close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY10942

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 10942
(13) C1
(19)
A 01K 61/00
БАКТЕРИАЛЬНОЕ УДОБРЕНИЕ ДЛЯ РЫБОВОДНОГО ПРУДА
(21) Номер заявки: a 20050916
(22) 2005.09.23
(43) 2007.06.30
(71) Заявитель: Республиканское дочернее унитарное предприятие "Институт рыбного хозяйства" Республиканского унитарного предприятия "Научно-практический центр
Национальной академии наук Беларуси по животноводству" (BY)
(72) Авторы: Скурат Эвелина Казимировна; Сиволоцкая Валентина Алексеевна; Говор Татьяна Альфонсовна; Асадчая Раиса Леонидовна (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
дочернее унитарное предприятие "Институт рыбного хозяйства" Республиканского унитарного предприятия
"Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по
животноводству" (BY)
(56) Винберг Г.Г. и др. Удобрение прудов. Москва: Пищевая промышленность,
1965. - С. 90-91.
BY 2971 C1, 1999.
RU 2148571 C1, 2000.
BY 10942 C1 2008.08.30
(57)
Бактериальное удобрение для рыбоводного пруда, содержащее клетки азотобактер,
отличающееся тем, что содержит в качестве азотобактера штамм Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16 Д и, дополнительно, штамм Azomonas agilis КМИЭВ 6-28 Д и комбикорм для прудовых карповых рыб в качестве адсорбента, причем 1 г удобрения влажностью 7-9% содержит 5 млн. живых клеток указанных штаммов, взятых в соотношении,
соответственно, 1 : 4.
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается производства бактериальных удобрений, которые могут найти применение в рыбоводстве во внутренних водоемах для повышения рыбопродуктивности и профилактики болезней рыб (аэромоноз, воспаление плавательного пузыря - секундарная инфекция и др.).
Известно применение минеральных удобрений (например, азотные удобрения - мочевина, нитратные) в рыбоводстве, которые способствуют повышению первичной продукции фитопланктона и выделению фитопланктоном в пруду кислорода [1].
Но применение минеральных удобрений имеет недостаток, заключающийся в том, что
эти удобрения усваиваются, в первую очередь, высшей водной растительностью, что приводит к зарастанию прудов. Кроме того, азот минеральных удобрений связывается с донными соединениями и значительное количество биогена переходит в органическое состояние, недоступное для гидробионтов.
Известно применение органических удобрений, например навоза, в рыбоводных прудах с целью обеспечения дополнительного прироста рыбопродукции [2].
BY 10942 C1 2008.08.30
Но навоз нарушает экологическое равновесие прудовой системы в вегетационный период, так как это приводит к снижению содержания кислорода в воде, что может вызвать
заморные явления.
Известно также бактериальное удобрение, состоящее из культур бактерий «азотобактерин», выделенных из почвы. Причем «азотобактерин» вносился в пруд на адсорбенте торфе [3].
Однако культуры бактерий «азотобактерин», выделенные из почвы, в прудах приживаются очень плохо, т.к. в условиях водоема могут быть пригодны только специальные
препараты, приготовленные на основе штаммов, выделенных не из почвы, а из водной
среды. Кроме того, это удобрение не пригодно для профилактики болезней рыб.
Задачей настоящего изобретения является создание бактериального удобрения, повышающего рыбопродуктивность прудов и одновременно способного профилактировать отдельные инфекционные болезни рыб (например аэромоноз, воспаление плавательного пузыря - секундарная инфекция и др.).
Поставленная задача достигается тем, что бактериальное удобрение для рыбоводного
пруда, содержащее клетки азотобактер, содержит в качестве азотобактера штамм Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д и, дополнительно, штамм Azomonas agilis КМИЭВ
6-28Д и комбикорм для прудовых карповых рыб в качестве адсорбента, причем 1 г удобрения влажностью 7-9 % содержит 5 млн. живых клеток указанных штаммов, взятых в соотношении, соответственно, 1 : 4.
Штамм Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д имеет следующую характеристику.
Морфология. Овальные клетки 2 мкм и более в поперечнике, длина варьируется
вплоть до кокковидной формы. Встречаются поодиночке, парами и неправильными группами; лишь редко образуют цепочки более чем из 4 клеток. Отмечается выраженный полиморфизм. Эндоспор не бывает, но образуются толстостенные цисты. Могут вырабатывать большое количество капсульной слизи. Движутся с помощью перитрихиальных
жгутиков или неподвижны. Обычно грамотрицательные, но реакция по Грамму варьирует.
Физиология. Как правило, несимбиотически фиксируют по меньшей мере 10 мг атмосферного азота на 1 г потребленного углевода. Среда для роста содержит углеводы (обычно глюкозу), спирты или органические кислоты.
Не протеолитические, но могут использовать нитрат, аммиак и аминокислоты как источники азота.
Каталазоположительные. Хорошо растут в аэробных условиях, но могут расти и при
пониженном парциальном давлении кислорода.
Оптимальная температура между 20 и 30 °С. Пределы рН для роста 5,5-8,5, оптимум 7,0-7,5.
Содержание Г + Ц в ДНК от 63 до 66 мол. % [4].
Штамм Azomonas agilis КМИЭВ 6-28Д - антагонист бактерий-возбудителей аэромоноза рыб. Обладает устойчивым ингибирующим действием по отношению к возбудителям
аэромоноза, не патогенен и не токсичен для рыб и лабораторных животных.
Штамм Azomonas agilis КМИЭВ 6-28Д имеет следующую характеристику.
Морфология. Клетки размерами 2,5-5,0×1,5-3,0 мкм., овальные или мелкие, кокковидные. Расположены одиночно, парами или группами. Полиморфны. Колонии не пигментированы. Эндоспор и цист не образуют, подвижны, выделяют капсульную слизь. Грамвариабельны.
Физиология. Растет на среде Эшби при 20-30 °С и при рН 5-9. Аэроб. Желатину не
разжижает, вызывает помутнение МПБ. Редуцирует метиленовую синь и нитраты.
Отношение к углеводам. Разлагает сахарозу, лактозу, глюкозу, мальтозу с образованием кислоты и газа.
2
BY 10942 C1 2008.08.30
Отношение к спиртам. Разлагает манит. Дульцит не разлагает. Не обладает аминолитической активностью, не гемолизует эритроциты барана. Каталазоположителен.
На стерильном обезжиренном молоке и в молочной сыворотке образует молочную кислоту и витамины группы «В».
Не патогенен и не токсичен для теплокровных лабораторных животных (контрольные
исследования БелНИЭВ).
Токсикогенность. Смывы суточных агаровых культур в концентрации 1,5 млрд.,
1,0 млрд., 50 млн. микробных тел, инактивированные нагреванием, не вызывали гибели
белых мышей при внутрибрюшинном введении.
Вирулентность. Введение смывов 18-часовой агаровой культуры в разведении 1,5 млрд.,
1,0 млрд., 50 млн. белым мышам не сопровождалось гибелью.
Обладает устойчивым ингибирующим действием к бактериям рода Aeromonas - возбудителям аэромоноза рыб.
Отношение к антибиотикам. Устойчив к рифампицину и левомицетину, чувствителен
к ампицилину, стрептомицину, эритромицину.
Хранится на среде Эшби в холодильнике при 4-6 °С и в лиофилизированной культуре
при 4 °С [5].
В заявленном изобретении в качестве адсорбента используют комбикорм для прудовых карповых рыб. В принципе, можно использовать любой адсорбент (сухое молоко,
кукурузную муку), но наиболее оптимальным адсорбентом, обладающим наибольшей адсорбционной способностью, является комбикорм для прудовых карповых рыб, отвечающий определенным требованиям:
выпускается в виде гранул, что увеличивает адсорбционную поверхность;
срок хранения жизнеспособности бактерий на данном адсорбенте максимальный (1 год
против 1-3 месяцев на вышеприведенных адсорбентах, благодаря его физико-химическим
показателям (влажность, физико-химические свойства, позволяющие подвергать его необходимой для создания удобрения стерилизации при 120 °С)).
Всем этим требованиям отвечает комбикорм для прудовых карповых рыб [6].
Для выполнения поставленной задачи нами изучалась возможность симбиотического
развития отобранных штаммов.
Целью являлось получение симбиоза двух штаммов бактерий, активно фиксирующих
азот водной среды, подавляя при этом численность аэромонад - возбудителей инфекционных заболеваний рыб. Следует отметить, что бактерии p. Aeromonas относятся к группе
условно-патогенных. Они широко представлены в водной среде практически всех водоемов, являются постоянными обитателями организма водных животных, при понижении
резистентности которых аэромонады приобретают вирулентные свойства, что приводит к
развитию патологического процесса. Для получения симбиоза испытывались различные
комбинации соотношений Azotobacter chroococcum КМИ-ЭВ 7-16Д и Azomonas agilis
КМИЭВ 6-28Д.
Пример 1
Для создания удобрения испытана комбинация, состоящая из равного количества
(в соотношении 1 : 1) бактерий обоих штаммов: 2,5 млн. мк/г субстрата.
Удобрение помещалось в аквариумы, заполненные прудовой водой, результаты учитывались через 48 часов. В результате дополнительных исследований было установлено,
что в воде доминировали бактерии Azotobacter chroococcum, их численность составляла
92 % от общего количества азотфиксаторов. Как наиболее активный азотфиксатор Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д подавлял численность Azomonas agilis КМИЭВ 6-28Д в
условиях пищевой конкуренции. Поставленная задача не достигается, так как количество
Azomonas agilis КМИЭВ 6-28Д недостаточно для подавления бактерий рода Aeromonas.
3
BY 10942 C1 2008.08.30
Пример 2
Для создания удобрения испытаны бактерии Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д и
Azomonas agilis КМИЭВ 6-28Д в соотношении 1 : 4 соответственно (1 и 4 млн. мк/г). Аналогично примеру 1, бактериальное удобрение помещалось в аквариумы с прудовой водой.
При учете результатов через 48 часов было установлено, что количество бактерий в воде
приближалось к равновесию и составило 45 % бактерий штамма Azomonas agilis КМИЭВ
6-28Д и 56 % Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д. Численность аэромонад по сравнению с контролем сократилась на 42 %.
Таким образом, симбиоз из бактериальных штаммов в соотношении 1 : 4 оказался оптимальным, отвечал поставленной задаче и лег в основу создания бактериального удобрения.
Бактериальное удобрение производится в условиях лаборатории, представляет собой
гранулы, в 1 г которого содержится не менее 5 млн. живых клеток азотфиксирующих бактерий.
Удобрение расфасовывается в полиэтиленовые пакеты, маркируется, хранится в сухом
помещении при температуре от 5 до 20 °С. При хранении в данных условиях жизнеспособность бактерий сохраняется в течение года.
Для производства удобрений разработана технологическая схема, состоящая из следующих этапов:
1. Культивирование штаммов бактерий производится на жидкой питательной среде
(модифицированный рецепт среды Эшби), содержащей в 1 л дистиллированной воды: сахарозы - 20 г; К2НРО4, MgSO4·7H2O, NaCl - по 0,2 г; H2SO4 - 0,1 г; СаСО3 - 5 г.
2. Стерильная среда разливается в 2-х литровые емкости, в которые вносится по 10 мл
смыва 2-х суточной агаровой культуры азотфиксирующих бактерий (каждый штамм в отдельной емкости).
После 48 часов культивирования в термостатах при температуре 26-28 °С подсчитывается количество бактерий методом прямого счета в 1 мл, затем готовится бактериальная
смесь, содержащая Azotobacter chroococcum КМИЭВ 7-16Д и Azomonas agilis КМИЭВ
6-28Д в соотношении 1 : 4.
Предварительно простерилизованный комбикорм (стерилизация сухим жаром 2 часа
при температуре 120-130 °С) погружается на 5 мин в резервуар с культуральной массой
для адсорбции бактерий, после чего просушивается в термостате при температуре, не превышающей 37 °С. 1 кг адсорбента поглощает в среднем 700 мл культуральной жидкости,
т.е. содержит примерно 70 % бактериальной биомассы, не инактивированной нагреванием. В 1 г полученного препарата (при влажности 7-9 %) содержится не менее 5 млн. живых клеток азотфиксирующих бактерий. Каждая партия полученного удобрения подвергается бактериологическому контролю.
Бактериальное удобрение широко внедряется в рыбоводных предприятиях республики.
Наибольший эффект получен при использовании его в выростных прудах. При этом
рыбопродуктивность прудов повышается на 0,5-1,0 ц/га, рыбопосадочный материал за
счет высоких показателей объектов кормовой базы (как фито-, так и зоопланктона) имеет
большую массу и хорошие физиологические показатели (общая резистентность). Уровень
заболевания воспалением плавательного пузыря (ВПП) ниже контрольного на 40-50 % и
протекает в более доброкачественной (хронической) форме.
Влияние бактериального удобрения на продуктивность рыбоводных прудов на опытном ХРУ «Вилейка» представлено в таблице.
4
BY 10942 C1 2008.08.30
Влияние бактериального удобрения на продуктивность рыбоводных прудов
Бактериопланктон
Фитопланктон
Зоопланктон
Рыбоводные показатели
экстенчисленрыбо№
сивность
численчисленбиомасбиомас- ность, биомас- средняя продукпруда ность,
ность, тыс.
поражеса, мг/л
са, мг/л
тыс.
са, мг/л масса, г тивность,
ния ВПП,
млн./мл
экз./мг
экз./мг
ц/га
%
Опытные пруды*
1
2,7-4,2 2,2-3,3
938-1500 2,6-8,1 52-935 1-17,5
23,0
13,5
28,0
2
2,9-6,2 2,7-4,9 319-37000 1,0-11,8 95-375 4,3-62,5
30,0
6,6
22,0
сред2,8-5,2 2,5-4,1 628,5-19250 1,8-9,9 73,5-655 2,7-40,0
26,5
10,1
25,0
нее
Контрольные пруды**
1
1,6-3,8 1,3-3,0 2125-6817 3,5-5,9 78-100 2,7-5,7
9,4
6,1
65,0
2
2,0-3,0 1,2-2,4 3516-9075 5,9-9,6 81-164 2,9-5,9
6,0
5,7
78,0
сред1,8-3,4 1,25-2,7 2820,5-7946 4,7-7,7 79,5-132 2,8-5,8
7,7
5,9
71,5
нее
Примечание: * бактериальное удобрение внесено трижды за вегетационный сезон;
** бактериальное удобрение не вносилось.
Источники информации.
1. Гусев Е.Е. Химизация рыбоводства. - М.: Россельхозиздат, 1985. - С. 90-91.
2. Винберг Г.Г., Ляхнович В.П. Удобрение прудов. - М.: Пищевая промышленность,
1965. - С. 232-233.
3. Винберг Г.Г., Ляхнович В.П. Удобрение прудов. - М.: Пищевая промышленность,
1965. - С. 90-91 (прототип).
4. Краткий определитель бактерий Берги / Под ред. Дж.Хоулта / Пер. с англ. к.б.н.
С.Ш. Тер-Казарьяна; под ред. чл-корр. АН СССР Г.А. Заварзина. - М.: Мир, 1980. - С. 123.
5. Патент № 2971 BY, МПК6 C 12N 1/20, А 01K 61/00.
6. ГОСТ 10385-88 СССР «Комбикорма для прудовых рыб».
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
103 Кб
Теги
by10942, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа