close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10247

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 10247
(13) C1
(19)
C 12N 7/00
ШТАММ AVIBIRNAVIRUS BURSITIS INFECTIOSA GALLINAE ШТАММ-АНТИГЕН
(21) Номер заявки: a 20050595
(22) 2005.06.15
(43) 2007.02.28
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н. Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Бирман Борис Яковлевич;
Насонов Игорь Викторович; Захарик Николай Владимирович; Полоз
Светлана Васильевна (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее
унитарное предприятие "Институт
экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского" (BY)
(56) Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни
животных. - М.: ВНИТИБП, 1998. С. 68-77.
RU 2127602 С1, 1999.
RU 2092555 С1, 1997.
RU 2127604 С1, 1999.
BY 10247 C1 2008.02.28
(57)
Штамм Avibirnavirus bursitis infectiosa gallinae КМИЭВ-13 - штамм-антиген.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к биотехнологии, и
касается штамма, выделенного от цыплят больных инфекционной бурсальной болезнью
(ИББ), обладающего высокой иммуногенностью, и может быть использовано для конструирования диагностических и профилактических препаратов при данном заболевании.
Известно использование штамма вируса инфекционной бурсальной болезни Си-1, который был выделен в культуре клеток почек куриных эмбрионов. Вирус накапливается
через 4 дня в титре 104,5 ТЦД50/мл [1].
Изучена возможность культивирования и титрования штамма DV86 вируса инфекционной бурсальной болезни, обладающего минорным протеидом V86, на перевиваемых
культурах клеток LSCE-BK. При этом ЦПД проявляется на 3-й день после заражения в
виде грануляции - круглые и набухшие клетки располагаются в монослое поодиночке или
в виде скоплений. Титр выделенного вируса на 4-й день после заражения составляет 106,0
ТЦД50/мл. Иммуногенность составляет 63 % [2].
Недостатками данных штаммов является то, что они не обладают достаточной иммуногенностью в условиях птицеводческих хозяйств Республики Беларусь, т.к. не совпадает
минорный протеид.
Задачей изобретения является получение штамма, обладающего стабильными свойствами и высокой иммуногенностью, который может быть использован для конструирования диагностических и профилактических препаратов.
Поставленная задача достигается тем, что штамм AVIBIRNAVIRUS BURSITIS INFECTIOSA GALLINAE - КМИЭВ-13 - штамм-антиген был выделен из бурс (фабрициевых
BY 10247 C1 2008.02.28
сумок) больных инфекционной бурсальной болезнью кур в 2001 году на птицефабрике
"Дубовляны" Минского района Минской области.
Таксономическая принадлежность. Семейство Birnaviridae, род Avibirnavirus.
Культурально-морфологические признаки. Вирионы представляют собой сферические
частицы, обладающие кубическим типом симметрии и состоящие из сердцевины и икосаэдрического капсида, построенного из 92 капсомеров, с диаметром без оболочки 55-65 нм.
Состоит из 4 главных полипептидов. Вирус культивируется в куриных эмбрионах свободных от материнских антител.
Молекулярно-биологические признаки. Вирион содержит 6 белков:
VP1, с молекулярной массой 94 кД, является РНК-зависимой РНК-полимеразой и взаимодействует с геномными сегментами;
VPх с молекулярной массой 62 кД - предшественник;
VP2 основной структурный белок с молекулярной массой 54 кД, ответственен за выработку вируснейтрализующих антител, является типоспецифическим антигеном;
структурный белок VP3 с молекулярной массой 32 кД, является группоспецифическим
антигеном;
VP4 с молекулярной массой 28 кД - вирусная протеаза;
VP13 - минорный полипротеид.
Периодичность пассирования на системе один раз в 2 месяца на 9-10-дневных СПФ
РЭК в разведении 10 по 0,2 мл на ХАО.
Маркерные признаки. РНК вирус в градиенте сахарозы седиментирует одним пиком с
константой 14S, на 95 % устойчива к действию РНК-азы.
Онкогенкость. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13 не является онкогенным.
Данные о контаминации. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ13 свободен от бактериальной и грибковой флоры.
Антигенная активность. При экспериментальном заражении серонегативной птицы
вызывает образование вируснейтрализующих антител. Антигенность данного штамма в
РН составляет 4 Iog2 и выше, биологическая активность - 10-4,5 ЭИД50/см3. Иммуногенность составляет 80 % и более.
Безвредность. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13 апатогенен для цыплят. Титр для РЭК 106,2 ЭИД50/мл.
Условия хранения. Штамм инфекционной бурсальной болезни птиц КМИЭВ-13 хранится в замороженном состоянии при - 20 °С в течение 2-х месяцев, в лиофилизированном
состоянии при температуре не выше + 4 °С - 2 года.
Устойчивость к физико-химическому воздействию. Вирус проявляет устойчивость
при обработке 20 %-м раствором хлороформа в течение 20 мин. При воздействии 1 %-ого
раствора фенола, формалина инактивация вируса наступает в течение 60 мин.
В кислой среде вирус проявляет большую устойчивость, по сравнению с щелочной.
Так, при экспозиции 30 мин и pH 7,3 вирус полностью сохраняет свою инфекционность,
при pH 2,0 он остается жизнеспособным в течение 1 ч, а при pH 12,0 он быстро инактивируется.
Условия консервации. Лиофильная сушка в защитной среде при температуре 2-4 °С
или в морозильнике при - 20 °С.
Вирулентность. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13 не вирулентен.
Иммуногенность. Иммуногенность штамма вируса инфекционной бурсальной болезни
КМИЭВ-13 составляет 80 %.
Чувствительность к антибиотикам. Устойчив к воздействию пенициллина и стрептомицина, но чувствителен к актиномицину.
2
BY 10247 C1 2008.02.28
1. Пример выделения штамма Avibirnavims bursitis infectiosa gallinae - КМИЭВ-13.
Штамм Avibirnavirus bursitis infectiosa gallinae КМИЭВ-13 выделяли из бурс (фабрициевых сумок) больных инфекционной бурсальной болезнью кур путем заражения куриных
эмбрионов в хориоаллантоисную полость.
Культивирование вируса проводили на фибробластах куриных эмбрионов с коллагеназой, через 3-7 дней наблюдали образование симпластов и вакуолизацию пораженных
клеток, а затем деструкцию монослоя.
2. Пример определения контроля контаминации штамма Avibirnaviras bursitis infectiosa
gallinae - КМИЭВ-13 вирусом инфекционного ларинготрахеита. Контроль отсутствия контаминации вирусом инфекционного ларинготрахеита проводили путем заражения штаммом инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13 5-ти эмбрионов кур 10-11-суточного
возраста на хориоаллантоисную оболочку (ХАО) в области искусственной пуги в объеме
0,2 см3. Время инкубации 168 ч в термостате при 37 °С. Ежедневно проводили овоскопию
эмбрионов. Погибшие эмбрионы с отметкой на них даты гибели помещали в холодильник
и хранили при температуре 2-6 °С до окончания опыта. Гибель эмбрионов в течение первых 24 ч после заражения считали не специфической и не учитывали. По истечении срока
инкубации оставшиеся в живых эмбрионы помещали на 6-8 часов в холодильник при температуре 2-6 °С. После этого все эмбрионы вскрывали и учитывали изменения: гиперемия
кожи и множественные очаги некроза ХАО.
3. Пример определения контроля контаминации штамма Avibirnavirus bursitis infectiosa
gallinae КМИЭВ-13 вирусом инфекционного бронхита кур. Контроль отсутствия контаминации вирусом инфекционного бронхита кур проводили путем заражения штаммом инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13 5-ти эмбрионов кур 9-суточного возраста в
аллантоисную полость в области естественной пуги в объеме 0,2 см3. Время инкубации
192 ч в термостате при 37 °С. Ежедневно проводили овоскопию эмбрионов. Дальнейшие
исследования проводили, как и в примере 2. После этого все эмбрионы вскрывали и учитывали изменения: отек головы, кровоизлияние на теле эмбриона, поражение печени и
почек.
4. Пример определения иммуногенной активности. Иммуногенную активность оценивали путем экспериментального заражения двукратно с интервалом 10 дней 20 иммунизированных цыплят в возрасте 14 суток. 10 цыплят оставалось в качестве контроля.
Иммуногенная активность составила 80 %.
Таким образом, штамм инфекционной бурсальной болезни КМИЭВ-13, обладая высокой иммуногенностью - 80 % (штамм вируса инфекционной бурсальной болезни DV86,
обладающего минорным протеидом V86 - прототип - 63 %) и стабильными биологическими свойствами (отсутствие контаминации), может быть использован для изготовления
диагаостикумов и вакцин в качестве штамма-антигена.
Источники информации:
1. Lim B.L., Cao Y.C., Yu T., Mo C.W. Adaptation of very virulent infectious bursal disease
virus to chicken embryonic flbroblasts by site - directed mutagenesis of residues 279 and 184 of
viral coat protein VP2 // J.virol. - 1999. - Vol.73. - № 4. - P. 2854-2863.
2. Сюрин В.Н., Самуиленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. - М.: ВНИТИБП, 1998. - С. 68-77 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
73 Кб
Теги
патент, by10247
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа