close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11353

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.12.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 1/14
СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ГРИБА ДЕРМАТОФИТА
(21) Номер заявки: a 20060101
(22) 2006.02.08
(43) 2006.10.30
(71) Заявители: Зайцева Виктория Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Людмила Петровна (BY)
(72) Авторы: Зайцева Виктория Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Людмила Петровна
(BY)
BY 11353 C1 2008.12.30
BY (11) 11353
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатели: Зайцева Виктория
Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Людмила Петровна
(BY)
(56) ЖАРКОВ И.И. Контроль качества и
стандартизация биопрепаратов, фармакологических средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и
животноводстве: Сборник научных трудов. - Москва, 1982. - С. 61-68.
ЛЕТЯГИН К.П. и др. Контроль и стандартизация средств специфической
профилактики и диагностики инфекционных болезней животных: Сборник научных трудов. - Москва, 1984. С. 74-79.
RU 2074251 C1, 1997.
(57)
Способ выращивания гриба дерматофита на сусло-агаре с концентрацией углеводов
7-8° по Баллингу при pH 6,6, отличающийся тем, что перед высевом на сусло-агар микроконидии гриба суспендируют в растворе, содержащем натрия хлорид, экстракт дрожжевой, сыворотку крови, воду или гидролизат белков крови при следующем соотношении
ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,1
экстракт дрожжевой
0,3-0,8
сыворотка крови
3,0-6,0
вода или гидролизат белков крови остальное,
а выращивание проводят при температуре 26-28 °C в течение 5-15 суток.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано
при производстве биологических препаратов.
Известен способ выращивания дерматофитов (Trichophyton equinum) на разных агаризованных средах: сусло-агар, агар Чапека, агар Сабуро, агар Плаута, мясопептонный агар
и агар с крахмалом [2, 3, 6].
Дерматофит Trichophyton verrucosum выращивают на сусло-агаре, содержащем акридины в концентрации 10, 50, 100 и 500 мг/дм3 [5], а Trichophyton и Microsporum инкубируют на сусло-агаре, содержащем 1,0; 2,5 и 5,0 г натрия хлорида [4].
Наиболее близким решением к предлагаемому способу является способ выращивания
дерматофитов на сусло-агаре, содержащем сахара 7° по Баллингу, 1, 2, 3, 5, 10 и 20 % сыворотки крови крупного рогатого скота [1].
BY 11353 C1 2008.12.30
Сыворотку добавляют в стерильный, расплавленный и охлажденный до 40-45 °С сусло-агар и после перемешивания разливают в стерильные чашки Петри слоем толщиной
3-4 мм. Грибные культуры засевают уколом в центр чашки Петри. Посевы инкубируют
при 26 °С в течение 15 суток.
Указанный способ не обеспечивает высокого выхода микроконидий и их жизнеспособности.
Задача изобретения - повышение выхода биологической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что посевной материал гриба дерматофита суспендируют в воде, содержащей марганец сульфат или марганец хлорид, натрия хлорид,
магния сульфат и сыворотку крови в определенном соотношении.
Сущность предлагаемого способа выращивания гриба дерматофита на сусло-агаре с
концентрацией углеводов 7-8° по Баллингеру при рН 6,6 заключается в том, что перед высевом на сусло-агар микроконидии гриба суспендируют в растворе, содержащем натрия
хлорид, экстракт дрожжевой, сыворотку крови, воду или гидролизат белков крови при
следующем соотношении ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,1
экстракт дрожжевой
0,3-0,8
сыворотка крови
3,0-6,0
вода или гидролизат белков крови
остальное,
а выращивание проводят при температуре 26-28 °С в течение 5-15 суток.
Пример 1
Культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130 суспендировали до содержания 500-600 млн. микроконидий в 1 см3 растворителя при следующем соотношении ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,1
экстракт дрожжевой
0,8
сыворотка крови
3,0
вода
остальное.
Взвесь микроконидий в растворителе высевали на сусло-агар с концентрацией углеводов по Баллингу 7-8°, рН 6,6, в дозе 2-2,5 млн. спор на 1 см3 среды.
Культуру выращивали при температуре 26-28 °С в течение 5-15 суток.
Титр микроконидий определяли с помощью камеры Горяева.
Жизнеспособность микроконидий определяли по общепринятой методике по количеству колоний, выросших на сусло-агаре в чашках Петри. Для этого готовили разведения
культуры от 10-1 до 10-6 в физиологическом растворе и высевали приготовленные суспензии по 0,5 см3 в чашку Петри.
Учет результатов производили через 7-10 суток. Суммировали число колоний, выросших на всех чашках Петри, находили среднеарифметическое значение и умножали на 2.
Конечный результат соответствовал количеству жизнеспособных микроконидий в 1 см3
суспензии.
С 1 см3 сусло-агара получили 166,8 млн. спор, в том числе 152,4 млн. жизнеспособных.
Пример 2
То же, что в примере 1, но культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130
суспендировали в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,12
экстракт дрожжевой
0,5
сыворотка крови
5,0
вода
остальное.
С 1 см3 сусло-агара получили 172,2 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
91 %.
2
BY 11353 C1 2008.12.30
Пример 3
То же, что в примере 1, но культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130
суспендировали в растворителе при следующем соотношении ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,1
экстракт дрожжевой
0,8
сыворотка крови
6,0
вода
остальное.
С 1 см3 сусло-агара получили 181,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
90,4 %.
Пример 4
То же, что в примере 1, но растворитель готовили на гидролизате белков крови.
С 1 см3 сусло-агара получили 176,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
92,4 %.
Пример 5
То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма № 1183.
С 1 см3 сусло-агара получили 188,6 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
94,1 %.
Пример 6
То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130, суспендированную в растворителе при следующем соотношении
ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,1
экстракт дрожжевой
0,2
сыворотка крови
2,0
вода
остальное.
С 1 см3 сусло-агара получили 82,2 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 64 %.
Пример 7
То же, что в примере 1, но для засева использовали культуру гриба Trichophyton verrucosum штамма ТФ-130, суспендированную в растворителе при следующем соотношении
ингредиентов, мас. %:
натрия хлорид
0,2
экстракт дрожжевой
0,9
сыворотка крови
7,0
вода
остальное.
С 1 см3 сусло-агара получили 102 млн. спор. Жизнеспособность спор составила 68 %.
Пример 8 (прототип)
В среду сусло-агара с содержанием сахара 7° по Баллингу и рН 6,8 вносили 5 % нормальной сыворотки крови крупного рогатого скота. Сыворотку добавляли в стерильный,
расплавленный и охлажденный до 40-45 °С сусло-агар и после перемешивания разливали
в стерильные чашки Петри слоем толщиной 3-4 мм. Грибную культуру Microsporum canis
засевали в центр чашки Петри. Посевы инкубировали при 26 °С в течение 15 суток.
С 1 см3 сусло-агара получили 100,8 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
74 %.
Пример 9 (прототип)
То же, что в примере 8, но для засева использовали культуру Trichophyton verrucosum
штамма № 1183.
С 1 см3 сусло-агара получили 101,4 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
76 %.
Пример 10 (прототип)
То же, что в примере 8, но для засева использовали культуру Trichophyton verrucosum
штамма ТФ-130.
3
BY 11353 C1 2008.12.30
С 1 см3 сусло-агара получили 100,3 млн. спор. Жизнеспособность спор составила
67 %.
Определяли среднее количество клеток в опыте и контроле и рассчитывали индекс
спорообразования.
Результаты экспериментальных исследований представлены в таблице.
Влияние способа выращивания гриба дерматофита на спорообразование
Концентрация
Индекс споромикроконидий,
образования
3
млн/см
1
опыт
181,4
181
Tr. verrucosum ТФ-130
10
контроль
100,3
100
5
опыт
188,6
186
Tr. verrucosum № 1183
9
контроль
101,4
100
Таким образом, предлагаемый способ выращивания гриба дерматофита имеет следующие отличия и преимущества по сравнению с известными:
универсальность (способен стимулировать спорогенез у разных штаммов гриба дерматофита);
технологичность способа, поскольку способен интенсифицировать физиологические
процессы клеток без дополнительных затрат питательных сред и энергоносителей;
безвредность и доступность используемых компонентов;
применение предлагаемого способа позволит дополнительно без изменения технологии изготовления существенно снизить производственные затраты на изготовление вакцины и увеличить выход ее на 181-186 %.
Пример
Наименование штамма
Опыт
или контроль
Источники информации:
1. Жарков И.И. Морфологическая изменчивость Microsporum canis на сывороточном
сусло-агаре // Контроль качества и стандартизация биопрепаратов, фармакологических
средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве: Сб. науч. трудов. - М., 1982. - С. 61-68.
2. Летягин К.П., Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н. Естественная изменчивость Trichophyton equinum // Контроль качества и стандартизация биопрепаратов, фармакологических
средств, кормовых добавок, применяемых в ветеринарии и животноводстве: Сб. науч.
трудов. - М., 1982. - С. 65-68.
3. Летягин К.П, Мохина Т.Н. Влияние температуры на спорогенез дерматофитов //
Контроль и стандартизация средств специфической профилактики и диагностики инфекционных болезней животных: Сб. науч. трудов. - М., 1984. - С. 74-79.
4. Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н., Летягин К.П. Влияние хлористого натрия на рост и
спорообразование дерматофитов // Разработка методов проверки биологических свойств
производственных штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов: Сб. науч.
трудов. - М., 1983. - С. 41-46.
5. Яблочкин Л.М., Мохина Т.Н., Летягин К.П. Изменчивость Trichophyton verrucosum
bodin, 1908 под влиянием акридинов // Разработка методов проверки биологических
свойств производственных штаммов микроорганизмов и диагностических препаратов: Сб.
науч. трудов. - М., 1983. - С. 46-41.
6. RU 2074251 С1 1997.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
87 Кб
Теги
патент, by11353
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа