микробиоценоза влагалища и кишечника.
4
BY 9182 C1 2007.04.30
Таблица 1
Видовое название
Активность
роста в пит.
среде, КОЕ/мл
L.plantarum PI30/1
L.plantarum PI 37
L.acidophilus, A27/1
L.acidophilus, A27/3
B.adolescentis, Б-Фар.
B.longum, Б-1/2
B.bifidum, Бф-4
В.breve, Б-10
5,5×109
5,0×109
7,0×109
5,5×109
6,5×109
3,5×109
5,0×109
4,0×109
Наименование показателей
Количество клеток лактобацилл,
КОЕ/мл
Количество клеток бифидобактерий,
КОЕ /мл
Активная кислотность, ед. рН
Активная
кислотность, ед.
pH
4,23
4,54
3,95
4,0
4,7
4,53
4,32
4,47
Активность
роста в мол.
сыворотке,
КОЕ/мл
1,5×109
2,5×109
6,0×109
5,0×109
-
"Биосыворотка-L"
6,0×109
Таблица 2
"Биосыворотка-LB"
6,0×109
-
1,0×108
4,0
4,2
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Активная
Время
кислотразвития,
ность, ед.
ч
pH
4,35
16
4,23
16
4,05
14
4,20
14
-
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
91 Кб
Теги
by9182, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа