close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10874

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 01H 1/04
СПОСОБ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ СОРТА ЛЮПИНА
УЗКОЛИСТНОГО К ИОНАМ СВИНЦА
(21) Номер заявки: a 20051096
(22) 2005.11.14
(43) 2007.08.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт экспериментальной ботаники имени В.Ф.Купревича Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Домаш Валентина Иосифовна; Шарпио Тамара Петровна;
Забрейко Светлана Алексеевна (BY)
BY 10874 C1 2008.08.30
BY (11) 10874
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт экспериментальной ботаники имени В.Ф.Купревича Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(56) RU 2007071 С1, 1994.
Головатый С.Е. и др. Природные ресурсы. - 2002. - № 3. - С. 120-125.
Моисеенко А.А. и др. Вестник Российской академии сельскохозяйственных
наук. - 2003. - № 1. - С. 51-54.
(57)
Способ оценки устойчивости сорта люпина узколистного к ионам свинца, отличающийся тем, что семена исследуемого сорта люпина проращивают в течение 3 суток в водной среде, содержащей Pb(NO3)2 в концентрации 0,3 мМ в опыте, и в водной среде, не содержащей Pb(NO3)2 в контроле, проростки из опыта и контроля измельчают, отбирают
соответствующие пробы по 0,5 г, растирают их с 20 мл 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,0,
оставляют на 1-1,5 ч при температуре от 3 до 4 °C для экстракции протеолитических ферментов, получают надосадочную жидкость, инкубируют ее с казеином, измеряют поглощение экстрактов при 280 нм и определяют протеолитическую активность (ПА) по формуле
(Е - Е ) ⋅ V ⋅ 3 ⋅ 60
,
ПА = о к
30 ⋅ н
где Ео - значение поглощения экстракта в опыте;
Ек - значение поглощения экстракта в контроле;
V - объем надосадочной жидкости, взятой для инкубации с казеином, мл;
н - масса пробы проростков в граммах в пересчете на абсолютно сухую массу,
при этом сорт люпина считают устойчивым к ионам свинца, если в расчете на 1 г абсолютно сухой массы ПА равна 13-15 единицам, среднеустойчивым, если ПА равна 25-27
единицам, и неустойчивым, если ПА равна 34-35 единицам.
Изобретение относится к физиологии и селекции растений и может быть использовано
при определении реакции сорта люпина узколистного к действию факторов внешней среды, в частности к ионам свинца.
Известен способ определения устойчивости растений к тяжелым металлам, предусматривающий выращивание растений в песчаной культуре на питательной смеси Кнопа с
BY 10874 C1 2008.08.30
добавлением тяжелых металлов, и определение устойчивости через отношение биомассы
на контроле и в опыте [1].
Недостатками способа являются трудоемкость процесса, отсутствие ранней диагностики и дифференциации растений по устойчивости, длительность селекционного отбора.
Известен способ определения устойчивости растений к тяжелому металлу, включающий выращивание растений на питательной смеси Кнопа с добавлением уксуснокислой
соли тяжелого металла и определение устойчивости через отношение массы растений в
присутствии соли тяжелого металла к массе растений на контроле без соли тяжелого металла [2].
Недостатками известного способа являются трудоемкость процесса, длительный методологический подбор концентраций для классификации устойчивости растений к соли
тяжелого металла.
Наиболее близким техническим решением является способ определения устойчивости
растений к тяжелым металлам, включающий выращивание растений на питательной смеси Кнопа в присутствии уксуснокислой соли тяжелого металла и без нее и последующее
определение устойчивости массы растений, выращенных в присутствии тяжелого металла
и без него, причем в качестве соли тяжелого металла используют уксуснокислый никель в
концентрации 3 мг/л, анализ массы растений проводят после 20-дневного выращивания и
при отношении масс 1,0-0,9 сорта устойчивы к никелю, при отношении 0,8-0,5 среднеустойчивы, при отношении менее 0,5 неустойчивы [3].
Однако этот способ обладает недостатком, заключающимся в отсутствии ранней диагностики, длительности и трудоемкости определения устойчивости растений к тяжелым
металлам.
Задачей является ранняя диагностика устойчивости люпина узколистного и ускорение
селекционного отбора.
Поставленная задача достигается тем, что в способе оценки устойчивости сорта люпина узколистного к ионам свинца семена исследуемого сорта люпина проращивают в течение 3 суток в водной среде, содержащей Pb(NO3)2 в концентрации 0,3 мМ в опыте, и в
водной среде, не содержащей Pb(NO3)2 в контроле, проростки из опыта и контроля измельчают, отбирают соответствующие пробы по 0,5 г, растирают их с 20 мл 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,0, оставляют на 1-1,5 ч при температуре от 3 до 4 °С для экстракции
протеолитических ферментов, получают надосадочную жидкость, инкубируют ее с казеином, измеряют поглощение экстрактов при 280 нм и определяют протеолитическую активность ПА по формуле
(E − E к ) ⋅ V ⋅ 3 ⋅ 60 ,
ПА = o
30 ⋅ н
где Ео - значение поглощения экстракта в опыте;
Ек - значение поглощения экстракта в контроле;
V - объем надосадочной жидкости, взятой для инкубации с казеином, мл;
н - масса пробы проростков в граммах в пересчете на абсолютно сухую массу,
при этом сорт люпина считают устойчивым к ионам свинца, если в расчете на 1 г абсолютно сухой массы ПА равна 13-15 единицам, среднеустойчивым, если ПА равна 25-27
единицам, и неустойчивым, если ПА равна 34-35 единицам.
Пример.
Семена различных сортов люпина узколистного (Lupinus angustifolius L.) проращивают в течение 3 суток в водной среде, содержащей 0,3 мМ Pb(NO3)2 в опыте, и в водной
среде, не содержащей Pb(NO3)2 в контроле, проростки из опыта и контроля измельчают,
отбирают соответствующие пробы по 0,5 г, растирают их с 20 мл 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,0, оставляют на 1-1,5 часа при температуре от 3 до 4 °С для экстракции протеолитических ферментов. Смесь центрифугируют 10-15 мин при 5-6 тыс. об/мин. В надосадочной жидкости определяют активность протеолитического фермента следующим образом.
2
BY 10874 C1 2008.08.30
В три опытные и контрольные пробирки (трехкратная повторность) вносят по 1 мл фосфатного буфера, рН 7,0, и 1 мл надосадочной жидкости. В контрольные пробирки вносят
по 3 мл 5 %-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Пробирки ставят в водяную баню при
37 °С и через 1-2 мин добавляют по 1 мл 1 %-ного раствора казеина в 1/15 М фосфатном
буфере, рН 7,0 (готовят путем растворения 1 г казеина в 100 мл 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,0, и нагревания на водяной бане до полного растворения). Пробирки тщательно
перемешивают и инкубируют 30 мин, после чего в опытные образцы добавляют по 3 мл
5 %-ной ТХУ для прекращения действия фермента. После этого содержимое пробирок
(опытных и контрольных) фильтруют через плотный бумажный фильтр и измеряют поглощение экстрактов при 280 нм. Протеолитическую активность (ПА) определяют по формуле
(E − E к ) ⋅ V ⋅ 3 ⋅ 60 ,
ПА = o
30 ⋅ н
где Ео - значение поглощения экстракта в опыте;
Ек - значение поглощения экстракта в контроле;
V - объем надосадочной жидкости, взятой для инкубации с казеином, мл;
н - масса пробы проростков в граммах в пересчете на абсолютно сухую массу.
В таблице приведены данные определения.
№ п/п
Сорта люпина
узколистного
1
2
Эдельвейс
Пралеска
3
4
Першацвет
Михал
5
6
Гуливер
Миртан
Активность протеолитиче- Индекс толерантности
ского фермента (ПА)/г абс.
(ИТ)
сух. массы
35,20
0,15
34,95
0,21
неустойчивые ср. 35,10
25,90
0,27
27,00
0,30
среднеустойчивые ср. 26,40
15,54
0,38
13,31
0,34
устойчивые ср. 14,00
Сорт люпина считают устойчивым к ионам свинца, если в расчете на 1 г абсолютно
сухой массы ПА равна 13-15 единицам, среднеустойчивым, если ПА равна 25-27 единицам, и неустойчивым, если ПА равна 34-35 единицам.
Анализ данных таблицы показал, что ПА в семенах люпина коррелирует с индексом
толерантности. Коэффициент корреляции (r) равен -0,92.
Таким образом, при оценке устойчивости сорта люпина узколистного к ионам свинца
активность протеолитического фермента можно определить в 30 образцах за 8-часовой
рабочий день, а весь способ оценки занимает трое суток. Способ прост в исполнении, экономит растительный материал и значительно ускоряет процесс.
Источники информации:
1. Ильин В.Б, Гармаш Г.А., Гармаш Н.Ю. Влияние тяжелых металлов на рост, развитие и урожайность сельскохозяйственных культур // Агрохимия. - 1985. - № 6. - С. 90-100.
2. Jowert D. Population studies in lead tolerant Agrostis tenuls.// Evolotion. - 1964. - Vol.18. N1. - P.70-84.
3. Патент RU 2007071, МПК7 A 01G 7/00, 1994 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
82 Кб
Теги
by10874, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа