close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9359

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2007.06.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 9359
(13) C1
(19)
G 01N 33/48
СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭПИЛЕПТИФОРМНОЙ
АКТИВНОСТИ НЕЙРОНОВ В СРЕЗАХ ГИППОКАМПА
ГОЛОВНОГО МОЗГА ЛАБОРАТОРНОГО ЖИВОТНОГО
(21) Номер заявки: a 20041228
(22) 2004.12.24
(43) 2006.06.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Гаркун Юрий Сергеевич;
Денисов Андрей Анатольевич; Молчанов Павел Геннадьевич; Чичкан
Дмитрий Николаевич; Черенкевич
Сергей Николаевич; Кульчицкий
Владимир Адамович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(56) FISHER R.S. Brain Research Reviews. 1989. - V.14. - No.3. - P. 245-254.
US 5698766 A, 1997.
BY 9359 C1 2007.06.30
(57)
Способ моделирования эпилептиформной активности нейронов в срезах гиппокампа
головного мозга лабораторного животного, отличающийся тем, что срезы гиппокампа
перфузируют раствором кинуреновой кислоты в концентрации 10-3-10-5 моля.
Изобретение относится к медицине, к разделу клиническая и экспериментальная нейрофизиология.
Известен способ моделирования эпилептиформной активности нейронов в срезах гиппокампа головного мозга лабораторных животных путем перфузии срезов раствором, содержащим субстанцию, моделирующую активность глутаматных рецепторов, в данном
случае агонист глутаматных рецепторов (каинат). Указанный способ является прототипом
по отношению к заявляемому [1].
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является использование раствора, содержащего субстанцию, моделирующую активность глутаматных рецепторов в
срезах тканей.
Однако в связи с тем, что в способе-прототипе в качестве такой субстанции используют агонист глутаматных рецепторов (каинат), который селективно активирует глутаматные рецепторы (что и обусловливает при условии "чрезмерной" активации рецепторов
формирование эпилептиформной активности), это является существенным ограничением
для скрининговой верификации эффективности противоэпилептических препаратов, действие которых основано на механизмах, отличающихся от тех, которые ведут к блокаде
"чрезмерной" активации глутаматных рецепторов. В частности, тех механизмов, которые
сопровождаются формированием эпилептиформной активности в условиях блокады глу-
BY 9359 C1 2007.06.30
таматных рецепторов. Фактически сложившаяся ситуация с отсутствием адекватных моделей эпилептиформной активности является одной из причин научно обоснованного
скрининга новых антиэпилептических препаратов и, как следствие этого, отсутствия радикального решения проблемы эффективной терапии эпилепсии. Суть в том, что эпилепсия является полиэтиологичным заболеванием, и формирование эпилептиформной
активности может происходить не только при активации глутаматных рецепторов, но и
при их блокаде. Следовательно, для скрининга новых противоэпилептических препаратов
необходимо формировать не одну, а разнообразные модели, учитывающие современные
представления о патогенезе эпилепсии. В способе-прототипе используется только один
прием моделирования эпилептиформной активности (активации глутаматных рецепторов
с помощью каината). Он не позволяет учесть другой механизм формирования эпилептиформной активности, проявляющийся при блокаде глутаматных рецепторов. Таким образом, назрела необходимость формирования модели эпилептиформной активности,
основанной на применении антагониста глутаматных рецепторов с целью верификации
эффективности противоэпилептических препаратов, действие которых направлено на устранение эпилептиформной активности в условиях блокады глутаматных рецепторов. В
связи с этим предлагается новый способ моделирования эпилептиформной активности,
основанный не на активации глутаматных рецепторов, а на их блокаде.
Задачей заявляемого способа является расширение возможностей скрининга антиэпилептических препаратов.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ моделирования эпилептиформной активности нейронов в срезах
гиппокампа головного мозга лабораторных животных, когда срезы гиппокампа перфузируют раствором кинуреновой кислоты в концентрации 10-3 - 10-5 моля.
Пример.
Берут подготовленные по стандартной методике срезы гиппокампа[2], которые перфузируют раствором цереброспинальной жидкости, содержащим антагонист глутаматных
рецепторов в концентрации 10-3 - 10-5 моля. В качестве антагониста используют ионотропный антагонист рецепторов возбуждающих аминокислот (кинуреновая кислота, Sigma,
K-3375., Lot # 122К3745).
Через 1-1,5 мин после начала перфузии срезов гиппокампа раствором кинуреновой
кислоты в концентрации 10-5 моля происходит уменьшение амплитуды и продолжительности вызванных ответов в пирамидальных нейронах вблизи субикулюм гиппокампа в
ответ на оба парных стимула. Через три минуты (в частности, на рисунке на 168-й с наблюдения) амплитуда возбуждающих постсинаптических потенциалов уменьшается
вдвое. Однако в межстимульные интервалы (в проведенных опытах величина интервалов
составляла 3 с) появляется спонтанная электрическая активность, которая не регистрировалась в срезах мозга до перфузии срезов гиппокампа раствором кинуреновой кислоты.
Факт появления спонтанной электрической активности в межстимульные интервалы и
форма волн (пик-волна) соответствуют критериям судорожной активности мозга. Для
предотвращения формирования такой активности в межстимульные интервалы в связи с
естественной иррадиацией разрядов, вызванных гигантскими пирамидальными нейронами
на уровне зубчатой фасции гиппокампа, в период подготовки срезов к эксперименту необходимо осуществлять перерезку коллатералей Шаффера между областями гиппокампа.
После перерезки связей между областями гиппокампа условием формирования эпилептиформной активности в гиппокампе является лишь перфузия срезов гиппокампа раствором
антагониста рецепторов возбуждающих аминокислот (кинуреновой кислотой), фигура, где
показаны особенности вызванных ответов в СА1 области гиппокампа (Б, В) при раздражении коллатералей Шаффера (А) при перфузии модулятора активности глутаматных рецепторов (кинуреновой кислоты, 10-5 моля). Следовательно, получаем спонтанную
активность, вызванную антагонистом глутаматных рецепторов.
2
BY 9359 C1 2007.06.30
Таким образом, способ позволяет осуществлять скрининг существующих антиэпилептических препаратов дифенина, фенобарбитала, финлепсина и т.д. и проверять эффективность вновь создаваемых антиэпилептических препаратов, основанных на принципе
модуляции функционального состояния глутаматных рецепторов.
Источники информации:
1. Fisher R.S. Brain Research Reviews. - 1989. - V. 14. - No 3. - P. 245-254.
2. Митюшов М.И., Емельянов Н.А., Мокрушин А.А., Войнев И.А., Багаева Т.Р. Переживающий срез мозга как объект нейрофизиологического и нейрохимического исследования / Под ред. М.И. Митюшова. - Л.: Наука, 1986. - С. 6-14.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
96 Кб
Теги
by9359, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа