close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9315

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2007.06.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61D 19/20
СПОСОБ ГЛУБОКОГО ЗАМОРАЖИВАНИЯ ЭМБРИОНОВ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
(21) Номер заявки: a 20040754
(22) 2004.08.09
(43) 2005.03.30
(71) Заявитель: Республиканское унитарное предприятие "Научно-практический центр Национальной академии
наук Беларуси по животноводству"
(BY)
(72) Авторы: Шейко Иван Павлович;
Будевич Александр Иванович; Горбунов Юрий Анатольевич; Минина
Наталья Генриховна; Шелудяков
Михаил Валерьевич (BY)
BY 9315 C1 2007.06.30
BY (11) 9315
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Республиканское
унитарное предприятие "Научно-практический центр Национальной академии
наук Беларуси по животноводству"
(BY)
(56) Эрнст Л.К. и др. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. - М.: ВО "Агропромиздат", 1989. С. 190-195.
US 5527260 А, 1996.
SU 1782568 A1, 1992.
Будевич А.И. и др. Зоотехническая наука
Беларуси: Сб. науч. тр. - Т. 36. - Мн.:
Хата, 2001. - С. 34-39.
BY а 19990903, 2000.
US 5504002 A, 1996.
(57)
Способ глубокого замораживания эмбрионов крупного рогатого скота, включающий
насыщение эмбрионов криопротектором, охлаждение в парах жидкого азота и погружение
в жидкий азот при температуре минус 196 °C, отличающийся тем, что эмбрионы помещают на 3 мин в первую среду с криопротектором, затем - на 50-60 с во вторую среду с
криопротектором, затем переносят в пайетту, на 60 с помещают в пары жидкого азота и
погружают в жидкий азот, при этом первую среду готовят путем доведения 1 мл химически
чистого глицерина до 10 мл фосфатно-солевым буфером Дюльбекко с добавлением 4 г/л
бычьего сывороточного альбумина, 12 мкг/мл гентамицина и 100 ед/мл ампициллина,
вторую - путем смешивания 3 мл химически чистого глицерина, 1,5 мл химически чистого
диметилсульфоксида и 0,5 мл поливидона и доведения смеси до 10 мл фосфатно-солевым
буфером Дюльбекко с теми же добавками.
Изобретение относится к биотехнологии эмбриопересадок у крупного рогатого скота,
в частности к криоконсервированию зародышей коров-доноров.
Эмбрион, который на 20 % состоит из твердых составных частей и на 80 % из воды,
подвержен двум негативным влияниям - образованию интрацеллюлярных кристаллов и
воздействию высоких концентраций солей. При проведении криоконсервирования эмбрионов
очень важно сделать правильный выбор криопротектора и его концентрации, оптимального режима замораживания и оттаивания. При несоблюдении каждого из перечисленных
условий высокая концентрация солей, обусловленная потерей воды, вызывает нарушение
BY 9315 C1 2007.06.30
проницаемости клеточных мембран, клетка не успевает регулировать осмотическое равновесие, в результате чего зародыш подвергается осмотическому шоку. Неправильный
выбор скоростей охлаждения служит причиной необратимых процессов, возникающих на
микромолекулярном уровне: изменению рН в эндоцеллюлярной жидкости, что приводит к
денатурации белковых молекул; разрушению связанной воды и сжатию клеток, деформации мембран и инактивации ферментов; спонтанному образованию больших кристаллов
льда, что является следствием разрыва цитоплазматических мембран, мембран клеточных
органелл и протеиновых гелей. Результатом всех этих негативных процессов является гибель клетки [1].
Известен способ криоконсервирования эмбрионов крупного рогатого скота, включающий насыщение зародышей криопротектором, помещение их в программный охладитель с длительным процессом замораживания и перемещением в жидкий азот для
хранения при - 196 °C [2].
Недостатком данного способа является длительность процесса насыщения биоматериала криопротектором, продолжительное замораживание (от 40 до 50 мин в зависимости
от цикла замораживания и программного устройства), необходимость наличия автоматического замораживающего устройства с обязательным источником питания, из-за чего
криоконсервирование эмбрионов не может быть осуществлено в полевых условиях в случаях внезапного отключения источников электроэнергии.
Задача изобретения - повышение эффективности криоконсервирования эмбрионов в
биотехнологии трансплантации зародышей крупного рогатого скота.
Сущность изобретения. Способ глубокого замораживания эмбрионов крупного рогатого скота, который предусматривает насыщение зародышей криопротектором, охлаждение в парах жидкого азота и погружение в жидкий азот при температуре - 196 °C. Причем
эмбрионы помещают на 3 мин в первую среду с криопротектором, затем - на 50-60 с во
вторую среду с криопротектором, затем переносят в пайетту, на 60 с помещают в пары
жидкого азота и погружают в жидкий азот. При этом первую среду готовят путем доведения 1 мл химически чистого глицерина до 10 мл фосфатно-солевым буфером Дюльбекко с
добавлением 4 г/л бычьего сывороточного альбумина, 12 мкг/мл гентамицина и 100 ед/мл
ампициллина, вторую - путем смешивания 3 мл химически чистого глицерина, 1,5 мл химически чистого диметилсульфоксида и 0,5 мл поливидона. Доводят смесь до 10 мл фосфатно-солевым буфером Дюльбекко с теми же добавками.
Способ осуществляют следующим образом. Готовят первую защитную среду (10 %
раствора глицерина). Для этого отмеряют 1 мл химически чистого глицерина и доводят
раствор до 10 мл фосфатно-солевым буфером Дюльбекко, приготовленным ранее с добавлением бычьего сывороточного альбумина (4 г/л), гентамицина (12 мкг/мл) и ампициллина (100 ед/мл).
Готовят вторую защитную среду. Для этого отмеряют 3 мл химически чистого глицерина, 1,5 мл химически чистого диметилсульфоксида, 0,5 мл раствора поливидона, смешивают компоненты и доводят раствор до 10 мл фосфатно-солевым буфером Дюльбекко,
приготовленным так, как указано выше. Затем эмбрионы помещают в заранее приготовленную первую защитную среду на 3 мин, далее - во вторую защитную среду на 50-60 с. Переносят эмбрионы в пайетту, помещают ее в пары жидкого азота на 60 с и далее
погружают в жидкий азот при температуре -196 °С.
Для определения эффективности предлагаемого способа был проведен научнопроизводственный опыт. После извлечения зародыши отличного и хорошего качества на
стадии морулы и бластоцисты были отобраны для замораживания. Было сформировано
две группы эмбрионов - опытная (n = 34) и контрольная (n = 38), однородные по качественному и возрастному составу. Опытный биоматериал был заморожен в витрификационной среде, содержащей глицерин, диметилсульфоксид, поливидон и фосфатно-солевой
буфер Дюльбекко с добавлением бычьего сывороточного альбумина, гентамицина, ампи2
BY 9315 C1 2007.06.30
циллина, без программного замораживателя, после хранения оттаян и пересажен реципиентам (n = 34) без промежуточной оценки (прямая пересадка). Контрольные эмбрионы
были насыщены стандартной защитной средой - 1,5 М раствором этиленгликоля в течение
10 минут, заправлены в пайетты и заморожены на программном замораживателе "ЭМБИК" (Россия) до -30 °C с последующим переносом в жидкий азот. Продолжительность цикла криоконсервирования - 40 минут. После хранения пайетты были оттаяны аналогичным
образом, заправлены в катетер, и эмбрионы без морфологической оценки были пересажены тёлкам-реципиентам (n = 38). Животные находились в равных условиях кормления и
содержания. Результаты опыта приведены в таблице.
Группы эмбрионов
Показатели
Заморожено и оттаяно эмбрионов, n
Сделано эмбриопересадок
Количество стельных реципиентов, гол. - %
Продолжительность криоконсервирования
(от начала насыщения до помещения в жидкий азот), мин.
Необходимость наличия замораживающего устройства
Контрольная
38
38
18-47,4
Опытная
34
34
15-44,1
50
6
Да
Нет
Таким образом, предложенный способ позволяет сократить в 15 раз затраты времени
на криоконсервирование биоматериала без существенного снижения результативности
пересадок, выполнять трансплантацию в условиях производства, отпадает необходимость
в приобретении дорогостоящих замораживающих устройств с повышением эффективности технологии трансплантации в целом.
Источники информации:
1. Криоконсервирование эмбрионов крупного рогатого скота: Метод. рекомендации. –
Жодино, 1997.
2. Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 190-195.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
75 Кб
Теги
by9315, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа