close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10696

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.06.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/295
A 61K 39/245
A 61K 39/15
A 61K 39/155
ТРЕХВАЛЕНТНАЯ ЖИВАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ ВАКЦИНА
ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ
ДИАРЕИ И ПАРАГРИППА-3 КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА,
СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ИММУНИЗАЦИИ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
(21) Номер заявки: a 20040924
(22) 2004.10.08
(43) 2006.04.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н.Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Красочко Петр Альбинович; Красочко Ирина Александровна; Ковалев Николай Андреевич;
Колоницкая Елена Григорьевна;
Жих Глафира Иосифовна; Иванова
Ирина Павловна; Кот Николай Игнатьевич (BY)
BY 10696 C1 2008.06.30
BY (11) 10696
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н.Вышелесского" (BY)
(56) Красочко П.А. и др. Ветеринарная наука - производству. - Мн.: Хата, 1999. С. 51-57.
Красочко П.А. и др. Актуальные проблемы патологии сельскохозяйственных животных. Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня
образования БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. - Мн.: Хата, 2000. - С. 115117.
RU 2111011 C1, 1998.
(57)
1. Трехвалентная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита,
вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота, содержащая смесь культуральных вируссодержащих жидкостей с инфекционными титрами 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл аттенуированных штаммов Infectious bovine rhinotracheitis virus КМИЭВ-6, Bovine viral
diarrhoea-mucosal disease virus КМИЭВ-7 и Bovine parainfluenza 3 virus КМИЭВ-8, взятых
в соотношении 1:1:1, сахарозу, желатин, пенициллин, стрептомицин и воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов:
смесь культуральных вируссодержащих жидкостей, об. %
80,0-90,0
сахароза, об. %
5,0-7,5
желатин, об. %
2,5-5,0
пенициллин, ЕД/мл
100,0-150,0
стрептомицин, мкг/мл
100,0-150,0
вода дистиллированная, об. %
остальное.
2. Способ получения трехвалентной живой культуральной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота по п. 1,
заключающийся в том, что аттенуированные штаммы Infectious bovine rhinotracheitis virus
BY 10696 C1 2008.06.30
КМИЭВ-6, Bovine viral diarrhoea-mucosal disease virus КМИЭВ-7 и Bovine parainfluenza 3
virus КМИЭВ-8 культивируют по отдельности на перевиваемой культуре клеток МДБК на
5 %-ном гемогидролизате, затем культуральные вируссодержащие жидкости с инфекционными титрами 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл смешивают в соотношении 1:1:1 и добавляют сахарозу, желатин, пенициллин, стрептомицин и воду.
3. Способ иммунизации крупного рогатого скота против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3, отличающийся тем, что вводят трехвалентную живую культуральную вакцину по п. 1 внутримышечно двукратно с интервалом в 21 день в
дозе по 3 мл.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к области получения
вакцин, и может быть использовано в профилактике вирусных респираторных инфекций
крупного рогатого скота.
Известны живые моновалентные вакцины против инфекционного ринотрахеита ТК-А
(ВИЭВ) В2 [1], вирусной диареи [2] и парагриппа-3 "Паравак" [3] крупного рогатого скота, которые изготовлены из аттенуированных штаммов ТК-А (ВИЭВ), ВК-1 № 28 и MBА
"1/77"). Накопление вирусов осуществляется на первично-трипсинизированных культурах
клеток почки эмбриона коровы (ПЭК) или тестикул бычка (ТБ) с использованием смеси
питательных сред 0,5 %-ного раствора лактальбумина гидролизата с 199. Иммунизация
телят проводится путем интраназального и подкожного введения.
Недостатком вышеуказанных вакцин является то, что культивирование вирусов проводится на первично-трипсинизированных культурах клеток, что затрудняет широкомасштабное изготовление из-за недостатка исходного материала (эмбрионов коровы или
тестикул бычков). Кроме того, недостатком их применения являются различные пути введения вакцин - интраназальное (ИРТ и ПГ-3) и подкожное (ВД), что приводит к затрудненному одновременному их использованию, а также удорожает профилактические
обработки и вызывает дополнительное стрессирование телят.
Известна бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота, позволяющая профилактировать инфекционный ринотрахеит и вирусную диарею [4].
Однако недостатком вакцины является то, что она позволяет профилактировать
только инфекционный ринотрахеит и вирусную диарею, но иммунитета к парагриппу-3
не создает, тогда как удельный вес парагриппа-3 в этиологии респираторных инфекций
молодняка достигает 65-85 %.
Известна бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3
крупного рогатого скота "Бивак" [5].
Однако недостатком этой вакцины является то, что она позволяет профилактировать
только инфекционный ринотрахеит и парагрипп-3, но иммунитета к вирусу диареи не создает, тогда как удельный вес вирусной диареи в этиологии респираторных инфекций молодняка достигает 75-90 %.
Известен способ получения вакцин против инфекционного ринотрахеита, вирусной
диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота, заключающийся в использовании первичных культур клеток почки эмбриона коровы или тестикул бычка [6, 7]. Культура клеток наращивается на ростовых и поддерживающих питательных средах - гидролизате
лактальбумина, среде Игла или среде 199.
Однако недостатком известного способа изготовления вакцин является то, что при использовании почек эмбрионов коров, полученных от стельных коров, имеющих высокую
степень инфицированности вирусами инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и
парагриппа-3, имеется опасность персистенции первичных клеток этими возбудителями.
Кроме того, при культивировании первичных клеток на ростовых и поддерживающих пи2
BY 10696 C1 2008.06.30
тательных средах - гидролизате лактальбумина, среде Игла или среде 199 - существенно
удорожается стоимость вакцин из-за высокой стоимости питательных сред.
Известны способы иммунизации против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота путем их интраназального или подкожного
введения [1, 2, 3].
Однако недостатком применения данных вакцин для иммунизации является то, что
при интраназальном их введении вакцина недостаточно орошает слизистую оболочку
верхних дыхательных путей и местный иммунитет имеет низкую напряженность, а подкожное введение вакцин не создает местный иммунитет, и эффективность использования
вакцин значительно снижается.
Задачей изобретения является разработка трехвалентной живой культуральной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота, совершенствование способа ее получения и способа иммунизации.
Поставленная задача достигается тем, что трехвалентная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного
рогатого скота, содержащая смесь культуральных вируссодержащих жидкостей с инфекционными титрами 5,0-5,5 lg TЦД 50/мл аттенуированных штаммов Infectious bovine
rhinotracheitis virus КМИЭВ-6, Bovine viral diarrhoea-mucosal disease virus КМИЭВ-7 и
Bovine parainfluenza 3 virus КМИЭВ-8, взятых в соотношении 1:1:1, сахарозу, желатин,
пенициллин, стрептомицин и воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов:
смесь культуральных вируссодержащих жидкостей, об. %
80,0-90,0
сахароза, об. %
5,0-7,5
желатин, об. %
2,5-5,0
пенициллин, ЕД/мл
100,0-150,0
стрептомицин, мкг/мл
100,0-150,0
вода дистиллированная, об. %
остальное.
В способе получения трехвалентной живой культуральной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота используемые аттенуированные штаммы Infectious bovine rhinotracheitis virus КМИЭВ-6, Bovine
viral diarrhoea-mucosal disease virus КМИЭВ-7 и Bovine parainfluenza 3 virus КМИЭВ-8
культивируют по отдельности на перевиваемой культуре клеток МДБК на 5 %-ном гемогидролизате, затем культуральные вируссодержащие жидкости с инфекционными титрами
5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл смешивают в соотношении 1:1:1 и добавляют сахарозу, желатин, пенициллин, стрептомицин и воду.
В способе иммунизации крупного рогатого скота против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 вводят трехвалентную живую культуральную вакцину внутримышечно двукратно с интервалом в 21 день в дозе по 3 мл.
Пример 1.
Для изготовления трехвалентной живой культуральной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота используются аттенуированные штаммы вирусов инфекционного ринотрахеита КМИЭВ-6, вирусной
диареи КМИЭВ-7 и парагриппа-3 КМИЭВ-8.
Штамм вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (Infectious bovine rhinotracheitis) получен Белорусским НИИЭВ им. С.Н.Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых
на новых ростовой и поддерживающей средах - гемогидролизате. Штамму присвоен номер: КМИЭВ-6. Штамм получен от теленка, больного бронхопневмонией, путем выделения на первичной культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК). Штамм хранится в
музее культур микроорганизмов БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского. Штамм имеет следующие свойства.
3
BY 10696 C1 2008.06.30
Культурально-морфологические свойства: ДНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 106-108 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, трипсина. Устойчив к колебаниям среды с величиной рН от 3,0 до 9,0. ЦПД наступает через 24-48 ч после
инокуляции и характеризуется округлением клеток зернистостью, разрушением монослоя.
Антигенная активность: вирус вызывает образование антител у телят и кроликов при
парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии при температуре -20 °С и ниже или в лиофилизированном + 4 °C. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК,
ПТ или первичной культуре клеток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 % гемогидролизата с добавлением 2 % сыворотки крови крупного
рогатого скота.
Штамм вируса диареи крупного рогатого скота (Bovine viral diarrhoea) получен Белорусским НИИЭВ им. С.Н.Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе
перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых на новых ростовой и поддерживающей средах - гемогидролизате. Штамму присвоен номер: КМИЭВ-7. Штамм получен
от теленка, больного пневмоэнтеритами, путем выделения на первичной культуре клеток
почки эмбриона коровы (ПЭК). Штамм хранится в музее культур микроорганизмов
БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского.
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: РНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 30-50 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, колебаниям среды с величиной рН от 3,0 до 9,0. Наиболее устойчив при рН 7,4. ЦПД наступает через 24-48 ч после
инокуляции и характеризуется округлением клеток зернистостью, разрушением монослоя.
Антигенная активность: вирус вызывает образование антител у телят и кроликов при
парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм вируса диареи крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии
при температуре -20 °С и ниже или в лиофилизированном - + 4 °С. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПТ или первичной культуре клеток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 %
гемогидролизата.
Штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота (Bovine parainfluenza 3 virus) получен Белорусским НИИЭВ им. С.Н.Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых на новых ростовой
и поддерживающей средах - гемогидролизате.
Штамму присвоен номер: КМИЭВ-8. Штамм получен от теленка, больного бронхопневмонией, путем выделения па первичной культуре клеток почки эмбриона коровы
(ПЭК). Штамм хранится в музее культур микроорганизмов БелНИИЭВ им. С.Н.Вышелесского.
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: РНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 120-300 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, колебаниям среды с величиной рН от 3,0 до 9,0. Наиболее устойчив при рН 6,8-7,5. ЦПД наступает через 48-72 ч
после инокуляции и характеризуется образованием синтиция и вакуолей и разрушением
монослоя.
Антигенная активность: вирус вызывает образование антител у телят и кроликов при
парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
4
BY 10696 C1 2008.06.30
Штамм вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии при температуре -20 °С и ниже или в лиофилизированном - + 4 °С. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПТ или первичной
культуре клеток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 %
гемогидролизата.
Пример 2.
Накопление вируссодержащей жидкости вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота проводят на культуре перевиваемых клеток МДБК, выращенной на питательной среде - 5 %-ном гемогидролизате с
добавлением 10 % сыворотки крови крупного рогатого скота. Заражение клеточного монослоя производят путем внесения расплодки маточной культуры вирусов не более 15
пассажа. При этом вирусы инфекционного ринотрахеита, диареи и парагриппа-3 крупного
рогатого скота культивируют отдельно. После 1,5-2-часового контакта вносят поддерживающую среду - 5 %-ный гемогидролизат. ЦПД вирусов проявляется через 24-48 ч. После
поражения свыше 75 % клеток на матрасах с зараженным монослоем их подвергают замораживанию с последующим титрованием.
Трехвалентная живая культуральная вакцина против инфекционного ринотрахеита,
вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота готовится путем объединения
монокомпонентов в соотношении 1:1:1 с инфекционным титром 5,0-5,5 ТЦД 50/мл. В
дальнейшем вакцина хранится в замороженном состоянии при -10-25 °С или лиофильно
высушивается в среде следующего состава:
смесь вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и
80-90
парагриппа-3 крупного рогатого скота в соотношении 1:1, об. %
сахароза, об. %
5,0-7,5
желатин, об. %
2,5-5,0
пенициллин, ЕД/мл
100,0-150
стрептомицин, мкг/мл
100,0-150
вода дистиллированная, об. %
до 100.
Пример 3.
Изучение оптимального соотношения монокомпонентов трехвалентной живой культуральной вирусвакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота проводили на телятах.
Для изучения оптимального соотношения монокомпонентов вирусов ИРТ, ВД и ПГ-3
крупного рогатого скота был проведен опыт на телятах 2-3-месячного возраста, которых
разделили на 5 групп, по 10 голов в группе, в условиях животноводческого комплекса
колхоза "Хотово" Столбцовского района Минской области. При этом изучался иммунный
ответ телят на введение трехвалентной вакцины при различном соотношении монокомпонентов - ИРТ:ВД:ПГ-3. Телятам опытной группы № 1 вводили соотношение вирусов 1:1:1,
телятам опытной группы № 2 - 2:2:2, телятам опытной группы № 3 - 2:2:1, телятам опытной группы № 4 - 1:1:2. Контрольным животным вводили изотонический раствор натрия
хлорида. В табл. 1 представлены результаты изучения выработки антител против ИРТ, ВД
и ПГ-3 в РНГА после иммунизации телят различными соотношениями монокомпонетов.
Результаты таблицы показывают, что при различных соотношениях монокомпонентов
у телят вырабатываются антитела против ИРТ, ВД и ПГ-3 крупного рогатого скота. Однако более высокий титр антител отмечен у телят, получавших по 2 дозы монокомпонентов.
Также отмечено, что при использовании соотношений 2:2:1 и 1:1:2 более высокий титр
антител был отмечен у животных, получавших по 2 иммунизирующие дозы каждого из
монокомпонентов. В этой связи на основании полученных результатов считаем, что в
трехвалентной вакцине необходимо использовать соотношения монокомпонентов 1:1:1
при их инфекционном титре 5,0 lg ТЦД 50/мл.
5
BY 10696 C1 2008.06.30
Пример 4.
Иммунизация телят трехвалентной живой культуральной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и прарагриппа-3 крупного рогатого скота сопровождается иммунологической перестройкой иммунной системы организма животных. Для
этого были проведены исследования по изучению антигенной активности и иммунологической перестройки организма телят после иммунизации трехвалентной живой культуральной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3
при сравнении с моновакцинами против ИРТ и ВД.
Соответствующие опыты проведены на 5 опытных группах телят, по 5-7 голов в
группе.
Телятам опытной группы № 1 вводилась трехвалентная живая культуральная вакцина
против ИРТ, ВД и ПГ-3 КРС по 3 мл интратрахеально двукратно с интервалом в 21 день
при инфекционных титрах вирусов по 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл. Телятам опытной группы № 2
вводилась моновалентная вакцина против ИРТ в дозе 1 мл при инфекционном титре вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл двукратно с интервалом в 21 день интратрахеально. Телятам
опытной группы № 3 вводилась моновалентная вакцина против ВД в дозе 1 мл при инфекционном титре вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл двукратно с интервалом в 21 день интратрахеально. Телятам опытной группы № 4 вводилась моновалентная вакцина против ПГ-3
в дозе 1 мл при инфекционном титре вируса 5,0-5,5 lg ТЦД 50/мл двукратно с интервалом
в 21 день интратрахеально. Контрольным телятам вводили по 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Для исследования была взята кровь до иммунизации,
через 4, 10, 21, 30, 45 и 60 дней после иммунизации. В крови изучали титр антител в
РНГА, динамику иммуноглобулинов Ig G и Ig М-классов, антигенсвязывающих клеток,
Т- и В-лимфоцитов, титр интерферона.
В табл. 2 представлены результаты изучения динамики антител к вирусам инфекционного ринотрахеита, диареи и парагриппа-3 в РНГА у телят, получавших отдельно монокомпоненты и трехвалентную вакцину против ИРТ, ВД и ПГ-3.
Из таблицы видно, что в результате иммунизации у телят происходило увеличение
титров антител уже начиная с 10 дня. У контрольных животных отмечалось увеличение
титров антител, однако он был значительно ниже, чем у иммунизированных животных.
В табл. 3 представлены результаты изучения динамики Т- и В-лимфоцитов у телят,
иммунизированных трехвалентной и моновакцинами в сравнительном аспекте.
Как видно из данных, представленных в таблице, иммунная система телят реагирует
на введение вакцин. Особенно характерно отмечается изменение Т-лимфоцитов и несколько меньше В-лимфоцитов.
В табл. 4 представлены результаты динамики антигенсвязывающих клеток у телят, иммунизированных различными вакцинами против ИРТ, ВД и ПГ-3 крупного рогатого скота.
Результаты таблицы свидетельствуют о том, что у телят после введения трехвалентной и моновакцин значительно возрастает количество антигенсвязывающих клеток. При
этом значительной разницы в количестве антигенсвязывающих клеток у телят, получавших моновакцины и трехвалентную вакцину в различных соотношениях, не отмечено.
Это свидетельствует о том, что между монокомпонентами трехвалентной вакцины конкуренции антигенов не имеется.
Пример 5.
Иммуногенность вакцины проверена на 12 кроликах, которых разделили на 4 группы
(3 опытные и 1 контрольная, по 3 животных в группе). Им вводилось по 1, 3 и 5 доз вакцины двукратно подкожно. Через 14 дней после второй иммунизации была взята кровь
для определения титра вируснейтрализующих антител. После постановки реакции нейтрализации с сыворотками, полученными от иммунизированных кроликов, установлено,
что у кроликов, иммунизированных 1 дозой вакцины, титр антител к вирусу ИРТ был 1:4,
к вирусу диареи - 1:8, к вирусу ПГ-3 - 1:4. У животных, получавших по 3 дозы вакцины,
6
BY 10696 C1 2008.06.30
титр был к вирусу ИРТ - 1:8, ВД - 1:8, ПГ-3 - 1:8. У кроликов, получавших по 5 доз вакцины, титр антител был к вирусу ИРТ - 1:16, ВД - 1:32, ПГ-3 -1:16. Полученные данные свидетельствуют об иммуногенности вакцины и возможности использования кроликов для
оценки иммуногенности трехвалентной вакцины.
Пример 6.
Для проведения производственных испытаний трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота на телятах опыт
был поставлен в условиях животноводческих комплексов колхоза "Звезда" Витебского
района и "Рассвет" Зельвенского района. Исследования были проведены на телятах 1,5-3месячного возраста. Для этого были сформированы по 2 группы телят: в опытной - 820 и
550, в контрольной - 380 и 250 голов. Телята опытной труппы были иммунизированы
трехвалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита, диареи и парагриппа-3
крупного рогатого скота в дозе 3 мл внутримышечно двукратно с интервалом 21 день.
При проведении производственных испытаний трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота на коровах опыт
был поставлен на 2-х молочно-товарных фермах колхозов "Хотово" Столбцовского и
"Кушляны" Сморгонского районов. Исследования были проведены на стельных коровах
3-8-летнего возраста во второй половине стельности. Для этого было сформировано по 2
группы коров: в колхозе "Кушляны" - 400 голов опытных и 260 контрольных животных, в
Колхозе "Хотово" - 300 опытных и 150 контрольных животных. Коровы опытной группы
были иммунизированы трехвалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита,
диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота в дозе 3 мл внутримышечно в области
шеи ближе к предлопаточному лимфоузлу двукратно с интервалом 21 день. Животным
контрольных групп вакцина не вводилась. За животными проводился учет их клинического состояния. При этом учитывались заболеваемость и отход родившихся телят. Об эффективности вакцины для коров судили по сохранности полученного потомства. Для
контроля иммуногенности у 10 животных каждой из групп будет взята кровь до иммунизации, через 10, 21, 30 и 45 дней. В крови был изучен титр антител в реакции непрямой
гемагглютинации (ИРТ, ВД и ПГ-3), а также в реакции задержки гемагглютинации с эритроцитами морской свинки (ПГ-3).
В табл. 5 и 6 представлены результаты производственных испытаний трехвалентной
вакцины на коровах и телятах.
После иммунизации телят в условиях животноводческих комплексов заболеваемость с
признаками пневмоэнтеритов составляла or 4,3 до 11,4 %, тогда как в группе неиммунизированных телят заболеваемость была 95,5- 97,1 %. В опытных группах телят падежа и вынужденного убоя не было, а в контрольной - отход составлял от 7,1 до 14,5 %.
У телят, полученных от иммунизированных коров, с признаками пневмоэнтеритов заболевало от 5,9 до 7,1 % животных, отход составлял oт 0,88 до 2,1 %. Среди телят, полученных от неиммунизированных коров, заболеваемость составляла от 77,9 до 90,8 %,
отход от 8,3 до 11,4 %.
Таким образом, производственные испытания трехвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота показали, что сконструированная вакцина является высокоиммуногенным биопрепаратом,
способствует активному биосинтезу противовирусных антител, позволяет достичь высокой профилактической эффективности при ее применении как на телятах, так и на коровах. Профилактическая эффективность вакцины на телятах составляла 95,7 %, на коровах 92,9 %.
Для контроля иммуногенности у 10 животных каждой из групп была взята кровь до
иммунизации, через 10, 21, 30 и 45 дней. В крови изучен титр антител в реакции непрямой
гемагглютинации (для ИРТ и ВД) и реакции задержки гемагглютинации с эритроцитами
морской свинки (ПГ-3) (табл. 7 и 8).
7
BY 10696 C1 2008.06.30
Проверка уровня поствакцинальных антител у коров и телят после иммунизации трехвалентной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа3 крупного рогатого скота показала, что биосинтез антител ко всем трем вирусам начинается уже после первого введения вакцины и на 10-й день его уровень в 3-5 раз выше исходного - с 1:2-1:4 до 1:8-1:16. Дальнейшее возрастание титров антител продолжается до
45 дня и достигает 1:32-1:128.
Пример 7.
Исследования по изучению влияния хранения трехвалентной живой культуральной
вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного
рогатого скота проводили на жидкой форме вакцины. Вакцину хранили в замороженном
виде при -20-30 °С. Исследования проводились в течение 15 месяцев. Перед постановкой
вакцины для хранения был определен инфекционный титр монокомпонентов вакцины.
Повторные испытания проведены через 6, 12 и 15 месяцев после хранения. В табл. 9 представлены результаты параметров качества вакцины после ее хранения. Установлено, что
при хранении в течение 12 месяцев качество вакцины остается неизменным.
Таблица 1
Титр антител в РНГА у телят при иммунизации трехвалентной вакциной против
ИРТ, ВД И ПГ-3 при различных соотношениях монокомпонентов
Группы
АнтитеТитр антител (log 2) в дни после иммунизации
№
Ассоциаживотла к ви- До иммунизап/п
ции вакцин
10
21
30
45
ных
русам
ции
ИРТ
2,3±0,42
4,4±0,21 6,2±0,43 5,8±0,43 8,0±0,64
Опытная ИРТ+ВД+
1 группа
ПГ-3
ВД
3,2±0,21
3,2±0,43 5,2±0,64 6,6±0,43 7,8±0,43
№1
(1:1:1)
ПГ-3
3,2±0,21
5,4±0,43 6,6±0,85 6,8±0,43 8,0±0
ИРТ
3,0±0,43
5,2±0,43 6,4±0,64 6,8±0,64 8,0±0,43
Опытная ИРТ+ВД+
2 группа
ПГ-3
ВД
4,0±0
6,4±0,43 7,2±0,64 7,2±0,85 8,0±0
№2
(2:2:2)
ПГ-3
4,2±0,21
5,4±0,43 6,6±0,85 6,8±0,43 8,0±0,65
ИРТ
4,2±0,21
5,4±0,43 6,6±0,85 6,8±0,43 8,0±0,65
Опытная ИРТ+ВД+
3 группа
ПГ-3
ВД
4,0±0,88
5,0±0,43 6,6±1,71 6,8±3,43 7,8±0,43
№3
(1:1:2)
ПГ-3
4,0±0,21
6,2±0,43 7,2±0,43 8,0±0 8,0±0,85
ИРТ
4,2±0,43
6,2±0,64 6,3±0,43 8,0±0,43 8,0±0
Опытная ИРТ+ВД+
4 группа
ПГ-3
ВД
3,2±0,21
6,2±0,21 7,4±0,43 7,8±0,65 8,0±0,64
№4
(2:2:1)
ПГ-3
4,0±0
5,2±0,21 7,8±0,85 7,9±0,85 8,0±0
ИРТ
3,0±0
3,2±0,21 3,0±0,43 4,2±0,21 4,0±0,43
Конт5 рольная контроль
ВД
3,2±0,21
4,0±0 4,2±0,21 4,2±0,43 4,2±0,21
группа
ПГ-3
2,2±0,21
3,2±0,43 3,6±0,64 4,0±0
4,0±0
Примечание: достоверность Р ≤ 0,05.
Таблица 2
Результаты изучения антигенной активности вирусов ИРТ, ВД И ПГ-3 в сравнении
с трехвалентной живой культуральной вакциной против инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи и прарагриппа-3 крупного рогатого скота в РНГА
Дни после иммунизации
Антитела
До имВакцины
к вируЧерез 10 Через 21 Через 30 Через 45 Через 60
мунизасам
дней
день
дней
дней
дней
ции
ИРТ
0,6±0,4 2,3±0,42 4,4±0,21 6,2±0,43 5,8±0,43 8,0±0,64
Трехвалентная
вакцина против
ВД
0,8±0,4 3,2±0,21 3,2±0,43 5,2±0,64 6,6±0,43 7,8±0,43
ИРТ, ВД и ПГ-3 ПГ-3
0,8±0,4 3,2±0,21 5,4±0,43 6,6±0,85 6,8±0,43
8,0±0
8
BY 10696 C1 2008.06.30
Антитела
До имк вируЧерез 10
мунизасам
дней
ции
ИРТ
ИРТ
0,8±0,4 3,2±0,43
ВД
ВД
0,8±0,4 4,2±0,4
ПГ-3
ПГ-3
1,0±0,4 3,2±0,43
Контроль (неИРТ
0,8±0,4 2,6±0,21
иммунизироВД
0,8±0,4 3,0±0,6
ванные
ПГ-3
1,0±0,4 2,0±0,43
животные)
Примечание: достоверность Р ≤ 0,05.
Вакцины
Продолжение таблицы 2
Дни после иммунизации
Через 21 Через 30 Через 45
день
дней
дней
Через 60
дней
4,4±0,21 4,4±0,21
4,2±0,4 5,4±0,2
4,8±0,43 4,6±0,21
2,2±0,43 2,0±0,43
2,2±0,6 2,2±0,4
5,4±0,43
5,2±0,4
5,2±0,21
2,4±0,21
1,8±0,4
4,6±0,21
5,8±0,5
4,6±0,21
1,6±0,21
1,8±0,4
2,8±0,43 2,0±0,43
1,8±0,43
2,0±0,43
Таблица 3
Динамика Т- и В-лимофоцитов у телят, иммунизированных трехвалентной
и моновакцинами в сравнительном аспекте
Дни после иммунизации
№
Комбинации вакцин
Лимфоциты
До иммунизап/п
Через 21 день Через 45 дней
ции
Т-лимфоциты
28,4±3,05
41,2±5,3
38,1±4,91
1
ИРГ+ВД+ПГ-3
В-лимфоциты
16,4±1,76
25,4±3,33
22,3±2,87
Т-лимфоциты
28,8±3,09
41,1±5,29
38,8±4,9
2
ИРТ
В-лимфоциты
19,1±2,05
22,2±2,86
21,1±2,72
Т-лимфоциты
28,1±2,69
45,1±5,89
41,7±5,37
3
ВД
В-лимфоциты
16,6±2,14
26,2±3,37
22,2±2,87
Т-лимфоциты
25,4±3,27
38,9±5,01
35,2±4,56
4
ПГ-3
В-лимфоциты
16,3±2,09
25,1±3,23
26,1±3,36
Т-лимфоциты
29,6±2,91
32,1±4,13
37,1±4,78
5
Контроль
В-лимфоциты
18,1±2,33
23,3±2,99
24,2±3,1
Примечание: достоверность P ≤ 0,05.
Таблица 4
Динамика антигенсвязывающих клетoк у телят, иммунизированных трехвалентной
и моновакцинами против ИРТ, ВД И ПГ-3 крупного рогатого скота
Количество антигенсвязывающих клеток (%)
№
Вакцины против
Лимфоциты
в дни после иммунизации
п/п
До иммунизации
21
45
ИРТ
7,1±0,46
22,4±1,44
32,0±2,04
1
ИРТ+ВД+ПГ-3 (1:1:1)
ВД
8,1±0,52
25,2±1,56
35,1±2,26
ПГ-3
6,9±0,44
28,3±1,82
36,7±2,36
2
ИРТ
ИPT
6,5±0,42
30,1±1,94
37,7±1,43
3
ВД
ВД
7,2±0,46
27,5±1,77
38,2±2,49
4
ПГ-3
ПГ-3
7,0±0,48
26,4±1,78
36,4±2,33
ИРТ
6,6±0,43
33,4±2,15
39,7±2,55
5
Контроль
ВД
7,8±0,5
31,1±2,02
40,1±2,6
ПГ-3
8,1±0,52
29,9±1,93
36,7±2,37
Примечание: достоверность Р ≤ 0,05.
9
BY 10696 C1 2008.06.30
Таблица 5
Результаты производственных испытаний трехвалентной вакцины
против ИРТ, ВД И ПГ-3 крупного рогатого скота на коровах
Колхоз "Xoтoвo"
Колхоз "Кушляны"
№
Наименование
Единицы
Столбцовского района Сморгонского района
п/п
показателей
измерения
опыт
контроль
опыт
контроль
1
Количество коров
голов
300
150
400
260
Получено телят
2
голов
260
124
340
227
от коров
Заболело телят, полуголов
16
97
24
296
ченных от коров с
2
признаками пневмопроцент
5,9
77,9
7,1
90,8
энтеритов
Пало и вынужденно
голов
5
14
3
19
3 убито телят, полученпроцент
2,1
11,4
0,88
83
ных от коров
Таблица 6
Результаты производственных испытаний трехвалентной вакцины
против ИРТ, ВД И ПГ-3 крупного рогатого скота нa телятах в животноводческих
комплексах Республики Беларусь
Колхоз "Звезда"
Колхоз "Рассвет"
№
Единицы
Наименование показателей
Витебского района Зельвенского района
п/п
измерения
опыт контроль опыт
контроль
Количество иммунизиро1
голов
820
380
550
250
ванных телят
Заболело телят, с признакаголов
35
363
63
242
2
ми пневмоэнтеритов
процент
4,3
95,5
11,4
97,1
Пало и вынужденно убито
голов
0
27
0
36
3
телят
процент
0
7,1
0
14,5
Таблица 7
Результаты изучения пocтвакцинальных антител у телят при проведении
производственных испытаний
Колхоз "Рассвет"
Колхоз "Звезда"
Группы
Дни взятия
Зельвенского района
Витебского района
животных
крови
ИРТ
ВД
ПГ-3
ИРТ
ВД
ПГ-3
До иммуни1,7±0,2
2,1±0,3
2,0±0,3
1,5±0,4
2,0±0,4
2,0±0,2
зации
4,0±0,8
3,6±0,7
3,0±0,5
4,3±0,5
3,8±0,4
Опытная через 10 дн. 3,1±0,6
группа
через 21 дн. 4,6±0,4
4,8±0,5
5,0±0,9
4,5±0,5
5,0±0,7
5,1±0,6
через 30 дн. 5,5±0,8
6,0±0,9
6,0±0,9
5,5±0,8
6,0±0,6
6,0±0,9
через 45 дн. 7,5±1,4
7,9±0,9
8,0±0,8
7,1±0,8
7,5±0,9
7,9±0,8
До иммуни1,5±0,2
2,0±0,3
2,0±0,2
1,5±0,2
2,0±0,4
2,0±0,3
зации
2,2±0,2
2,2±0,3
1,9±0,4
2,2±0,4
2,2±0,5
Контроль- через 10 дн. 1,9±0,2
ная группа через 21 дн. 2,5±0,5
2,9±0,4
3,5±0,3
2,5±0,4
2,9±0,2
3,5±0,6
через 30 дн. 2,5±0,4
3,5±0,5
3,8±0,5
2,5±0,6
3,5±0,9
3,8±0,9
через 45 дн. 3,0±0,8
3,0±0,9
4,0±0,9
4,0±0,6
4,0±0,9
4,0±0,9
10
BY 10696 C1 2008.06.30
Таблица 8
Результаты изучения пocтвaкцинальных антитeл у коров при проведении
производственных испытаний
Колхоз "Кушляны"
Колхоз "Хотово"
Группы
Дни взятия
Сморгонского района
Столбцовского района
животных
крови
ИРТ
ВД
ПГ-3
ИРТ
ВД
ПГ-3
до иммуни4,7±0,9
5,1±0,9
5,0±0,8
4,6±0,9
5,3±1,4
5,5±1,0
зации
6,0±1,1
6,0±1,0
6,6±1,2
6,1±1,0
6,6±1,6
Опытная через 10 дн. 6,1±1,1
через 21 дн. 6,6±1,8
группа
6,8±1,6
7,0±1,5
6,8±1,4
6,9±1,0
7,0±1,9
через 30 дн. 6,5±1,0
7,0±1,5
7,5±1,4
6,9±1,2
7,4±1,5
7,9±1,3
через 45 дн. 8,0±1,9
8,0±1,8
8,0±1,8
8,0±1,7
8,0±1,9
8,0±1,2
до иммуни4,7±0,6
5,1±0,9
5,0±0,8
4,6±0,9
5,0±0,6
5,1±0,5
зации
5,1±0,5
5,0±0,5
4,8±0,6
5,1±0,5
5,0±0,6
Контроль- через 10 дн. 4,8±0,2
4,6±0,6
ная группа через 21 дн. 4,7±0,8
5,5±0,9
5,3±0,5
5,0±0,5
5,2±0,7
через 30 дн. 5,0±0,6
5,5±0,7
5,8±0,7
5,0±0,5
5,5±0,8
5,8±0,9
через 45 дн. 5,0±1,4
5,5±0,9
5,9±1,1
5,0±0,9
5,5±0,8
5,9±1,0
№
п/п
1
2
3
Таблица 9
Инфекционный титр монокомпонентов вакцины в зависимости
от сроков ее хранения
Показатели
До постановки
Через 6 месяцев Через 6 месяцев Через 6 месяцев
качества
на хранение
вакцины
Титр ИРТ 5,5 lg ТЦД 50/мл 5,5 lg ТЦД 50/мл 5,3 lg ТЦД 50/мл 5,0 lg ТЦД 50/мл
Титр ВД
5,5 lg ТЦД 50/мл 5,5 lg ТЦД 50/мл 5,3 lg ТЦД 50/мл 5,0 lg ТЦД 50/мл
Титр ПГ-3 5,0 lg ТЦД 50/мл 5,0 lg ТЦД 50/мл 4,5 lg ТЦД 50/мл 4,5 lg ТЦД 50/мл
Источники информации:
1. Крюков Н.Н., Белкина Н.М., Семенихин А.Л. Получение модифицированного вируса ИРТ крупного рогатого скота и испытание его иммуногенных свойств // Бюл. ВИЭВ,
1972. - В. 14. - С. 5-8.
2. Жидков С.А. Вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота (характеристика возбудителя, диагностика и специфическая профилактика): Автореф.
дис. … д-ра вет. наук: 16.00.03 / Всер. ин-т экс. ветеринарии. - М.: 1994. - С. 45.
3. А.с. СССР 1102107, МПК А 61K 39/28, 1984.
4. А.с. СССР 1092778, МПК А 61K 39/28, 1984.
5. Патент 5304РБ, МПК А 61K 39/00, 2003.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
11
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
186 Кб
Теги
патент, by10696
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа