close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11164

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 11164
(13) C1
(19)
A 61K 31/185
A 61K 33/30
КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ
МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ ПЕЧЕНИ
(21) Номер заявки: a 20050673
(22) 2005.07.05
(43) 2007.04.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Шейбак Владимир Михайлович; Горецкая Марианна Викторовна; Смирнов Виталий Юрьевич;
Лис Руслан Евгеньевич (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(56) РАЗВОДОВСКИЙ Ю.Е. и др. Биомедицинская химия. - 2004. - Т. 50. № 1. - С. 64-72.
BY 1344 С1, 1996.
SU 704621, 1979.
RU 2131247 С1, 1999.
СМИРНОВ В.Ю. и др. Журнал ГГМУ. 2004. - № 1. - С. 24-26.
ПОДЫМОВА С.Д. Болезни печени. М.: Медицина, 2005. - С. 263-266,
277-278.
BY 11164 C1 2008.10.30
(57)
Композиция для коррекции нарушений метаболической функции печени, содержащая
таурин и сульфат цинка в соотношении 4:1.
Изобретение относится к области медицины, а именно к парафармацевтической промышленности, производящей препараты лечебного и профилактического назначения, и
может быть использовано в качестве вспомогательного средства, способствующего коррекции нарушений метаболической функции печени.
Известен препарат гепатил (L-орнитина-L-аспартат; Гепа-Мерц; Орницетил), используемый для лечения печеночной недостаточности, который на экспериментальной модели
печеночной недостаточности в дозе 330 мг/кг в час снижал уровень аммиака в плазме крови и уменьшал вероятность отека мозга [Подымова С.Д., Надинская Н.Ю., Буеверов А.С.
Печеночная энцефалопатия: применение Гепа-Мерца и методы контроля его эффективности // Клин. фарм. и терапия. - 1996. - № 1. - С. 16-18.; Leweling H. Effects of ornitine aspartate on plasma ammonia and plasma amino acids in patients with liver cirrosis. A double-blind,
randomized study using a four-fold crossover design // J. Hepatol. - 1990. - V. 10, suppl. L].
Введение препарата повышало в плазме крови содержание глутамата, таурина, ГАМК,
аланина, лейцина, валина и изолейцина.
Недостатком этого препарата является необходимость введения больших его доз, что
негативно влияет на усвоение питательных веществ организмом.
Известен препарат аминостерил N-Hepa (Fresenius AG) для лечения поражений печени
(разветвленные аминокислоты, ароматические аминокислоты, метионин), который позволяет осуществлять достаточное поступление аминокислот в рамках полного парентерального питания. Аминостерил не содержит углеводов и электролитов [Инфузионная терапия
и клиническое питание / Под ред. А.Г.Хлябича-Фрезениус, 1992. - 795 с.; Тулбаев Э.Л.,
BY 11164 C1 2008.10.30
Нартайлаков М.А., Галимов Ш.Н. Современные аспекты метаболической терапии печеночной недостаточности // Здравоохранение Башкортостана. - 1999. - № 5. - С. 52-57].
Недостатком препарата является большой список противопоказаний (гипергидратация, гипонатриемия, гипокалиемия, сердечная недостаточность). Внутривенное введение
аминостерила может провоцировать повышенную продукцию соляной кислоты и возникновение стресс-язвы.
Наиболее близким к предлагаемому является препарат тавамин, используемый для
нормализации нарушенной функции печени, состоящий из аминокислот лейцина, изолейцина, валина и таурина [Разводовский Ю.Е., Дорошенко Е.М., Прокопчик Н.И. и др. Гепатопротективные эффекты аминокислот с разветвленной цепью и таурина при экспериментальной субхронической алкогольной интоксикации и отмене этанола // Биомед. Химия. 2004. - № 1. - С. 64-72].
Недостатком известного препарата является то, что он содержит высокие дозы аминокислот, что чревато развитием гипераммониемии, снижает аппетит и не приводит к полноценной нормализации аминокислотного баланса в плазме крови.
Задачей изобретения является разработка нового доступного лекарственного препарата - биологически активной добавки, способствующей коррекции нарушенной метаболической функции печени.
Изобретение направлено на расширение ассортимента лекарственных средств, используемых для лечения острых и хронических заболеваний печени.
Поставленная задача решается путем создания композиции, содержащей таурин и
цинка сульфат в количественном соотношении 4:1 в дозах, не превышающих 100 мг/кг в
отношении таурина и 25 мг/кг в отношении цинка сульфата.
Известно, что у пациентов с недостаточностью функции печени возникает дисбаланс
аминокислотного состава плазмы крови, что приводит к увеличению поступления ароматических аминокислот (фенилаланин, тирозин) в ткань мозга и провоцирует развитие печеночной энцефалопатии. Более выраженный дисбаланс характеризует более тяжелую стадию
печеночной недостаточности у больного. Поскольку аминокислотный состав плазмы крови
является интегральным показателем, в силу взаимосвязи всех метаболических путей, отражающим степень нарушения обменных процессов в организме, его анализ может использоваться для определения эффективности проводимой коррекции нарушенной функции
печени.
Приводим результаты эксперимента, подтверждающего возможность осуществления
изобретения.
Эксперимент проводился на белых крысах-самках породы Вистар массой 170-200 г.
Животные были разделены на 3 группы (одна контрольная и 2 опытные), по 8 штук в каждой. В качестве агента, поражающего печень, использовали парацетамол, который вводили в желудок в виде взвеси в 2 % слизи крахмала 1 раз в день ежедневно в течение 5 дней
в дозе 750 мг/кг массы тела [Кравчук Р.И. и др. // Журнал ГГМУ. - 2005. - № 1. - C. 56-72].
После декапитации животных в пробирки забирали кровь и выделяли печень. Один
кусочек печени фиксировали в жидкости Карнуа, а другой замораживали в жидком азоте.
Из фиксированной в жидкости Карнуа печени готовили гистологические препараты, окрашенные гематоксилином и эозином. На препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, производилась общая оценка морфологического состояния ткани печени.
Из замороженных в жидком азоте кусочков печени плодов готовили криостатные срезы на микротоме - криостате МК-25. На криостатных срезах проводили тетразолиевые
гистохимические реакции по выявлению активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - маркера
анаэробного гликолиза, NADH-дегидрогеназы (НАДН-ДГ) - показателя активности митохондриальных процессов и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) - маркера ЦТК. На гистохимических препаратах печени определялся уровень активности вышеуказанных ферментов в
цитоплазме гепатоцитов. Уровень активности ферментов учитывался с помощью микро2
BY 11164 C1 2008.10.30
абсорциометра-флюориметра в комплекте со сканирующим микроскопом МФТХ-2М
(ЛОМО) по коэффициенту пропускания окрашенного среза в единицах оптической плотности. Фотометрирование уровня активности дегидрогеназ производилось при длине волны 580 нм.
У всех интактных животных наблюдается нормальная картина печени. Архитектоника
печени после введения парацетамола соответствовала норме. Однако наблюдалась картина гепатита: ступенчатый некроз, перипортальный лимфоцитоз, диффузный лимфоцитоз.
Кроме того, наблюдается очаговый кариолизис и баллонная дистрофия. У животных этой
группы гепатоциты без признаков патологических изменений наблюдаются в основном
центролобулярно. Уровень активности СДГ и НАДН-ДГ соответствует показателям у интактных животных. Уровень активности ферментов в гепатоцитах опытных групп либо
соответствует интактным показателям, либо превышает их.
В табл. 1 показаны концентрации свободных аминокислот и их производных в плазме
крови на фоне введения парацетамола, таурина и сульфата цинка.
Курсовое введение парацетамола привело к достоверному снижению общего пула свободных аминокислот в плазме крови (табл. 1), что, вероятно, обусловлено усилением утилизации аминокислот в метаболических процессах. При этом соотношение суммарных
концентраций заменимых и незаменимых аминокислот практически не изменялось. Усиливается образование глутамина (табл. 1), что проявляется достоверным падением концентрации глутаминовой кислоты в плазме крови (соотношение глутамат/глутамин). Как
отражение активации процессов биосинтеза белка можно расценивать падение в плазме
крови уровней метионина (на 22 %), лизина (на 16 %) и тирозина (на 18 %). Одной из причин
снижения концентрации глицина может быть усиленное использование его в процессах
детоксикации в печени. Уменьшение уровня метионина является, вероятно, отражением
снижения содержания уровня его метаболита - таурина - на 24 % (что также подтверждается усилением корреляционной зависимости между их концентрациями) вследствие возможного усиления его утилизации в реакциях конъюгации желчных кислот. У животных,
которым вводили одновременно парацетамол и таурин, сохранялась общая направленность изменений аминокислотного пула плазмы крови (табл. 1). В данной группе также
имело место уменьшение содержания заменимой аминокислоты глицина и незаменимых метионина и тирозина. Одновременно у этих животных выявлено падение (на 17 %) уровня
глутамина в плазме крови. Несмотря на в целом меньшую степень обеднения плазменного
пула свободных аминокислот, степень дисбаланса была более выражена. Так, помимо сохранения увеличенным соотношения АРУЦ/ААК, выросли значения коэффициентов глутамат/глутамин (с 0,13 до 0,23) и фенилаланин/тирозин (с 0,80 до 0,94). При этом между
уровнями фенилаланина и тирозина отмечалось появление высокодостоверной положительной корреляции (r = 0,95).
Все это говорит о торможении образования тирозина из фенилаланина. Наряду с этим
обращает на себя внимание появление положительных корреляций (г = 0,83-0,85) между
уровнем таурина и уровнями АРУЦ, что наблюдалось и при введении парацетамола
(r = 0,89-0,91).
У животных, которым вводили помимо парацетамола композицию, состоящую из таурина и цинка сульфата, обнаружено снижение концентрации в плазме крови незаменимых
аминокислот лизина (на 23 %) и метионина (на 25 %). Кроме того, имело место уменьшение уровней заменимых аминокислот глицина (на 27 %) и аланина (на 32 %) (табл. 1). В
данной группе животных сохранялось снижение общего аминокислотного пула плазмы
крови, но при этом происходила некоторая нормализация аминокислотного баланса, при
котором соотношение фенилаланин/тирозин было даже ниже контрольного уровня. Как
положительный эффект совместного введения таурина и цинка сульфата на фоне интоксикации парацетамолом, вероятно, следует отметить уменьшение по сравнению со значениями в группе животных, получавших только парацетамол, коэффициента Фишера
(соотношение АРУЦ/ААК), что свидетельствует об улучшении функции печени.
3
BY 11164 C1 2008.10.30
Таблица 1
Концентрации свободных аминокислот и их производных в плазме крови
на фоне введения парацетамола, таурина и сульфата цинка, мкмоль/л
Контроль
Парацетамол
Парацетамол+таурин
Парацетамол+
таурин+
сульфат цинка
Таурин+
сульфат
цинка
Таурин
302,5±13,8
230,5±17,5*
301,8±54,1
265,2±30,3
241,6±37,5
Аспартат
68,9±12,9
89,5±25,3
50,63±5,42‡
36,92±1,58‡
80,7±12,4
Треонин
336,3±25,5
273,9±26,7
328,3±62,1
288,9±30,8
247,0±25,0*
Серин
284,5±13,1
296,8±20,3
344,7±36,8‡
290,3±21,7
224,3±16,1*†
Глутамат
130,21±8,90
93,1±10,1*
155,5±19,8†‡
132,07±7,11†
85,75±5,66*
Глутамин
817,7±35,4
706,2±51,5
680,3±44,2*
732,0±46,7‡
643,8±39,6*
Пролин
382,9±60,4
272,6±27,8
428,9±52,9†‡
350,7±77,0
200,6±19,0
Глицин
238,6±11,0
178,6±16,1*
158,1±12,1*‡
174,4±32,8*
225,98±9,41†
Аланин
255,12±6,54
240,9±19,4
232,7±23,1
173,5±33,2*
219,9±12,7*
α-аминобутират 24,14±3,16
17,03±1,27
55,5±27,6
20,80±4,78
29,40±6,65
Валин
177,75±6,96 158,70±7,33
168,8±30,6
164,85±5,12
153,39±9,91
Метионин
53,12±2,57
41,47±2,12*
39,08±4,35*
40,05±3,86*
44,98±2,60
Изолейцин
82,79±3,34
71,05±4,67
73,8±12,6
72,62±3,89
75,28±5,26
Лейцин
136,20±5,69 117,33±6,68
121,2±24,6
122,77±7,55
118,20±6,95
Тирозин
65,38±2,28
53,87±3,41*
52,85±5,74*
59,30±3,69
55,18±4,22*
Фенилаланин
55,21±4,65
43,37±4,42
50,16±7,15
44,62±6,32
47,07±2,34
Этаноламин
6,873±0,943
9,68±1,60
6,180±0,604
6,232±0,799
10,95±3,48
Орнитин
49,24±5,83
52,9±12,6
68,0±30,3
45,59±4,15
37,89±7,00
Лизин
381,2±14,4
319,5±17,8*
356,4±62,3
293,8±14,3*‡
372,1±18,8
Гистидин
70,09±1,95
69,83±3,96
79,6±13,1
75,98±6,40
56,7±2,93*†
Сумма
3912±119
3327±169*
3746±442
3488±150*
3159±160*
Заменимые/
незаменимые
1,74±0,025
1,77±0,07
1,85±0,163
1,88±0,149
1,56±0,029*†
Разветвленные/
ароматические
3,31±0,063
3,63±0,289
3,48±0,253
3,57±0,274
3,39±0,092
Глутамат/
глутамин
0,16±0,017
0,13±0,011
0,23±0,033†
0,18±0,0064†
0,13±0,0048
Фенилаланин/
тирозин
0,84±0,064
0,82±0,095
0,94±0,042
0,75±0,094
0,87±0,069
Аминокислоты
p < 0,05 по отношению к: * - контролю; † - группе, получавшей парацетамол; ‡ - группе, получавшей только таурин + сульфат цинка.
4
BY 11164 C1 2008.10.30
Для оценки влияния композиций на фонд аминокислот был проведен дискриминантный анализ полученных данных. По значению показателя лямбды Вилкса (0,00399) можно
судить о достаточно хорошей дискриминации, а на основании классификационной матрицы можно сделать вывод о 100 % корректности выборок для всех групп, т.е. реализации
были правильно отнесены к исследуемым группам.
На фигуре показан график проекции пространства показателей на плоскость двух
главных компонент. Из графика видно, что пул изучаемых показателей при введении крысам как таурина, так и парацетамола значительно отличался от такового у контрольных
животных, причем относительно первого главного компонента их эффекты были противоположной направленности. В то же время область пространства показателей, соответствующая группе животных, получавших на фоне введения парацетамола композицию
таурина и сульфата цинка, практически полностью совпала с контрольной группой, что
говорит о значительном нормализирующем эффекте этой композиции на фонд свободных
аминокислот, как интегральный показатель метаболизма, при интоксикации парацетамолом.
Анализируя полученные изменения аминокислотного спектра плазмы крови, а также
степень дисбаланса, выявляемого после курсового введения парацетамола, важными представляются данные, полученные в группе животных, получавших отдельно таурин и
сульфат цинка. Очевидно, что введение данного сочетания препаратов само по себе приводит к обеднению аминокислотного пула плазмы крови. Однако происходит это в основном за счет уменьшения количества заменимых аминокислот (серин, глутамат, глутамин,
аланин) (табл. 1). Данный феномен можно рассматривать как антистрессорное действие,
способствующее усилению энергетических процессов в тканях и увеличению активности
биосинтеза белка.
Наиболее ярко степень воздействия исследуемых соединений на метаболические процессы в тканях организма, в том числе в печени, характеризуют данные корреляционного
анализа между концентрациями свободных аминокислот в плазме крови.
В контрольной группе выявлено 38 высокодостоверных (т.е. на уровне достоверности
p < 0,01) корреляционных связей. Введение парацетамола снизило их число до 7, но только
корреляция Валин-Лейцин была общей с контрольной группой. Дополнительное назначение таурина животным, получавшим парацетамол, характеризовалось 38 высокодостоверными корреляционными связями между определяемыми показателями, из них 7 были
общими с интактными животными (Асп-Глу, Асп-α-аминобутират, Глу-α-аминобутират,
Ала-Фен, Вал-Лей, Вал-Фен, Иле-Лиз). У животных, которые получали совместно с парацетамолом комбинацию, состоящую из таурина и сульфата цинка, число корреляционных
связей сокращалось до 1 (Треонин-α-аминобутират). О степени воздействия на метаболизм комбинации таурина и сульфата цинка свидетельствует наличие в данной группе
животных 7 высокодостоверных корреляционных связей между свободными аминокислотами плазмы крови, из которых 2 были общими с контрольной группой.
Проведенные нами морфологические исследования показали, что в группе животных,
получавших парацетамол + таурин, нарушения строения печени более выражены, чем у
животных, которым вводился один парацетамол. Наблюдались очаги некроза, заполненные клеточным детритом, лимфоцитами и нейтрофилами на фоне баллонной дистрофии
гепатоцитов. Как и при введении парацетамола, гепатоциты, не имеющие признаков патологических изменений, располагались центролобулярно. Присутствовала выраженная гетерогенность размеров ядер гепатоцитов - от 6 до 12 мкм.
В группе животных, получавших парацетамол + таурин + цинка сульфат выраженность патологических изменений в ткани печени гораздо меньше, чем при введении парацетамола, парацетамола и таурина. Наблюдалась умеренная выраженность очагового
кариолизиса и баллонной дистрофии с большей частью сохраненной нормальной паренхимой. В двух случаях наблюдали нормальную картину печени с незначительным расширением синусоидов.
5
BY 11164 C1 2008.10.30
Таблица 2
Уровень активности (в единицах оптической плотности X 1000)
СДГ, ЛДГ, НАД-ДГ в гепатоцитах печени крыс в опытных и контрольной группах
Вид
воздействия
Парацетамол
Таурин+цинк
Парацетамол+таурин
Парацетамол+таурин+
цинк
Контроль
Уровень
активности
СДГ
%к
контрольным
Уровень
активности
ЛДГ
%к
контрольным
Уровень
активности
НАД-ДГ
%к
контрольным
283,80±23,40
423,50±44,30*
96
144
1131,70±41,30*
1146,70±132,50
117
119
1551,70±56,00
1265,00±168,90
99
81
575,00±47,40*
195
1128,30±36,00*
117
1530,00±86,90
98
366,70±19,60*
124
995,00±27,70
103
1515,00±50,90
97
295,00±17,70
964,40±39,80
1561,10±35,50
*- статистически достоверные различия с контрольными показателями.
Активность СДГ выше контрольных значений при введении композиции таурин + цинк
соответственно на 24 % (табл. 2).
Следовательно, использование композиции, состоящей из таурина и цинка сульфата
является наиболее благоприятным в отношении устранения аминокислотного дисбаланса
в крови при токсическом поражении печени, что характеризуют не только индивидуальные показатели аминокислотного спектра плазмы крови, но и данные корреляционного и
дискриминантного анализа. Использование предлагаемой композиции одновременно с парацетамолом фактически препятствует токсическому поражению печени.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
6
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
203 Кб
Теги
by11164, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа