close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10290

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 10290
(13) C1
(19)
C 12N 5/06
СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НЕРВНОЙ ТКАНИ
НОВОРОЖДЕННОГО МЛЕКОПИТАЮЩЕГО
(21) Номер заявки: a 20051271
(22) 2005.12.20
(43) 2007.08.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Полукошко Елена Федоровна; Никандров Виталий Николаевич
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(56) BY a 20031061, 2005.
UA 58192 A, 2003.
SU 1454838 A1, 1989.
BY 10290 C1 2008.02.28
(57)
Способ культивирования нервной ткани новорожденного млекопитающего, включающий механическое и ферментативное дезинтегрирование ткани ганглия на отдельные
клетки с последующим нанесением полученной суспензии клеток на покрытое коллагеном покровное стекло и культивированием в синтетической питательной среде DMEM,
содержащей телячью эмбриональную сыворотку, отличающийся тем, что используют
питательную среду, содержащую 10 % телячьей сыворотки и дополнительно содержащую
фактор роста нервов в концентрации 100 нг/мл и супероксиддисмутазу в концентрации
10-8-10-7 М.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию диссоциированных нейронов симпатических ганглиев. Известен способ получения диссоциированной культуры нервной ткани для общебиологических исследований, а также для тестирования целого ряда нейротропных и других препаратов. Он заключается в том, что
стерильно извлеченные из организма животного ганглии подвергают механическому и
ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивают их в синтетической питательной среде DMEM (Dulbecc'o Modified Eagle's Medium,
США), содержащей 10 % телячьей эмбриональной сыворотки. Для лучшей выживаемости
и дифференцировки ткани симпатических ганглиев в питательную среду добавляют фактор роста нервной ткани [1].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому.
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является механическое и ферментативное дезинтегрирование ганглия и культивирование нервных клеток путем использования синтетической питательной среды и добавления к ней биологически активных веществ. Применяемая для получения культур телячья эмбриональная сыворотка, а
BY 10290 C1 2008.02.28
также фактор роста нервов позволяют получить зрелую, дифференцированную культуру
ткани краниального шейного ганглия, однако недостаточно активно способствуют первоначальной адгезии клеток к субстрату. Однако получаемые по этому способу клетки характеризуются недостаточно активной первоначальной адгезией к субстрату, а также выживаемостью и последующей дифференцировкой нейронов.
Задачей заявляемого способа является получение высокоорганизованной, дифференцированной культуры диссоциированных нейронов симпатических ганглиев, обладающих
высокой адгезивной способностью и выживаемостью. Поставленная задача достигается
тем, что предложен способ культивирования нервной ткани новорожденных животных
путем механического и ферментативного дезинтегрирования тканей ганглия на отдельные
клетки с последующим нанесением полученной суспензии на покрытые коллагеном покровные стекла и выращиванием их в синтетической питательной среде ДМЕМ, содержащей 10 % телячьей эмбриональной сыворотки и фактор роста нервов, причем в синтетическую питательную среду дополнительно вводят супероксиддисмутазу в концентрации
10-7-10-8 Моля (М).
Супероксиддисмутаза (СОД, O 2 • - O 2 • - оксидоредуктаза, КФ 1.15.1.1) - энзим, катализирующий реакцию диспропорционирования супероксидного радикала с образованием
перекиси водорода, играет важную роль в защите клетки от токсического действия избытка радикалов кислорода. Используемая эритроцитарная дисмутаза является Сu, Zn-содержащим белком [2].
Введение ее в питательную среду позволяет получить высокоорганизованные более
зрелые культуры диссоциированных нейронов краниального шейного ганглия.
Пример 1.
Выделяют краниальный шейный ганглий и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивают их в
синтетической питательной среде DMEM, содержащей 10 % телячьей эмбриональной сыворотки и 100 нг/мл фактора роста нервов.
В культуральную жидкость культуры ткани краниального шейного ганглия новорожденной крысы вносят асептически стерильно приготовленный раствор СОД в концентрации 10-7 М. С помощью светового микроскопа в 10 полях культуры спустя 1 сутки от начала культивирования визуально учитывают число прикрепившихся к коллагену
нейронов, а также количество нервных клеток, пустивших отростки.
До добавления ФРН (контроль) в 8 полях наблюдали по 10-15 прикрепившихся к коллагену клеток, 5-7 из которых выпускают отростки (нейриты).
После внесения ФРН + СОД (опыт) в 8 полях наблюдали 20-25 прикрепившихся к коллагену клеток, 10-15 из которых выпускают отростки (нейриты).
Пример 2.
Выделяют ганглий и подвергают механическому и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию на покрытые коллагеном покровные стекла или пластиковые чашки Петри и выращивают их в синтетической питательной среде DMEM, содержащей 10 % телячьей эмбриональной сыворотки и 100 нг/мл
фактора роста нервов.
В культуральную жидкость культуры ткани краниального шейного ганглия новорожденной крысы вносят асептически стерильно приготовленный раствор СОД в концентрации 10-8 М. С помощью светового микроскопа в 8 полях культуры спустя 1 сутки от начала культивирования визуально учитывают число прикрепившихся к коллагену нейронов, а
также количество нервных клеток, пустивших отростки.
2
BY 10290 C1 2008.02.28
До добавления ФРН (контроль) в 8 полях наблюдали по 10-15 прикрепившихся к коллагену клеток, 5-7 из которых выпускают отростки (нейриты).
После внесения ФРН + СОД (опыт) в 8 полях наблюдали 25-30 прикрепившихся к коллагену клеток, 15-20 из которых выпускают отростки (нейриты).
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет получить культуру ткани диссоциированного симпатического краниального
шейного ганглия новорожденной крысы с повышенными адгезивными свойствами, что
способствует последующему росту и дифференцировке клеток in vitro. Данный способ
может найти широкое применение в экспериментальной клеточной биологии и медицине.
Источники информации:
1. Руководство по культивированию нервной ткани. Методы. Техника. Проблемы. М., 1976. - С. 32-33 (прототип).
2. Фридович И. Свободные радикалы в биологии. - М.: Мир. - С. 272-308.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
74 Кб
Теги
by10290, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа