close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10004

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2007.12.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 10004
(13) C1
(19)
A 61K 39/002
ШТАММ MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE
КМИЭВ №42 - ШТАММ-АНТИГЕН
(21) Номер заявки: a 20041177
(22) 2004.12.14
(43) 2006.06.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н. Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Тяпша Юрий Иванович;
Мистейко Михаил Михайлович;
Финогенов Артем Юрьевич; Андросик Николай Николаевич (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее
унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н. Вышелесского" (BY)
(56) SU 1397481 A1, 1988.
RU 2006037 С1, 1994.
BY 2785 С1, 1999.
BY 10004 C1 2007.12.30
(57)
Штамм Mycoplasma hyopneumoniae КМИЭВ № 42 - штамм-антиген.
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма,
предназначенного для конструирования набора для диагностики микоплазмоза свиней методом иммуноферментного анализа и вакцины против энзоотической пневмонии свиней.
Известен штамм Mycoplasma hyopneumoniae J 252934 АТСС коллекции организмов,
выращенный в среде Friis с рН-6,9 для обнаружения локализация ДНК Mycoplasma
hyopneumoniae в легких больных свиней [1].
Известно использование штамма Mycoplasma hyopneumoniae J ATCC коллекции организмов, который был выделен в среде Friis, состоящей из ППЛО бульона, дрожжевого
экстракта, лошадиной сыворотки и антибиотиков [2].
Однако эти известные штаммы обладают недостаточными ростовыми и иммуногенными свойствами.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение
штамма, обладающего лучшими ростовыми, иммуногенными свойствами и способного
сохранять их при многократных пересевах.
Поставленная задача достигается тем, что штамм Mycoplasma hyopneumoniae
(КМИЭВ № 42) выделялся из патматериала легких 72-х дневного поросенка, больного микоплазмозом спустя два часа после убоя с очагами серозно-катарального воспаления. Отбирали кусочки легких размером 4×5 см на границе пораженной и визуально нормальной
ткани и бронхиальные лимфоузлы. Их растирали в фарфоровой ступке с небольшим количеством кварцевого песка. К измельченной ткани добавляли физиологический раствор в
BY 10004 C1 2007.12.30
соотношении 1:5-1:10, пенициллин по 250-500 ЕД/мл и раствор уксуснокислого таллия до
конечной концентрации 1:2000. Суспензию встряхивали и выдерживали в течение одного
часа при комнатной температуре в затемненном месте. Затем центрифугировали при 1500
оборотов в минуту 15 минут для удаления крупных частиц тканей. Затем суспензию высевали в соотношении 1:10 в бульон и на агар, состоящие из ППЛО порошка, стерильной
лошадиной сыворотки, дрожжевого экстракта, глюкозы, пенициллина, содержащий
100000 ЕД/мл 2,5 мл/л и 5 %-ный раствор уксуснокислого таллия 5 мл/л,. рН -7,4-7,6.
Таксономическая принадлежность. Класс Mollicutes, род Mycoplasma, вид Hyopneumoniae.
Культурально-морфологические признаки. Mycoplasma hyopneumoniae на плотной питательной среде растет в виде мелких колоний без центрального уплотнения. Она ферментирует глюкозу и понижает рН жидкой среды, не расщепляет аргинин. На жидкой питательной среде рост наблюдается на 4-7 сутки в виде легкой опалесценции. Mycoplasma
hyopneumoniae окрашивается по методу Грамма в красно-розовый цвет, а по методу Романовского-Гимза в розово-фиолетовый. В мазке под иммерсионной системой микроскопа
Mycoplasma hyopneumoniae выглядит в виде мелких кокав, валов, палочек размером 150225 нм.
Физиолого-биохимические признаки. Для роста Mycoplasma hyopneumoniae оптимальной температурой является 37 °С, рН 7,4-7,6. Подвижность отсутствует. Факультативные анаэробы обладают укороченной электронтранспортной цепью, оканчивающейся
флавином и не содержащей, таким образом, хинонов и цитохромов. Каталазоотрицательные. Хемоорганотрофы как основной источник энергии используют сахара, для роста нуждаются в холестероле.
Цитологические признаки. Клетки лишены клеточной стенки и окружены только цитоплазматической мембраной.
Молекулярно-биологические признаки. Mycoplasma hyopneumoniae является возбудителем энзоотической пневмонии свиней. Доля G + C в ДНК варьирует от 23 до 40 мол. %
(Tm, Bd). Величина генома варьирует в диапазоне 5,0-9,0 × 108 Дальтон. Триплет UGA
считывается как кодон триптофана.
Маркерные признаки. Обладает катаболизмом глюкозы, восстанавливает тетразолин в
анаэробных условиях, вызывает кислотообразование.
Онкогенность. Штамм Mycoplasma hyopneumoniae не является онкогенным.
Данные о контаминации. Штамм Mycoplasma hyopneumoniae не контаминирован другими микроорганизмами.
Биотехнологическая характеристика. При производстве набора для диагностики микоплазмоза свиней методом иммуноферментного анализа и вакцины против микоплазмоза
свиней используются бактериальные клетки Mycoplasma hyopneumoniae. Концентрация
бактериальных клеток Mycoplasma hyopneumoniae в среде определяется с помощью стандартов мутности или методом последовательных разведений и подсчета колоний образующих единиц на ППЛО агаре. Количество микробных клеток на бульоне Мартена
должно быть 1×109-3×109 в 1мл по стандарту мутности или 2×106-3×106 колоний образующих единиц.
При длительном культивировании штамм Mycoplasma hyopneumoniae сохраняет полезные свойства.
Штамм Mycoplasma hyopneumoniae патогенен для свиней, обладает иммуногенными и
антигенными свойствами. Чувствителен к следующим антибиотикам: тиланик, фрадизин,
флорамфеникол, левомицетин, тетрациклин, макролиды, тиамулин, хлортетрациклин, энрофлон, спелинк.
2
BY 10004 C1 2007.12.30
Пример 1.
Штамм Mycoplasma hyopneumoniae - (КМИЭВ № 42) выращивали на основе среды
Мартена с мясной водой следующего состава.
Компоненты
(мл/л)
Среда Мартена
680,5
200
Стерильная сыворотка свиньи (стерилизация λ-лучами)
100
Экстракт дрожжевой (стерилизация λ-лучами)
40 %-ный раствор глюкозы
10
5 %-ный раствор уксуснокислого таллия
5
0,5 %-ный водный раствор фенолового красного
2
Раствор пенициллина, содержащий 100000 ЕД/мл
2,5
Для роста Mycoplasma hyopneumoniae оптимальной температурой является 37 °С,
рН 7,4-7,6. Рост наблюдается на 4-7 сутки.
Пример 2. Штамм Mycoplasma hyopneumoniae- (КМИЭВ № 42) выращивали на основе ППЛО бульона.
Компоненты
(мл/л)
ППЛО бульон
680,5
100
Стерильная сыворотка свиньи (стерилизация λ-лучами)
100
Стерильная сыворотка лошади (стерилизация λ-лучами)
100
Экстракт дрожжевой (стерилизация λ-лучами)
40 %-ный раствор глюкозы
10
5 %-ный раствор уксуснокислого таллия
5
0,5 %-ный водный раствор фенолового красного
2
Раствор пенициллина, содержащий 100000 ЕД/мл
2,5
Для роста Mycoplasma hyopneumoniae оптимальной температурой является 37 °С,
рН 7,4-7,6. Рост наблюдается на 4-6 сутки.
Источники информации:
1. Kwon,-D.; Chae,-C. Detection and localization of Mycoplasma hyopneumoniae DNA in
lungs from naturally infected pigs by in situ hybridization using a digoxigenin-labeled probe.
Vet-pathol. V. 36 (4), 1999. - Р. 308-313.
2. FRIIS, N.F.: Mycoplasma cultivated from the respiratory tract of Danish pig. Acta Vet.
Scand, 1972. - Р. 12, 69 - 79 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
72 Кб
Теги
by10004, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа