close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10823

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.06.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 10823
(13) C1
(19)
A 61K 39/108
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ
ФИМБРИАЛЬНЫХ АДГЕЗИНОВ КОЛИБАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: a 20060100
(22) 2006.02.08
(43) 2006.08.30
(71) Заявители: Зайцев Владимир Владимирович; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Алеся Владимировна
(BY)
(72) Авторы: Зайцев Владимир Владимирович; Дремач Геннадий Эдуардович;
Зайцева Алеся Владимировна (BY)
(73) Патентообладатели: Зайцев Владимир
Владимирович; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Алеся Владимировна (BY)
(56) Ломако Ю.В. Ученые записки Витебской ордена "Знак Почета" государственной академии ветеринарной медицины. - Витебск, 2002. - Т. 38. - Ч. 1. С. 66-68.
RU 2077337 C1, 1997.
Ломако Ю.В. Специфическая профилактика колибактериоза телят на основе адгезивных антигенов возбудителя.
Автореф. дис. … канд. вет. наук. - Мн.,
2003. - С. 10-13.
RU 2077337 C1, 1997.
EP 0666271 A1, 1995.
BY 10823 C1 2008.06.30
(57)
Способ получения фимбриальных адгезинов колибактерий, включающий приготовление суспензии колибактерий, экстракцию адгезинов, их концентрирование и консервирование, отличающийся тем, что экстракцию проводят 0,25-1,0 %-ным раствором аммиака
при температуре 35-45 °С в течение 20-48 ч, концентрирование осуществляют методом
разделительной ультрафильтрации, а консервирование - добавлением теотропина в количестве 0,1-0,3 %.
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, в частности к производству
препаратов для профилактики колибактериоза у животных.
Известны способы получения адгезивных антигенов из бактерий [1, 3, 4, 5, 6].
Наиболее близким в техническом отношении к предлагаемому изобретению является
способ получения фимбриальных адгезинов из возбудителя Е. coli [2].
Согласно данному методу, культуру Е. coli после оптимального роста на бульоне Хоттингера осаждали при 3000 тыс. об./мин, надосадок сливали, а осадок ресуспендировали в
0,2 %-ном гидроксиламинно-фосфатном буфере, концентрацию клеток доводили до
40-50 млрд. микробных тел в см3, прогревали при температуре 70 °С в течение 20 мин и
центрифугировали при 10 тыс. об./мин в течение 20 мин. Надосадок сливали и использовали как источник фимбриальных антигенов.
Для устранения токсичности нативных фимбриальных антигенов добавляли от 0,1 до
0,5 об. % формалина (содержание 37-39 % формальдегида), смесь выдерживали в термостате при температуре 37 °С в течение 24 часов.
BY 10823 C1 2008.06.30
Полученные антигены реагировали в реакции диффузной преципитации (РДП) с гомологичными антиадгезивными колисыворотками в титре 1:8.
Недостатком известного способа является низкая биологическая активность целевого
продукта.
Задача изобретения - повышение биологической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что полученную бактериальную суспензию колибактерий обрабатывают аммиаком, а выделенный фимбриальный адгезин концентрируют
методом разделительной ультрафильтрации и консервируют теотропином.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что экстракцию проводят
0,25-1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 35-45 °С в течение 20-48 ч, концентрирование осуществляют методом разделительной ультрафильтрации, а консервирование добавлением теотропина в количестве 0,1-0,3 %.
Активность фимбриальных адгезинов колибактерий определяли в РДП.
Пример 1.
Баксуспензию колибактерий, содержащую 100-120 млрд./см3 микробных тел, экстрагировали 0,25 % раствором аммиака в течение 20 ч. Отделенный фимбриальный адгезин
концентрировали методом разделительной ультрафильтрации и консервировали теотропином в количестве 0,1 %.
Активность адгезинов в РДП - 1:64.
Пример 2.
То же, что в примере 1, но баксуспензию экстрагировали 0,1 % аммиаком в течение
48 часов.
Активность адгезинов в РДП составила 1:8.
Пример 3.
То же, что в примере 1, но баксуспензию экстрагировали 1,0 % аммиаком в течение
48 часов.
Активность адгезинов в РДП - 1:64.
Пример 4.
То же, что в примере 1, но баксуспензию экстрагировали 1,2 % аммиаком в течение
20 часов.
Активность адгезинов в РДП составила 1:32.
Пример 5.
То же, что в примере 1, но баксуспензию экстрагировали в течение 16 часов.
Активность адгезинов в РДП - 1:32.
Пример 6.
То же, что в примере 1, но баксуспензию экстрагировали в течение 50 часов.
Активность адгезинов в РДП составила 1:32.
Пример 7.
То же, что в примере 1, но адгезины консервировали 0,08 % теотропином.
Адгезины были контаминированы посторонними бактериями и выбракованы.
Пример 8.
То же, что в примере 1, но адгезины консервировали 0,12 % теотропином.
Активность адгезинов составила 1:32.
Пример 9 (прототип).
Культуру Е. coli после оптимального роста на бульоне Хоттингера осаждали при
3000 тыс. об./мин, надосадок сливали, а осадок ресуспендировали в 0,2 %-ном гидроксиламинно-фосфатном буфере, концентрацию клеток доводили до 40-50 млрд. микробных тел в см3, прогревали при температуре 70 °С в течение 20 мин, центрифугировали
при 10 тыс. об./мин в течение 20 мин. Надосадок сливали и использовали как источник
фимбриальных антигенов.
2
BY 10823 C1 2008.06.30
Фимбриальные антигены консервировали 0,1 %-ным формалином. Смесь инкубировали при температуре 37 °С в течение 24 ч.
Полученный адгезин реагировал в РДП в титре 1:8.
Пример 10 (прототип).
То же, что в примере 9, но антиген консервировали 0,5 %-ным формалином.
Активность адгезинов в РДП - 1:8.
Таким образом, из данных, представленных в примерах, видно, что экстрагирование
колибактерий 0,25-1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 35-45 °С в течение
20-48 ч, консервирование отделенного фимбриального адгезина 0,1-0,3 % теотропином
позволяет получить продукт с активностью в РДП 1:64, т.е. в 4 раза выше, чем по известному методу (прототипу).
Источники информации:
1. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. АМН СССР. - М.: Медицина,
1985. - С. 22-78.
2. Ломако Ю.В. Получение протективных антигенов на основе фимбриальных адгезинов
и исследование их свойств. Уч. записки ВГАВМ. - Витебск, 2002. - Т. 38, ч. 1. - С. 66-68.
3. Ломако Ю.В. Специфическая профилактика колибактериоза телят на основе адгезивных антигенов возбудителя: Автореф. дис. … канд. вет. наук. - Мн., 2003. - С. 10-12.
4. Овод В.В., Вершигора А.Е. Адгезивность бактерий. Успехи современной биологии. 1982. - Т. 94. - С. 213-224.
5. RU 2077377 С1, 1997.
6. ЕР 0666271 А1, 1995.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
74 Кб
Теги
патент, by10823
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа