close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9328

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2007.06.30
(12)
(51)7 A 61K 31/195,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61P 31/22
ПРИМЕНЕНИЕ 5-АМИНОЛЕВУЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ
В КАЧЕСТВЕ ПРОТЕКТИВНОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ ВИРУСА
ГЕРПЕСА И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ КЛЕТОК
К ВИРУСУ ГЕРПЕСА
(21) Номер заявки: a 20031228
(22) 2003.12.26
(43) 2005.06.30
(71) Заявители: Государственное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии"
Министерства здравоохранения Республики Беларусь; Государственное
научное учреждение "Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси"
(BY)
(72) Авторы: Вотяков Вениамин Иосифович; Лобанок Елена Станиславовна;
Квачева Зинаида Болеславовна; Шуканова Наталия Андреевна; Воробей
Александр Васильевич; Николаева
Светлана Николаевна; Титов Леонид
Петрович (BY)
BY 9328 C1 2007.06.30
BY (11) 9328
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатели: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения
Республики Беларусь; Государственное научное учреждение "Институт
биофизики и клеточной инженерии
Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) US 6323012 B1, 2001.
WO 95/17893 A1.
RU 2160587 C1, 2000.
(57)
1. Применение 5-аминолевулиновой кислоты в качестве протективного средства для
культуры клеток против вируса герпеса.
2. Способ повышения резистентности культуры клеток к вирусу герпеса путем инкубирования монослоя клеток с протективным средством с последующей отмывкой клеток,
отличающийся тем, что в качестве протективного средства используют 5-аминолевулиновую кислоту.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что клетки инкубируют с 5-аминолевулиновой
кислотой 1,5 часа.
Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии, и может применяться в
качестве протективного средства против вируса герпеса и повышать резистентность клеток к вирусу герпеса.
Известны препараты интерферона, являющиеся протективными средствами - повышающими резистентность клеток к вирусам [1]. Их недостатком является трудоемкость и
сложность наработки больших количеств препаратов, необходимость использования компонента - индуктора интерферона, способность подавлять репродукцию вирусов лишь при
BY 9328 C1 2007.06.30
небольшой множественности инфицирования, низкая эффективность при больших дозах
вируса, видовая и тканевая специфичность (малая активность в гетерологичных системах).
Задачей изобретения является поиск новых, более эффективных, доступных, клинически апробированных средств, обеспечивающих резистентность клеток к вирусу герпеса, в
том числе устойчивых к специфическим (официнальным) лечебным средствам (ацикловиру и фосфоноуксусной кислоте), эффективных при высоких дозах инфицирования, активных в разных гетерологичных системах.
Задача решается тем, что в качестве протективного средства против вируса герпеса
для культуры клеток применяют 5-аминолевулиновую кислоту (АЛК).
Известно использование АЛК в качестве предшественника промежуточного продукта
синтеза гема - протопорфирина, способного сенсибилизировать фотоинактивацию вирусинфицированных и злокачественно трансформированных клеток [2, 3]. Однако в качестве препарата протективного действия против вируса герпеса (повышение резистентности
клеток к вирусным инфекциям) ее применение не известно.
Известен способ повышения резистентности клеток к вирусам [4], заключающийся в
том, что монослой гомологичных клеток обрабатывают интерфероном (протективное
средство повышения резистентности клеток к вирусам), инкубируют (7-24 часа), отмывают от интерферона, на монослой клеток вносят вирус в дозе 10 БОЕ/кл., инкубируют, отмывают от неадсорбированного вируса, добавляют ростовую среду, инкубируют, через 18
часов после заражения собирают культуральную жидкость и определяют титр вируса.
Уровни резистентности оценивают по разнице титров вируса в необработанных и обработанных интерфероном культурах клеток и выражают в lg БОЕ/кл.
Недостатком известного способа является его длительность, малая эффективность при
больших дозах вируса (10 БОЕ/кл.), выраженная тканевая специфичность, подавление
титра вируса не более 2,5 lg БОЕ/клетку.
Задачей изобретения является сокращение времени обработки клеток для развития резистентности, повышение уровня резистентности (ингибирование репродукции вируса герпеса
при больших дозах инфицирования), преодоление видовой и тканевой специфичности.
Результат достигается тем, что в способе повышения резистентности культуры клеток
к вирусу герпеса путем инкубирования монослоя клеток с протективным средством с последующей отмывкой клеток, в качестве протективного средства используют 5аминолевулиновую кислоту. В предпочтительном варианте изобретения клетки инкубируют с 5-аминолевулиновой кислотой 1,5 часа.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
На монослой эпителиальных клеток почки зеленой мартышки Vero вносят АЛК в дозе
0,6 мМ, инкубируют при 37 °С в течение 1,5 часа, отмывают питательной средой Игла,
заражают вирусом простого герпеса (ВПГ-1), вариантом, резистентным к ацикловиру в
дозе 10 БОЕ\кл. Через 24 часа после заражения собирают культуральную жидкость и определяют в ней титр вируса. Снижение титра вируса на 3,5 lg/БОЕ/кл.
Пример 2.
Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, резистентным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 lg/БOE/кл.
Пример 3.
Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к ацикловиру. Снижение титра вируса на 3,8 lg/БОЕ/кл.
Пример 4.
Манипуляции, описанные в примере 1, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 4,0 lg/БОЕ/кл.
2
BY 9328 C1 2007.06.30
Пример 5.
На монослой клеток глиомы крысы С6 вносят АЛК в дозе 0,6 мМ, инкубируют при
37 °С в течение 1,5 часа, отмывают питательной средой Игла, заражают ВПГ-1, вариантом, резистентным к ацикловиру в дозе 10 БОЕ\кл. Через 24 часа после заражения собирают культуральную жидкость и определяют в ней титр вируса. Снижение титра вируса
на 4,0 lg/БОЕ/кл.
Пример 6.
Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, резистентным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 lg/БOE/кл.
Пример 7.
Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1, чувствительным к ацикловиру. Снижение титра вируса на 4,2 lg/БОЕ/кл.
Пример 8.
Манипуляции, описанные в примере 5, выполняли с вариантом вируса ВПГ-1 чувствительным к фосфоноуксусной кислоте. Снижение титра вируса на 3,5 lg/БОЕ/кл.
Сравнительные уровни резистентности клеток, вызванные АЛК и интерфероном к вирусам, представлены в таблице.
Препарат
Время обработки (час)
Интерферон (прототип)
1,5
АЛК
1,5
* - доза заражения - 10 БОЕ/кл.
Снижение титра вируса* Lg БОЕ/кл.
1,0-1,5
3,5-4,2
Как видно из данных, представленных в таблице, предлагаемое протективное средство АЛК обеспечивает больший эффект резистентности клеток к вирусу герпеса по сравнению с прототипом.
Таким образом, предлагаемое средство обеспечивает и способ позволяет достичь более
значительной резистентности клеток к вирусным инфекциям, эффективности при высоких
дозах инфицирования, активны в разных гетерологичных системах (активность которых
не зависит от видовой и тканевой специфичности), сокращения времени обработки клеток
для развития резистентности чувствительных и устойчивых к лекарственным препаратам
вариантам вируса герпеса.
Источники информации:
1. Садыков А.С. и др. Индукторы интерферона. "ФАН" Узбекской ССР. - Ташкент,
1978. - С. 16-17.
2. Karrer S., Szeimies R.-M., Abels C. et al. Epidermodysplasia verruciformis treated using
topical 5-aminolaevulinic acid photodynamic therapy // British J. Dermatology. - 1999. - 140. P. 935-938.
3. Li W., Zhang W.J., Ohnishi K. et al. 5-Aminolaevulinic acid-mediated photodynamic
therapy in multidrug resistant leukemia cells // J. Photoch. Photobiol.B: Biology. - 2001. - 60. P. 79-86.
4. Садыков А.С. и др. Индукторы интерферона. "ФАН" Узбекской ССР. - Ташкент,
1978. - С. 18.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
74 Кб
Теги
by9328, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа