close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY9828

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2007.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 9828
(13) C1
(19)
C 12N 1/20
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ
ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ КИШЕЧНОГО ИЕРСИНИОЗА ИЛИ
ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА
(21) Номер заявки: a 20050114
(22) 2005.02.07
(43) 2006.10.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Титов Леонид Петрович;
Ермакова Татьяна Сергеевна; Паньшина Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения
Республики Беларусь (BY)
(56) RU 2101342 C1, 1998.
RU 2002126900 A, 2004.
RU 2167940 C2, 2001.
BY 9828 C1 2007.10.30
(57)
Дифференциальная питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза или псевдотуберкулеза, содержащая хлористый натрий, желчь, глюкозу, мочевину,
бромтимоловый синий, агар и воду дистиллированную, отличающаяся тем, что дополнительно содержит пептон сухой ферментативный, дрожжевой экстракт, сернокислый магний, хлористый кальций, маннит, ксилозу, бриллиантовый зеленый при следующем соотношении компонентов:
пептон сухой ферментативный, г
дрожжевой экстракт, г
хлористый натрий, г
сернокислый магний, г
хлористый кальций, г
желчь крупного рогатого скота сухая, г
глюкоза, г
маннит, г
ксилоза, г
мочевина, г
бромтимоловый синий, г
бриллиантовый зеленый, г
агар, г
вода дистиллированная, л
8,90-10,00
0,80-1,20
0,80-1,20
0,07-0,11
0,90-1,00
9,00-11,00
4,50-5,50
4,50-5,50
2,00-3,00
3,50-4,50
0,09-0,10
0,01
11,0-13,0
до 1,00.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано
при диагностике кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза.
BY 9828 C1 2007.10.30
Известны питательные среды ведущих зарубежных фирм "Merck", "Bilife" и др. для
выделения и первичной дифференциации Yersinia enterocolitica (Yersinia Selective Agar,
С IN Agar Base, Yersinia Selective Enrichment Broth) на основе мясных и дрожжевых экстрактов, пептона из мяса, желчи [1-3]. Недостатком известных сред является хороший
рост на них колоний Proteus spp, которые имитируют рост Yersinia, что искажает результат. Немаловажным недостатком является экономическая недоступность указанных сред.
Наиболее близким аналогом, принятым за прототип предлагаемой нами среды, является дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей
кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза [4]. Она содержит следующие компоненты, г/л:
панкреатический гидролизат рыбной муки
20-25 (источник энергии)
желчь очищенная
3-5
глюкоза
8-12
мочевина
4,5-6,0
натрий хлористый
5-6 (солевая добавка)
бромтимоловый синий
0,12-0,13
агар микробиологический
10-12
вода дистиллированная
до 1 л, рН 7,8 ± 0,1.
Дифференцирующие свойства среды основаны на наличии в ее составе мочевины.
При воздействии уреазы иерсиний происходит гидролиз мочевины, и колонии, в зависимости от вида, в присутствии индикатора бромтимолового синего окрашиваются в синий
или голубой цвет.
Недостатком данной среды является хороший рост на ней Proteus spp и невозможность
отличить его от иерсиний, так как роение его подавлено, а колонии имеют синий цвет в
связи с наличием уреазы.
При конструировании питательных сред необходимо учитывать включение в них следующих основных частей: питательные вещества и минеральные соли для обеспечения
роста микроорганизмов, ингибиторы посторонней микрофлоры [5].
Поставленная задача решается тем, что питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза или псевдотуберкулеза, содержащая пептон, дрожжевой экстракт, манит, хлористый натрий, хлорид, сернокислый магний и воду дистиллированную,
дополнительно содержит хлористый кальций, желчь, глюкозу, ксилозу, мочевину и бриллиантовый зеленый при следующем соотношении компонентов:
пептон сухой ферментативный, г
8,90-10,00
дрожжевой экстракт, г
0,80-1,20
хлористый натрий, г
0,80-1,20
сернокислый магний, г
0,07-0,11
хлористый кальций, г
0,90-1,00
желчь крупного рогатого скота сухая, г
9,00-11,00
глюкоза, г
4,50-5,50
маннит, г
4,50-5,50
ксилоза, г
2,00-3,00
мочевина, г
3,50-4,50
бриллиантовый зеленый, г
0,01
дистиллированная вода, л
до 1.
Бактометрическую питательную среду готовили следующим образом. Навески компонентов, составляющих питательную основу (базовую среду), тщательно перемешивают в
1 л дистиллированной воды. Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 110 °C.
Контрольной средой являлся Yersinia Selective Enrichment Broth (Merck).
Бактометрические исследования проводили с помощью автоматизированной системы
"Bactometer" (bioMerieux Vitek Inc.) согласно инструкции [6]. Инкубацию проводили при
температуре 25 °С в течение 48 часов. Получали графические изображения динамики рос2
BY 9828 C1 2007.10.30
та культур и определяли цифровые показатели, характеризующие процесс: время начала
роста, время достижения максимума, максимум изменений. Математический анализ ростовых свойств среды осуществляли по показателю площади под кривой роста микроорганизмов (принимали за 100 % площадь роста бактерий в прототипной среде).
Бактерии Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, Proteus mirabilis, E.coli,
Staphylococcus aureus из коллекции лаборатории клинической и экспериментальной микробиологии НИИЭМ.
Пример 1
Для приготовления среды берут следующие навески ингредиентов, г:
пептон сухой ферментативный
8,8
дрожжевой экстракт
0,8
хлористый натрий
0,8
сернокислый магний
0,07
хлористый кальций
0,8
желчь крупного рогатого скота сухая
8,8
глюкоза
4,3
маннит
4,3
ксилоза
1,8
мочевина
3,0
бриллиантовый зеленый
0,01
вода дистиллированная
до 1 л.
Среду готовят следующим образом: навески тщательно перемешивают в 1 л дистиллированной воды. Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 110 °С.
Результаты биологического контроля представлены в таблице.
Пример 2
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон сухой ферментативный
9,0
дрожжевой экстракт
0,9
хлористый натрий
0,9
сернокислый магний
0,09
хлористый кальций
0,9
желчь крупного рогатого скота сухая
9,0
глюкоза
4,5
маннит
4,5
ксилоза
2,0
мочевина
3,5
бриллиантовый зеленый
0,01
вода дистиллированная
до 1 л.
Результаты биологического контроля представлены в таблице.
Пример 3
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон сухой ферментативный
10,0
дрожжевой экстракт
1,0
хлористый натрий
1,0
сернокислый магний
0,1
хлористый кальций
1,0
желчь крупного рогатого скота сухая
10,0
глюкоза
5,0
маннит
5,0
ксилоза
2,5
мочевина
4,0
3
BY 9828 C1 2007.10.30
бриллиантовый зеленый
0,01
вода дистиллированная
до 1 л.
Результаты биологического контроля представлены в таблице.
Пример 4
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон сухой ферментативный
10,0
дрожжевой экстракт
1,1
хлористый натрий
1,1
сернокислый магний
0,11
хлористый кальций
1,0
желчь крупного рогатого скота сухая
11,0
глюкоза
5,5
маннит
5,5
ксилоза
3,0
мочевина
4,5
бриллиантовый зеленый
0,01
вода дистиллированная
до 1 л.
Результаты биологического контроля представлены в таблице.
Пример 5
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон сухой ферментативный
11,2
дрожжевой экстракт
1,2
хлористый натрий
1,2
сернокислый магний
0,12
хлористый кальций
1,2
желчь крупного рогатого скота сухая
11,2
глюкоза
5,6
маннит
5,6
ксилоза
3,2
мочевина
4,7
бриллиантовый зеленый
0,01
вода дистиллированная
до 1 л.
Результаты биологического контроля представлены в таблице.
Таблица
Тест-штаммы
Предлагаемая среда по примеру
1
2
3
4
89,5 ± 0,8* 108,6 ± 0,8 109,7 ± 0,9 107,5 ± 0,7
5
79,6 ± 0,8
Yersinia enterocolitica
Yersinia pseudotubercu73,1 + 1,3 140,2 ± 1,2 143,1 ± 1,4 139,3 ± 2,2 63,4 ± 1,5
losis
Proteus mirabilis
65,5 ± 4,2 29,7 ± 2,6 21,6 ± 3,8 27,5 ± 2,9
51,8 ± 4,7
E.coli
24,6 ± 2,1
10,4 ± 1,6 Нет роста Нет роста Нет роста
Staphylococcus aureus
Нет роста Нет роста Нет роста Нет роста
Нет роста
* - цифры в таблице показывают % площади под кривыми роста, принимая за 100 %
площади под кривыми роста указанных бактерий на контрольной среде.
Данные бактометрических исследований показали способность предлагаемой среды,
при отсутствии развития кишечной палочки, обеспечивать рост Yersinia enterocolitica
109,66 ± 0,91 %, Yersinia pseudotuberculosis - 143,01 ± 1,29 %, Proteus mirabilis -21,58 ± 4,78 %,
принимая за 100 % площади под кривыми роста указанных бактерий на контрольной среде. Применение бактометра обеспечило достоверную количественную информацию о воздействии изменений в составе среды на динамику роста бактерий, что позволило подоб4
BY 9828 C1 2007.10.30
рать сочетание ингредиентов, обеспечивающее селективные преимущества для иерсиний
по сравнению с кишечной палочкой и протеем.
Количественное соотношение компонентов предлагаемой питательной среды обеспечивает хороший рост взятых из коллекции лаборатории клинической и экспериментальной микробиологии НИИЭМ Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, посредственный рост Proteus mirabilis при подавлении/отсутствии роста E.coli и Staphylococcus
aureus при посеве в лунку бактометра 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10-6 через
24 ч инкубации при (37 ± 1°)С.
Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к ухудшению
микробиологических показателей качества предложенной среды.
Таким образом, предлагаемая среда при использовании в бактометре обеспечивает
хороший рост иерсиний и позволяет дифференцироватьYersinia spp. от E.coli и Proteus
mirabilis.
Предлагаемая среда по сравнению со средой-прототипом имеет преимущество: возможность выявления роста иерсиний уже в первые 6 часов инкубации в лунках бактометра, что позволяет ускорить предварительный диагноз.
Источники информации:
1. Biolife Manual second edition, 1991.
2. Handbook Culture Media MERCK (1982).
3. The manual of microbiological culture media (Gibco BRL, 1988).
4. RU 2101342 C1, 1998.
5. Справочник по микробиологическим питательным средам / Под ред. М.М. Меджидова. - Махачкала: Дагестанское кн. изд-во, 1989. - С. 51.
6. Титов Л.П., Левкович Л.Б., Паньшина Е.Ф. Haltof К. Инструкция по автоматизированному определению общего числа бактерий, энтеро- и колиморфных бактерий в продуктах питания на бактометре bioMerieux Vitek Inc. - Минск, 1996. - С. 56.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
84 Кб
Теги
by9828, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа