close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10697

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.06.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/295
ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВИРУС-ВАКЦИНА
ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА,
ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ, РОТА- И КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЙ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
(21) Номер заявки: a 20040925
(22) 2004.10.08
(43) 2006.04.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени
С.Н. Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Красочко Петр Альбинович; Красочко Ирина Александровна; Кабась Степан Степанович;
Жих Глафира Иосифовна; Иванова
Ирина Павловна; Ковалев Николай
Андреевич; Машеро Владимир Александрович; Бойчук Сергей Викторович; Капуцкий Федор Николаевич;
Герт Евгений Владимирович; Торгашов Вадим Иванович; Зубец Олег
Владимирович (BY)
BY 10697 C1 2008.06.30
BY (11) 10697
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее
унитарное предприятие "Институт
экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского" (BY)
(56) Красочко П.А. и др. Вакцины и иммунизация. Шестой международный форум по глобальной вакцинологии. Мн., 2003. - С. 39.
Красочко П.А. и др. Международная
научно-практическая конференция "Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных". - Мн.,
2003. - С. 157-159.
Красочко П.А. и др. Международная
научно-практическая конференция "Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных". - Мн.,
2003. - C. 160-163.
(57)
Поливалентная инактивированная вирус-вакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота, содержащая инактивированные 0,2 % теотропином вируссодержащие жидкости штаммов
Infectious bovine rhinotracheitis virus КМИЭВ-6 с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл,
Bovine viral diarrhoeamucosal disease virus КМИЭВ-7 с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД
50/мл, Rotavirus of catle КМИЭВ-3 с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл и Coronavirus
of catle КМИЭВ-1 с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл, взятые в соотношении
1 : 1 : 1 : 1, и активированную целлюлозу в конечной концентрации 2 %.
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к области получения
вакцин и может быть использовано в профилактике вирусных респираторных инфекций
телят.
Известны инактивированные моновалентные вакцины против инфекционного ринотрахеита [1], вирусной диареи [2] и двухвалентная вакцина против рота- и коронавирусной
инфекций "Рокоген" [3] крупного рогатого скота, которые изготовлены из эпизоотических
BY 10697 C1 2008.06.30
штаммов вируса ИРТ - 4016, ВД - "Орегон 24 V", ротавируса - "238" и коронавируса "ВС-1".
Недостатками вышеуказанных вакцин является то, что для получения напряженного
иммунитета против 4-х инфекций необходимо использовать 2-3 вакцины, применение которых для животных осуществляется в разные сроки, что затрудняет работу специалистов.
Кроме того, в технологии изготовления вакцины используются эпизоотические штаммы
вирусов, которые при неполной инактивации после применения чувствительным животным могут вызвать вспышку заболевания.
Наиболее близкой к заявляемой является шестивалентная ин активированная вакцина
против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, парагриппа-3, респираторносинцитиальной, ротa- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота, рекомендуемая для иммунизации стельных коров "Комбовак"[4].
Однако основным недостатком данной вакцины является то, что при введении животным возникает большая антигенная нагрузка на организм. Кроме того, в состав инактивированной вакцины входят монокомпоненты вирусов парагриппа-3 и респираторносинцитиальной инфекций, которые не играют роли в возникновении вирусных энтеритов
молодняка крупного рогатого скота.
Для повышения иммуногенности вакцин используются адъюванты - гидроокись алюминия или алюмокалиевые квасцы [3]. Однако эти препараты реактогенны, на месте инъекции образуется воспалительная гранулема, которая с одной стороны способствует
медленному рассасыванию антигена, а с другой - ухудшает качество продукции из-за браковки места иньекции, а также из-за осложнения и образования на месте введения вакцины с адъювантов абсцессов.
Задачей настоящего изобретения является разработка поливалентной инактивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота.
Поставленная задача достигается тем, что поливалентная инактивированная вирусвакцина против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной
инфекций крупного рогатого скота, содержащая инактивированные 0,2 % теотропином
вируссодержащие жидкости штаммов Infectious bovine rhinotracheitis virus КМИЭВ-6 с
инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл, Bovine viral diarrhoea-mucosal disease virus
штамм КМИЭВ-7 с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл, Rotavirus of catle КМИЭВ-3 с
инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл и Coronavirus of catle КМИЭВ-1 с инфекционным
титром 6,5 lg ТЦД 50/мл, взятые в соотношении 1 : 1 : 1 : 1, и активированную целлюлозу
в конечной концентрации 2 %.
Пример 1.
Для изготовления поливалентной инактивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота используются аттенуированные штаммы вирусов инфекционного ринотрахеита
КМИЭВ-6, вирусной диареи КМИЭВ 7, коронавируса КМИЭВ-1, ротавируса - КМИЭВ-3.
Штамм вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (Infectious bovine rhinotracheitis) получен Белорусским НИИЭВ им. С.Н. Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых
на новых ростовой и поддерживающей средах - гемогидролизате. Штамму присвоен номер: КМИЭВ-6. Штамм получен oт теленка, больного бронхопневмонией путем выделения на первичной культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК).
Штамм хранится в музее культур микроорганизмов РНИУП "ИЭВ им. С.Н. Вышелесского НАНБ".
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: ДНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 106-108 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, трипсина. Устойчив к ко2
BY 10697 C1 2008.06.30
лебаниям среды с величиной pH от 3,0 до 9,0. ЦПД наступает через 24-48 ч после инокуляции и характеризуется округлением клеток зернистостью, разрушением монослоя.
Антигенная активность: вирус вызывает образование антител у телят и кроликов при
парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии при температуре - 20 °С и ниже или в лиофилизированном + 4 °С. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПT
или первичной культуре клеток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 %-ми гемогидролизата с добавлением 2 % сыворотки крови крупного
рогатого скота.
Штамм вируса диареи крупною рогатого скота (Bovine viral diarrhoea) получен Белорусским НИИЭВ им. С.Н. Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых на новых ростовой и
поддерживающей средах - гемогидролизате. Штамму присвоен номер: КМИЭВ-7.
Штамм получен от теленка, больного пневмоэнтеритами путем выделения на первичной культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК).
Штамм хранится в музее культур микроорганизмов РНИУП "ИЭВ им. С.Н. Вышелесского НАНБ".
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: РНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 30-50 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, колебаниям среды с величиной pH от 3,0 до 9,0. Наиболее устойчив при pH 7,4. ЦПД наступает через 24-48 ч после
инокуляции и характеризуется округлением клеток зернистостью, разрушением монослоя.
Антигенная активность: вирус вызывает образование антител у телят и кроликов при
парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм вируса диареи крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии
при температуре - 20 °С и ниже или в лиофилизированном + 4 °С. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПТ или первичной культуре клеток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 %
гемогидролизата.
Штамм коронавируса крупного рогатого скота (Coronavirus of catle) получен Белорусским ПИИЭВ им. С.Н. Вышелесского в 1991 г., адаптирован к новой клеточной системе
перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых на новых ростовой и поддерживающей средах - гемогидролизате. Штамму присвоен номер: КМИЭВ-1.
Штамм получен от теленка, больного энтеритом путем выделения на первичной культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК).
Штамм хранится в музее культур микроорганизмов РНИУП "ИЭВ им. С.Н. Вышелесского НАНБ".
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: РНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 100-140 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, колебаниям среды с величиной pH от 3,0 до 9,0. На поверхности имеет выступы. Наиболее устойчив при pH 6,8-7,5.
ЦПД наступает через 48-72 ч после инокуляции. Титр вируса - 6,5 lg ТЦД 50/мл.
Антигенная активность: вирус вызывает образование вируснейтрализующих антител у
телят и кроликов при парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм коронавируса крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии
при температуре - 20 °С и ниже или в лиофилизированном - + 4 °С. Поддерживается методом субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПТ или первичной культуре кле3
BY 10697 C1 2008.06.30
ток ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 % гемогидролизата.
Штамм ротавируса крупного рогатого скота (Rotavirus of catle) получен Белорусским
НИИЭВ им. С.Н. Вышелесского в 1984 г., адаптирован к новой клеточной системе перевиваемых клеток ПТ или МДБК, культивируемых на новых ростовой и поддерживающей
средах - гемогидролизате.
Штамму присвоен номер: КМИЭВ-3.
Штамм получен от теленка, больного энтеритом путем выделения на первичной культуре клеток почки эмбриона коровы (ПЭК).
Штамм хранится в музее культур микроорганизмов РНИУП "ИЭВ им. С.Н. Вышелесского НАНБ".
Штамм имеет следующие свойства.
Культурально-морфологические свойства: РНК-содержащий вирус, вирионы диаметром 66 нм, чувствителен к действию эфира, хлороформа, колебаниям среды с величиной
pH от 3,0 до 9,0. На поверхности имеет выступы. Наиболее устойчив при pH 6,8-7,5. ЦПД
наступает через 48-72 ч после инокуляции. Титp вируса - 6,5 lg ТЦД50/мл.
Антигенная активность: вирус вызывает образование вируснейтрализующих антител у
телят и кроликов при парентеральном введении.
Безвредность: непатогенен для телят и лабораторных животных.
Штамм ротавируса крупного рогатого скота хранится в замороженном состоянии при
температуре - 20 °С и ниже или в лиофилизированном - + 4 °С. Поддерживается методом
субкультивирования на перевиваемой линии МДБК, ПТ или первичной культуре клеток
ПЭК. Для культивирования вируса используется питательная среда с 5 % гемогидролизата.
В качестве инактиванта вирусов используется теотропин. Теотропин-1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан, представляет собой порошок белого или желтоватобелого цвета, кисловатого вкуса, без запаха, хорошо растворим в воде, спирте, хлороформе, не растворим в эфире, не летуч. Водные растворы стойкие, при комнатной температуре (18-20 °С) сохраняют свое действие в течение 4-х месяцев. Теотропин обладает
широким спектром вирусоцидного и бактерицидного действия в отношении грамотрицательных, грамположительных бактерий, включая споровые формы и микоплазмы. Инактивационная активность теотропина обусловлена его способностью проникать в
бактериальные клетки и вирусы, взаимодействовать с аминогруппами пуриновых и пиримидиновых оснований нуклеиновых кислот, блокируя их матричную - генетическую
функцию. По уровню острой токсичности для теплокровных животных теотропин относится к малотоксичным соединениям (IV класс опасности по ГOCТ 12.1.007-76). Препарат
не обладает кумулятивным и кожно-резорбтивными свойствами.
В качестве адьюванта используется суспензия окисленной микрокристаллической целлюлозы, представляющей собой тонкодисперсный белый порошок с содержанием карбоксильных групп 3,0-4,0 %, карбонильных групп 1,5-1,7 %, альдегидных групп 0,1-0,2 %,
связанного нитроэфирного азота ≤ 0,2 %, зольностью ≤ 0,2 %, растворимостью в 0,1 N
растворе щелочи до 100 %, растворимостью в воде при 20 °С до 10 %, температурой начала разложения от 165 °С.
Пример 2.
Накопление вируссодержащей жидкости вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и коронавируса крупного рогатого скота проводят на культуре перевиваемых клеток МДБК, выращенной на питательной среде - 5 % гемогидролизате с
добавлением 10 % сыворотки крови крупного рогатого скота. Заражение клеточного монослоя производят путем внесения расплодки маточной культуры вирусов не более
15 пассажа. При этом вирусы инфекционного ринотрахеита, диареи и коронавирус крупного рогатого скота культивируют отдельно. После 1,5-2-х часового контакта вносят под4
BY 10697 C1 2008.06.30
держивающую среду - 5 % гемогидролизат. ЦПД вирусов проявляется через 24-48 ч. После поражения свыше 75 % клеток на матрасах с зараженным монослоем их подвергают
замораживанию с последующим титрованием. Ротавирус крупного рогатого скота накапливают на культуре клеток почки свиньи - СПЭВ по вышеописанной методике.
Пример 3.
Инактивация вакцинных штаммов - компонентов инактивированной поливалентной
вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной
инфекций крупного рогатого скота проведена с использованием инактиванта теотропина в
различных концентрациях.
Для отработки режимов инактивации вирусов использованы различные разведения
препаратов (от 0,1 до 0,5 %) путем их добавления в заранее оттитрованную вируссодержащую жидкость. После контакта вирусов с инактивантами в течение 24, 48, 72, 96 и
120 ч была проверена полнота инактивации вирусов на культуре клеток.
Для работы использованы следующие вирусы с инфекционной активностью: вирус
инфекционного ринотрахеита (штамм КМИЭВ-6) при титре 6,5 lg ТЦД50/мл, вирус диареи
(штамм КМИЭВ-7) при титре 6,5 lg ТЦД50/мл, ротавирус (штамм КМИЭВ-3) при титре
6,5 lg ТЦД50/мл, коронавирус (штамм КМИЭВ-1) при титре 6,5 lg ТЦД50/мл.
При изучении влияния теотропина на культуры клеток МДБК и СПЭВ установлено,
что добавление на монослой теотропина в концентрации свыше 0,2 % ведет к дегенерации
монослоя культуры клеток.
При инактивации вируса инфекционного ринотрахеита с использованием теотропина
оптимальной оказалась его 0,15 % концентрация в течение 24 ч, вируса диареи - 0,1 %
концентрация в течение 24 ч, ротавируса - 0,2 % концентрация в течение 48 ч, коронавируса - 0,1 % концентрация в течение 24 ч.
Пример 4.
Для изучения антигенной активности инактивированных и неинактивированных
штаммов - компонентов поливалентной вакцины исследования проводились на лабораторных животных - белых мышах. При этом было сформировано 10 групп белых мышей
по 5 голов в группе. Каждой опытной группе мышей вводились вирусы в соответствии со
схемой опыта. После проверки каждого из вирусных антигенов через 21 день после их
введения мыши были тотально обескровлены и в сыворотках крови был проверен титр
противовирусных антител в РНГА.
В табл. 1 представлены результаты изучения титров противовирусных антител у мышей при отработке оптимального метода инактивации вирусов.
Полученные результаты исследований показали, что после введения инактивированных теотропином вирусов у животных титр противовирусных антител не снижается по
сравнению с животными, получавшими те же дозы неинактивированных вирусов.
Пример 5.
Для изучения иммунного ответа у лабораторных животных на введение им инактивированных вакцинных штаммов с различными адъювантами исследования был использован адъювант - суспензия мелкокристаллической активированной целлюлозы. Целлюлоза
была использована в количестве 0,5; 1 и 2 % от количества антигена.
Для проведения исследований было использовано 25 групп кроликов, 25 групп белых
крыс по 4 головы в группе. У кроликов и крыс была взята кровь до введения вирусных антигенов с адъюантами и через 21 день после введения. В сыворотках крови будет проверен титр противовирусных антител в РНГА.
После внутримышечного введения животным смеси инактивированного вируса и различных адъювантов получены следующие результаты (табл. 2 и 3).
На основании проведенных результатов изучения гуморального иммунитета после
введения кроликам и крысам инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита,
5
BY 10697 C1 2008.06.30
вирусной диареи, рота- и коронавирусов крупного рогатого установлено, что наиболее оптимальным адъювантом является 1 и 2 % суспензия целлюлозы.
Пример 6.
Для отработки оптимальных доз монокомпонентов вирусов инфекцинного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции, используемых для конструирования инактивированной поливалентной вакцины исследования проведены на коровах.
На ферме крупного рогатого скота было сформировано 13 групп животных по 10 голов в
группе. Опытным животным каждый монокомпонент (инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусы) поливалентной вакцины вводился по 1, 2,5 и 5,0 мл
при инфекционном титре каждого монокомпонента 6,5 lg ТЦД 50/мл двукратно с интервалом в 21 день. В качестве контроля использовалась вакцина "Комбовак" производства
НПО "Нарвак". За коровами проводили наблюдение на протяжении опыта. Для исследования поствакцинального иммунитета брали кровь до иммунизации, через 21 и 45 дней
после иммунизации. В крови у коров изучался титр противовирусных антител в РНГА.
В результате исследований установлено, что у опытных животных после введения монокомпонентов вакцины отмечался выраженный биосинтез противовирусных антител. Результаты проведенных исследований представлены в табл. 4.
Представленные данные показывают, что оптимальной дозой монокомпонентов при
инфекционном титре 6,5 lg ТЦД 50/мл является 2,5-5 мл на корову. Это дает максимальное возрастание титров антител после введения монокомпонентов вакцины.
Для отработки оптимального соотношения монокомпонентов вирусов инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции для конструирования
инактивированной поливалентной вакцины исследования проведены на коровах. За основу были взяты монокомпоненты с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл. Для этого было сформировано 11 групп животных по 10 голов в группе. Коровам 1-й опытной группы
вводили по 4 мл инактивированных монокомнонентов вирусов в следующих соотношениях: вирус ИРТ - 1 мл, вирус диареи - 1 мл, ротавирус - 1 мл, коронавирус - 1 мл; коровам
2-й опытной группы по 10 мл (соответственно по 2,5 мл каждого монокомпонента), коровам 3-й группы - по 20 мл (соответственно по 5 мл); коровам 4-й группы - по 15 мл (ИРТ и
ВД по 5 мл, рота- и коронавирусов - по 2,5 мл); 5-й группы - по 15 мл (ИРТ и ВД по
2,5 мл, рота- и коронавирусов - по 5 мл); 6-й группы - 7 мл (ИРТ и ВД по 1 мл, рота- и коронавирусов - по 2,5 мл); 7-й группы - 7 мл (ИРТ и ВД по 2,5 мл, рота- и коронавирусов по 1 мл); 8-й группы по 10 мл (ИРТ и ВД по 5 мл); 9-й группы - по 10 мл (рота- и коронавирусов - по 5 мл); 10-й группы - по 2 мл вакцины "Комбовак" (производство НПО "Нарвак") и 11-я группа-контроль.
Опытным животным вводили различные соотношения монокомпонентов образца поливалентной вакцины двукратно с интервалом в 21 день. За животными было проведено
наблюдение в течение всего опыта. У коров была взята кровь до иммунизации и через 21
день после иммунизации.
В результате наблюдений за коровами после обработки различными дозами и соотношениями монокомпонентов образца поливалентной вакцины изменений в клиническом
состоянии животных не установлено. Аппетит сохранен, продуктивность коров не снизилась. На месте введения компонентов болезненности и воспалительной реакции не было
установлено.
В табл. 5-8 представлены результаты опыта по отработке оптимального соотношения
монокомпонентов в инактивированной вакцине против инфекционного ринотрахеита,
вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции.
Из представленных в таблицах данных видно, что при введении коровам монокомпонентов с инфекционным титром 6,5 lg ТЦД 50/мл в дозе 2,5-5 мл в различных комбинациях отмечается максимальная выработка антител ко всем изучаемым вирусам.
6
BY 10697 C1 2008.06.30
Пример 7.
Иммунизация стельных коров поливалентной инактивированной вирус-вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций
крупного рогатого скота сопровождается перестройкой иммунной системы организма животных. Для этого были проведены исследования по изучению биосинтеза противовирусных антител у иммунизированных коров. В опыт было взято 20 коров, которых разделили
на 2 группы по 10 голов в группе. Коров опытной группы № 1 обработали экспериментальным образцом поливалентной вакцины (инактивант - 0,2 % раствор теотропина, адъювант - 2 % суспензия целлюлозы) внутримышечно в области крупа в дозе 10 мл на
голову двукратно с интервалом 21 день. Контрольным коровам вводилось по 10 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. За обработанными животными было
проведено клиническое наблюдение в течение 65 дней. Для контроля биосинтеза противовирусных антител от опытных и контрольных животных была взята кровь до иммунизации, через 21, 45 и 65 дней.
В табл. 9-12 представлены результаты изучения динамики антител к вирусам ИРТ, ВД,
рота- и коронавирусам у иммунизированных коров.
Из представленных данных видно, что иммунизация коров вакцинами с различными
адъювантами ведет к активизации выработки противовирусных антител. Через 45 дней
после иммунизации отмечается увеличение титров антител ко всем возбудителям на 2,53,5 log2, что свидетельствует об активном биосинтезе антител у иммунизированных коров.
У контрольных животных отмечаются незначительные колебания уровня антител.
Пример 8.
Для испытания эффективности поливалентной инактивированной вакцины против
инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота исследования проводились на стельных коровах. Для проведения исследований было отобрано 75 стельных коров, из которых сформировано 2 группы. Коров
опытной группы № 1 в количестве 40 голов иммунизировали двукратно инактивированной вакциной против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота в дозе 10 мл внутримышечно с интервалом в
21 день. Коров вакцинировали за 2 месяца до отела. Коровы контрольной группы в количестве 30 голов не были вакцинированы. Показателем эффективности вакцины служило
снижение заболеваемости новорожденных телят пневмоэнтеритами.
Обработка коров вакциной показала, что это безвредный и нереактогенный биологический препарат. У коров опытной и контрольной групп абортов и мертворожденных телят не было отмечено. При наблюдении за новорожденными телятами были получены
следующие результаты. От коров опытной группы было получено 40 телят, от контрольной группы 30 телят. В группе телят, полученных oт иммунизированных коров заболело
энтеритами 2 головы (5,0 %), тогда как в группе телят от неиммунизированных коров заболело 16 голов (53,3 %).
Таблица 1
Результаты изучения титров противовирусных антител у мышей при отработке
оптимального метода инактивации вирусов
Антитела к вирусу:
КоличестНаименование ви- ИнактиГруппы животных
во мышей Антитела Титр антирусного антигена
вант
в группе
к вирусу тел в РНГА
вирус ИРТ, инакти- теотроопытная группа № 1
5
ИРТ
1:32
вированный
пин
опытная группа № 2
вирус ИPT, живой
5
ИРТ
1:8
вирус диареи, инак- теотроопытная группа № 3
5
ВД
1:8
тивированный
пин
7
BY 10697 C1 2008.06.30
Группы
животных
опытная группа № 4
опытная группа № 5
опытная группа № 6
опытная группа № 7
опытная группа № 8
контрольная группа
№1
Наименование вирусного
антигена
вирус диареи,
живой
ротавирус, инактивированнный
ротавирус, живой
коронавирус, инактивированный
Продолжение таблицы 1
Антитела к вирусу:
КоличестИнактиво мышей Антитела Титр антивант
в группе
к вирусу тел в РНГА
теотропин
теотропин
коронавирус, живой
-
-
-
5
ВД
1:8
5
ротавирусу
1:16
5
ротавирусу
коронавирусу
коронавирусу
ИРТ
ВД
ротавирусу
коронавирусу
1:8
5
5
5
1:4
1:4
0
0
0
0
Таблица 2
Результаты изучения сывороток крови кроликов на наличие антител
после введения вирусных антигенов с различными адъювантами
НаименоваКоличество
Титры антител
Группы животных
ние вирусноАдъювант
кроликов
log2
го антигена
в группе
опытная группа № 1
0,5 % целлюлозы
4
3,25 ± 0,46
вирус ИРТ,
опытная группа № 2
1 % целлюлозы
4
4,0 ± 0,57
инактивироопытная группа № 3
2 % целлюлозы
4
4,25 ± 0,63
ванный
опытная группа № 4
4
2,66 ± 0,23
опытная группа № 7
0,5 % целлюлозы
4
3,25 ± 0,46
вирус диаопытная группа № 8
1 % целлюлозы
4
2,75 ± 0,47
реи, инактиопытная группа № 9
2 % целлюлозы
4
3,40 ± 0,73
вированный
опытная группа № 12
4
2,50 ± 0,18
опытная группа № 13
0,5 % целлюлозы
4
3,50 ± 0,36
ротавирус,
опытная группа № 14
1 % целлюлозы
4
3,50 ± 0,39
инактивироопытная группа № 15
2 % целлюлозы
4
4,50 ± 0,70
ванный
опытная группа № 18
4
3,50 ± 0,12
опытная группа № 19
0,5 % целлюлозы
4
4,50 ± 0,22
коронавирус,
опытная группа № 20
1 % целлюлозы
4
2,25 ± 0,22
инактивироопытная группа № 21
2 % целлюлозы
4
4,38 ± 0,45
ванный
опытная группа № 24
4
4,00 ± 0,42
контрольная группа
1,00 ± 0,12
8
BY 10697 C1 2008.06.30
Таблица 3
Результаты изучения сывороток крови крыс на наличие антител после введения
вирусных антигенов с различными адъювантами
Количество
Наименование виТитры анГруппы животных
Адъювант
кроликов в
русного антигена
тител log2
группе
опытная группа № 1
0,5 % целлюлозы
4
4,25 ± 0,42
опытная группа № 2
вирус ИРТ, инакти- 1 % целлюлозы
4
2,25 ± 0,21
вированный
опытная группа № 3
2 % целлюлозы
4
2,33 ± 0,33
опытная группа № 6
4
3,50 ± 0,26
опытная группа № 7
0,5 % целлюлозы
4
1,25 ± 0,14
вирус диареи, инак- 1 % целлюлозы
опытная группа № 8
4
1,66 ± 0,16
тивированный
опытная группа № 9
2 % целлюлозы
4
l,75 ± 0,22
опытная группа № 12
4
1,25 ± 0,11
опытная группа № 13
0,5 % целлюлозы
4
4,00 ± 0,42
опытная группа № 14
ротавирус, инакти- 1 % целлюлозы
4
3,00 ± 0,30
вированный
опытная группа № 15
2 % целлюлозы
4
3,50 ± 0,63
опытная группа № 18
4
4,50 ± 0,28
опытная группа № 19
0,5 % целлюлозы
4
4,80 ± 0,42
опытная группа № 20
коронавирус, инак- 1 % целлюлозы
4
2,25 ± 0,32
тивированный
опытная группа № 21
2 % целлюлозы
4
3,38 ± 0,23
опытная группа № 24
4
4,00 ± 0,42
контрольная группа
0,80 ± 0,12
Таблица 4
Результаты опыта по отработке оптимальных доз инактивированных
монокомпонентов вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи,
рота- и коронавирусной инфекции
Доза монокомпоТитр антител в РНГА (log2)
Группы животных
Вирусы
нента (при титре До имму- Через 21 Через 45
6,5 lg ТЦД 50/мл) низации
день
дней
Опытная группа № 1 инфекцион1 мл
1,8 ± 0,3
2,5 ± 0,4 3,3 ± 0,4
ный риноОпытная группа № 2
2,5 мл
2,1 ± 0,2
2,9 ± 0,2 5,5 ± 0,6
трахеит
Опытная группа № 3
5 мл
2,0 ± 0,1
3,2 ± 0,3 5,6 ± 0,4
Опытная группа № 4
1 мл
1,9 ± 0,1
2,8 ± 0,2 3,7 ± 0,3
вирусная
Опытная группа № 5
2,5 мл
2,0 ± 0,2
3,1 ± 0,4 4,8 ± 0,2
диарея
Опытная группа № 6
5 мл
2,1 ± 0,1
3,3 ± 0,4 4,9 ± 0,4
Опытная группа № 7
1
мл
2,8
±
0,3
3,4 ± 0,7 4,5 ± 0,3
ротавирусная инфекОпытная группа № 8
2,5 мл
2,5 ± 0,2
3,9 ± 0,4 4,9 ± 0,4
ция
Опытная группа № 9
5 мл
2,4 ± 0,1
4,3 ± 0,2 5,1 ± 0,1
Опытная группа № 4
1 мл
2,2 ± 0,3
3,4 ± 0,3 4,4 ± 0,3
коронавирусная инОпытная группа № 5
2,5 мл
2,2 ± 0,4
3,8 ± 0,2 4,9 ± 0,5
фекция
Опытная группа № 6
5 мл
2,5 ± 0,4
3,9 ± 0,4 5,0 ± 0,6
9
BY 10697 C1 2008.06.30
Группы животных
Опытная группа № 7
(Вакцина "Комбовак")
Контрольная группа
Вирусы
инфекционный ринотрахеит
вирусная
диарея
ротавирусная инфекция
коронавирусная инфекция
инфекционный ринотрахеит
вирусная
диарея
ротавирусная инфекция
коронавирусная инфекция
Продолжение таблицы 4
Доза монокомпоТитр антител в РНГА (log2)
нента (при титре До имму- Через 21 Через 45
6,5 lg ТЦД 50/мл) низации
день
дней
2 мл
1,9 ± 0,3
2,1 ± 0,3
2,8 ± 0,3
2мл
2,0 ± 0,2
2,4 ± 0,2
2,6 ± 0,4
2 мл
2,0 ± 0,1
2,5 ± 0,1
2,7 ± 0,1
2 мл
2,2 ± 0,2
2,4 ± 0,3
2,8 ± 0,3
2,1 ± 0,2
2,2 ± 0,3
2,0 ± 0,3
2,0 ± 0,1
1,8 ± 0,2
2,1 ± 0,1
1,8 ± 0,3
1,9 ± 0,4
2,0 ± 0,2
2,1 ± 0,2
2,3 ± 0,5
2,2 ± 0,4
-
Таблица 5
Титры антител к вирусу ИРТ в опыте по отработке оптимального соотношения
монокомпонентов в инактивированной вакцине против инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции
Средние титры антител к вирусу
Соотношения монокомпонентов вируГруппы
ИРТ в различные сроки после
сов при титре 6,5 lg ТЦД 50/мл (мл)
иммунизации
До иммуни- Через 21 Через 45
ИРТ
ВД
Рота
Корона
зации
день
дней
Группа № 1
1
1
1
1
1,0
1,7
4,0
Группа № 2
2,5
2,5
2,5
2,5
1,0
1,3
3,6
Группа № 3
5
5
5
5
0,8
1
3,0
Группа № 4
2,5
2,5
5
5
0,8
1,3
2,6
Группа № 5
5
5
2,5
2,5
1,0
1,6
3,0
Группа № 6
1
1
2,5
2,5
1,0
2,3
3,6
Группа № 7
2,5
2,5
1
1
0,8
1,3
2,6
Группа № 8
5
5
1,0
1,3
3,0
Группа № 9
5
5
1,0
1,6
3,6
Группа № 10
вакцина "Комбовак"
1,0
1,3
1,6
Контрольная
0,8
1,0
0,8
группа
10
BY 10697 C1 2008.06.30
Таблица 6
Титры антител к вирусу диареи в опыте по отработке оптимального соотношения
монокомпонентов в инактивированной вакцине против инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции
Титры антител к вирусу диареи
Соотношения монокомпонентов вируГруппы
в различные сроки после
сов при титре 6,5 lg ТЦД 50/мл (мл)
иммунизации
До иммуни- Через 21 Через 45
ИРТ
ВД
Рота
Корона
зации
день
дней
Группа № 1
1
1
1
1
0,8
2,3
3,3
Группа № 2
2,5
2,5
2,5
2,5
0,8
2,0
3,0
Группа № 3
5
5
5
5
1,0
1,5
3,0
Группа № 4
2,5
2,5
5
5
0,6
1,3
2,6
Группа № 5
5
5
2,5
2,5
0,4
1,8
3,6
Группа № 6
1
1
2,5
2,5
1,0
1,3
2,6
Группа № 7
2,5
2,5
1
1
0,8
3,3
4,6
Группа № 8
5
5
1,0
2,0
3,3
Группа № 9
5
5
1,0
2,6
4,0
Группа № 10
вакцина "Комбовак"
0,6
1,8
2,0
Контрольная
1,0
0,8
1,0
группа
Таблица 7
Титры антител к ротавирусу в опыте по отработке оптимального соотношения
монокомпонентов в инактивированной вакцине против инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции
Группы
Соотношения монокомпонентов виру- Титры антител к ротавирусу в разсов при титре 6,5 lg ТЦД 50/мл (мл)
личные сроки после иммунизации
ИРТ
Группа № 1
Группа № 2
Группа № 3
Группа № 4
Группа № 5
Группа № 6
Группа № 7
Группа № 8
Группа № 9
Группа № 10
Контрольная
группа
1
2,5
5
2,5
5
1
2,5
5
-
ВД
Рота
1
1
2,5
2,5
5
5
2,5
5
5
2,5
1
2,5
2,5
1
5
5
вакцина "Комбовак"
-
До иммунизации
Через 21
день
Через 45
дней
1
2,5
5
5
2,5
2,5
1
5
0,8
0,6
1,0
1,0
0,6
0,8
0,6
0,8
0,8
1,0
2,6
2,3
2,0
1,6
1,6
1,6
2,0
1,6
1,6
1,3
3,6
3,6
2,6
3,6
4,6
3,6
3,3
2,6
3,6
2,3
-
0,4
0,6
1,0
Корона
-
11
BY 10697 C1 2008.06.30
Таблица 8
Титры антител к коронавирусу в опыте по отработке оптимального соотношения
монокомпонентов в инактивированной вакцине против инфекционного
ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекции
Титры антител к коронавирусу
Соотношения монокомпонентов вируГруппы
в различные сроки после
сов при титре 6,5 lg, ТЦД 50/мл (мл);
иммунизации
До иммуни- Через 21 Через 45
ИРТ
ВД
Рота
Корона
зации
день
дней
Группа № 1
1
1
1
1
0,6
1,3
2,0
Группа № 2
2,5
2,5
2,5
2,5
0,8
1,6
2,6
Группа № 3
5
5
5
5
1,0
1,0
2,3
Группа № 4
2,5
2,5
5
5
0,6
1,0
2,0
Группа № 5
5
5
2,5
2,5
0,8
1,6
2,6
Группа № 6
1
1
2,5
2,5
1,0
1,0
2,3
Группа № 7
2,5
2,5
1
1
0,6
1,3
1,6
Группа № 8
5
5
0
1,0
1,6
Группа № 9
5
5
1,0
2,0
3,0
Группа № 10
вакцина "Комбовак"
1,0
1,3
1,6
Контрольная
0,6
1,0
0,8
группа
Таблица 9
Динамика антител к вирусу ИРТ в РНГА крови
иммунизированных коров (log2)
Сроки взятия крови
Группы животных
Через 21
Через 45
До иммунизации
день
дней
ОГ № 1 (вирусы + целлюлоза)
2,2
5,5
6,6
Контрольная группа
2,0
2,6
2,7
Через 65
дней
6,2
2,5
Таблица 10
Динамика антител к вирусу диареи в РНГА в крови
иммунизированных коров (log2)
Сроки взятия крови
Группы животных
Через 21
Через 45
До иммунизации
день
дней
ОГ № 1 (вирусы + целлюлоза)
1,8
4,7
7,2
Контрольная группа
2,2
2,9
2,4
Через 65
дней
6,9
3,0
Таблица 11
Динамика антител к ротавирусу в РНГА в крови
иммунизированных коров (log2)
Сроки взятия крови
Группы животных
Через 21
Через 45
До иммунизации
день
дней
ОГ № 1 (вирусы + целлюлоза)
2,0
4,0
6,9
Контрольная группа
1,9
1,8
1,8
12
Через 65
дней
6,5
1,9
BY 10697 C1 2008.06.30
Таблица 12
Динамика антител к коронавирусу в РНГА в крови
иммунизированных коров (log2)
Сроки взятия крови
Группы животных
Через 21
Через 45
До иммунизации
день
дней
ОГ № 1 (вирусы + целлюлоза)
3,0
5,2
6,2
Контрольная группа
3,3
3,4
3,7
Через 65
дней
5,8
3,5
Источники информации:
1. А.с. СССР 980307 МПК А 61K 39/12, 1982.
2. Халенев Г.А., Лосева Т.В. Изучение антигенных связей между инактивированными
штаммами вируса диареи крупного рогатого скота // Проблемы вирусологии, молекулярной биологии и гистологии сельскохозяйственных животных. - 1983, № 4, 1. - С. 22-24.
3. Стеценко В.И., Голуб Ю.С., Тризна Л.П. и др. Застосування дослiдноi вакцини "Рокоген" для профiлактики рота- i коронавiрусних ентеритiв новорождених телят : Сб. статей науково-практичноi конференцii "Збереженiсть молодняка с/г тварин - запорука
розвитку тварництва Украiни. - Харькiв, 1994. - C. 75-77.
4. Красочко П.А., Новиков О.Г., Ятусевич А.И. и др. Специфическая профилактика
респираторных и желудочно-кишечных инфекций телят и поросят // Болезни крупного рогатого скота и свиней. - Мн.: Технопринт, 2003. - С. 367-376 (прототип).
5. Власов В.А. Новые препараты для борьбы с бактериальными и вирусными болезнями животных. - Покров, 1998. - 86 с.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
13
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
198 Кб
Теги
патент, by10697
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа