close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11063

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 11063
(13) C1
(19)
A 61B 17/00
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА
(21) Номер заявки: a 20051268
(22) 2005.12.20
(43) 2007.08.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Игнатович Игорь Николаевич; Леонович Сергей Иванович
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Белорусский государственный медицинский университет"
(BY)
(56) BY а20030138, 2004.
BY а20000014, 2001.
BY 3720 С1, 2000.
UA 39046А, 2001.
Игнатович И.Н. Медицинская панорама. - 2002. - № 4. - С. 12-14.
Игнатович И.Н. и др. Труды молодых
ученых: Сб. научн. работ. - Мн., 2000. С. 104-106.
Леонович С.И. и др. Белорусский медицинский журнал. - 2004. - № 1. С. 55-57.
Шотт А.В. и др. XII съезд хирургов
Республики Беларусь. Материалы съезда. Ч. II. - Мн., 2002. - С. 280-281.
Прохоров А.В. и др. Хирургия. - 2005. № 3. - С. 52-55.
BY 11063 C1 2008.08.30
(57)
Способ лечения сахарного диабета путем трансплантации ксеногенной культуры эмбриональных островковых клеток в красный костный мозг реципиента, отличающийся
тем, что через год дополнительно осуществляют трансплантацию в мышечную ткань.
Изобретение относится к трансплантологии, хирургии, эндокринологии, а именно к
лечению инсулинзависимой формы сахарного диабета.
Известен способ внедрения инсулина путем инъекций, но постоянные инъекции ухудшают качество жизни больного, опасны гнойными осложнениями.
В связи с этим предпринимаются попытки хирургического лечения сахарного диабета.
Известен способ пересадки поджелудочной железы [1]. Однако эта операция технически сложна, опасна развитием осложнений.
Известен способ депортализации венозного оттока от поджелудочной железы путем
наложения спленоренального анастомоза [2], но эта операция также технически сложна,
опасна и травматична.
Наиболее близким по технической сущности решением является способ лечения сахарного диабета путем трансплантации ксеногенных островковых клеток в сосудистое
русло [3]. Проведение операции технически сложно, связано со вскрытием просвета сосуда, и имеется риск кровотечения, нарушения кровообращения и тромбоза.
BY 11063 C1 2008.08.30
Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, заключается в лечении сахарного диабета путем повторных малоинвазивных ксенотрансплантаций эмбриональных островковых клеток без назначения иммунодепрессантов.
Поставленная задача решается предлагаемым способом лечения сахарного диабета
путем ксенотрансплантаций эмбриональных островковых клеток в красный костный мозг
и повторных через 1 год в мышечную ткань.
Это обеспечивает развитие в организме реципиента иммунологической толерантности
к трансплантату. Ксеногенные островковые клетки функционируют без дополнительной
иммунодепрессии. С течением времени (1 год) эффект трансплантации снижается. Тогда
возможна повторная ксенотрансплантация через 1 год, но менее травматичным способом в мышечную ткань. Трансплантат в мышечной ткани функционирует в связи с уже ранее
развившейся (индуцированной трансплантацией в красный костный мозг) иммунологической толерантностью организма реципиента к ксеногенным островковым клеткам.
Способ осуществляют следующим образом.
Культуру островковых клеток выделяют из эмбриональной ксеногенной (крысиной,
15-21 день) поджелудочной железы с использованием коллагеназы. Сразу после получения ткань поджелудочных желез эмбрионов крыс помещают в среду RPMI 1640 (приложение) температуры 8 °С. Железы рассекают до фрагментов размером 0,3 мм. В течение
15 мин производят промывание фрагментов средой RPMI, температуры 8 °С, в которую
добавлен гентамицин в количестве 40 мкг/мл. После этого полученные фрагменты обрабатывают коллагеназой (Sigma, Туре XI, С9407) в концентрации 1 ЕД/мл в течение 35 мин.
После отмывки в течение 10 мин средой RPMI температуры 15 °С осадок помещают во
флаконы, содержащие 10 %-й раствор эмбриональной телячьей сыворотки (серия 11) в
среде RPMI с добавлением гентамицина в количестве 20 мкг/мл. Культивирование проводят при температуре 37 °С в контакте с газовой средой, содержащей 95 % кислорода. К 7м суткам вся площадь дна используемой посуды покрыта монослоем клеток, состоящим
преимущественно из полигональных элементов с редко встречающимися веретенообразными клетками фибробластоподобного типа. Начиная с 7-х суток культуру островковых
клеток подвергают температурной адаптации при медленном снижении температуры
культивирования до 24 °С в течение 7 суток с дальнейшим постепенным подъемом температуры до 37 °С за то же время.
Проводят гистологическое исследование с окраской альдегид-фуксином, гематоксилин-эозином, и если выявлено преобладание в культуре клеток, имеющих альдегидфуксинпозитивные гранулы, - это характерно для островковых клеток.
Для подтверждения функционирования полученной культуры эмбриональных островковых клеток определяют активность инсулина в культуральной среде. Активность инсулина во всех исследуемых флаконах колебалась в пределах 24,7 ± 2,7 мкЕД/мл в сутки
(после полной смены среды). Стимуляция 8 мМоль глюкозы приводила к увеличению активности инсулина до 150 мкЕД/мл.
В экспериментальном исследовании на кроликах массой 3-4 кг. сахарный диабет вызывают внутривенным введением аллоксана в дозе 100 мг/кг массы тела лабораторного
животного. Через 10 дней после введения аллоксана производят контроль гликемии и при
уровне глюкозы выше 10,0 ммоль/л производят трансплантацию культуры эмбриональных островковых клеток.
Перед трансплантацией взвесь островковых клеток сепарируют, используя градиент
фикола 1020, 1045, 1075, 1085. Биомассу β-клеток отбирают после центрифугирования
при 550 g в течение 20 мин из среднего слоя. Содержание островковых клеток во взвеси
составляет около 3 миллионов.
Ксенотрансплантацию культуры островковых клеток осуществляют в красный костный мозг грудины. После обработки операционного поля раствором йодоната пунктируют
грудину толстой иглой. К игле присоединяют шприц со взвесью островковых клеток.
2
BY 11063 C1 2008.08.30
Взвесь островковых клеток вводят в красный костный мозг грудины. Иглу извлекают.
Иммунодепрессанты не назначают.
Повторную ксенотрансплантацию культуры островковых клеток осуществляют через
1 год в мышечную ткань бедра, пунктируя ее толстой иглой. Взвесь островковых клеток
вводят в мышечную ткань. Иглу извлекают. Иммунодепрессанты не назначают.
Методика обладает следующими преимуществами:
1) простота и доступность в исполнении;
2) отсутствие возможных тяжелых осложнений;
3) малая инвазивность и возможность повторных трансплантаций.
Проведено экспериментальное исследование на 5 кроликах.
Пример 1.
За 10 дней до трансплантации кролику массой 4 кг вводят аллоксан внутривенно 100
мг/кг. Трансплантацию ксеногенных островковых клеток крысиных эмбрионов осуществляли в красный костный мозг грудины кролика-реципиента. На 180 и 360 дни после
трансплантации исследовали уровень гликемии в венозной крови.
На 180 день уровень гликемии составил 5,89 ± 0,22 ммоль/л, на 360 день - 6,99 ± 0,28
ммоль/л.
Таким образом, ксенотрансплантат в красном костном мозге функционировал, обеспечивал нормализацию гликемии. Но с течением времени эффект трансплантации снижался.
В связи с этим через 1 год проводилась повторная ксенотрансплантация в мышечную
ткань кроликам с индуцированной толерантностью (предшествующая трансплантация в
красный костный мозг). Для оценки эффекта повторной трансплантации проведено сравнение уровня гликемии кроликов с индуцированной толерантностью (трансплантации в
красный костный мозг культуры островковых клеток) до и через 180 дней после повторной трансплантации в мышцу (таблица).
Уровень гликемии после трансплантации
Трансплантация в красный костный мозг
Трансплантация в красный костный мозг,
затем через 1 год в мышцу.
Через 180 дней
Через 360 дней
Через 180 дней
6,43
7,57
6,21
4,57
6,79
5,11
5,69
7,13
6,78
6,01
6,46
6,07
6,23
7,76
6,35
До трансплантации уровень гликемии составил 6,99 ± 0,29 ммоль/л, после повторной
трансплантации в мышцу - 6,10 ± 0,28 ммоль/л. Имеются достоверные различия указанных параметров (Р < 0,05), т.е. повторная трансплантация в мышцу у кроликов с индуцированной толерантностью является эффективной.
Уровень фруктозамина у кроликов с трансплантатом в красном костном мозге через
180 дней составил 165,9 ± 7,5 нмоль/л. Уровень фруктозамина у кроликов с индуцированной толерантностью и повторной трансплантацией в мышцу через 180 дней составил
182,0 ± 3,9 нмоль/л.
Это говорит о хорошей компенсации моделированного сахарного диабета и об эффективности указанных выше способов трансплантации.
3
BY 11063 C1 2008.08.30
Приложение
Таким образом, предложенный способ лечения сахарного диабета позволяет нормализовать гликемию, не требует дополнительного назначения иммунодепрессантов, технически прост и характеризуется отсутствием тяжелых осложнений.
Источники информации:
1. А.с. СССР 1147364, МПК А 61В 17/00.
2. А.с. СССР 1718833, МПК А1 61В 17/00.
3. Заявка на патент РБ а20030138.
4. Справочник-каталог продукции фирмы ICN, 1996. - С. 846.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
94 Кб
Теги
патент, by11063
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа