close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11471

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.12.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 36/185
МЕЛАНИНСОДЕРЖАЩИЙ ФИТОСОРБЕНТ
ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ,
ВЫЗВАННЫХ МИКОТОКСИНАМИ, ПЕСТИЦИДАМИ,
ВИРУСНЫМИ И БАКТЕРИАЛЬНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ
(21) Номер заявки: a 20060837
(22) 2006.08.11
(43) 2008.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физики
имени Б.И.Степанова Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Лапина Виктория Алексеевна (BY); Донцов Александр Евгеньевич (RU); Насонов Игорь Викторович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физики имени Б.И.Степанова Национальной академии наук Беларуси"
(BY)
BY 11471 C1 2008.12.30
BY (11) 11471
(13) C1
(19)
(56) RU 2060818 С1, 1996.
ЖУРБА В.А. и др. Сельское хозяйство проблемы и перспективы: Сб. научн.
тр. Ветеринарные науки. - Гродно,
2004. Т. 3. Ч. 3. - С. 191-194.
ЛАПИНА В.А. и др. Конверсия научных исследований в Беларуси в рамках
деятельности МНТЦ. Материалы международного семинара. - Мн., 1999.
Ч. 2. - С. 38-41.
ЛАПИНА В.А. и др. Ветеринарная медицина Беларуси. - 2004. - № 2. - С. 810.
ПАНКОВЕЦ Е.А. и др. Ветеринарная
медицина Беларуси. - 2004. - № 4. С. 18-20.
Новый перспективный сорбент из отходов растительного сырья. [Найдено на
http://web.archive.org/web/200408171557
55/http://www.ptechnology.ru/MainPart/
CelHozTech/CelHozTech1.html].
БОДЯКОВСКАЯ Е.А. и др. Ветеринарная медицина Беларуси. - 2002. - № 2. С. 31-33.
(57)
Применение меланинсодержащего фитосорбента, полученного кислотным гидролизом
плодовой оболочки семян подсолнечника и представляющего собой высокомолекулярный полимер нерегулярного строения на основе лигнина, целлюлозы и меланина, структурированных
в пористую многоуровневую матрицу с полимодальным распределением пор, для профилактики и лечения заболеваний животных, вызванных микотоксинами, пестицидами, вирусными и бактериальными инфекциями.
Изобретение относится к ветеринарной медицине.
Известно применение различных сорбционных материалов для связывания и выведения из живых организмов экотоксикантов, таких как микотоксины, тяжелые металлы, органические соединения и др. Применяемые в настоящее время сорбенты в зависимости от
BY 11471 C1 2008.12.30
их природы (органические или неорганические) имеют ряд недостатков. Неорганические
(глины, алюмосиликаты (например, препарат Хаметокс), бентониты, вермикулиты и другие) имеют узкий спектр действия, понижают плотность рациона животных и частично
ухудшают деятельность желудочно-кишечного тракта из-за непостоянства химического
состава и неизбежного присутствия вредных примесей, в зависимости от места их происхождения; органические (Био-Мос, Микосорб, Микофикс Плюс), активированные угли
растительного происхождения и другие, как правило, имеют более высокую стоимость и
ограниченный спектр действия.
Известен гемосорбент углеродный КАУ для лечения острых отравлений [1]. Сорбент
приготовлен на основе активированных углей из дробленых фруктовых косточек или
скорлупы орехов и характеризуется высокими гидродинамическими и кинетическими
свойствами, обусловленными большим объемом макропор, что гарантирует поглощение
токсических веществ со средней и высокой молекулярной массой. Гемосорбент КАУ показан в качестве средства экстракорпоральной детоксикации крови организма при острых
отравлениях промышленными и бытовыми ядами, лекарственными препаратами, грибными токсинами, пестицидами и некоторыми другими токсинами.
Недостатком сорбента является низкая сорбционная способность и избирательность,
обусловленная преобладанием в его структуре крупных пор.
Предложен препарат на основе минерального сорбента для профилактики и лечения
желудочно-кишечных заболеваний животных [2]. Препарат содержит высокодисперсный
кремнезем в качестве сорбента - 2,0-5,0 %, формальдегид - 0,5 % и среду для или после
культивирования клеток млекопитающего - остальное. Препарат готовят смешиванием
компонентов в коллоидной мельнице до получения однородной массы. Курс лечения составляет 2-5 дней. Препарат вводят в количестве 3 мл на 1 кг живой массы животным в
виде однократной выпойки ежедневно. Недостатком препарата является слабая эффективность лечения из-за низкой сорбционной емкости сорбента - высокодисперсного кремнезема.
Известен иммунопробиотический препарат для птицеводства [3]. Препарат содержит
пробиотик в виде бактериальной массы лиофильно высушенных живых клеток бифидобактерий и непатогенных стрептококков с антагонистической активностью по отношению
к энтеропатогенным микроорганизмам кишечника птицы, сухую смесь интерферонов
альфа 2 и гамма, а в качестве сорбента сухую гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сухая бактериальная масса
4-5
сухая смесь интерферонов альфа 2 и гамма
0,2-0,4
сухая гидроокись алюминия
до 100,0.
В одном грамме препарата содержится 1000 доз. Для профилактики рекомендовано
включать препарат в состав корма в течение 2-х лет в количестве 0,5-3,0 дозы на 1 кг массы птицы через день. С лечебной целью препарат применяют в удвоенной дозе 2 раза в
сутки до исчезновения признаков заболевания. При необходимости через 2 недели курс
лечения повторяют. Недостатком препарата является использование в качестве сорбента
минерального компонента гидроокиси алюминия, что снижает плотность рациона, а также
ведет к отравлению алюминием вследствие его накопления в организме птиц при длительном применении. Далее, гидроокись алюминия имеет относительно небольшую адсорбционную способность, что снижет эффективность действия препарата в целом.
Известны сорбенты из растительного сырья, получаемые из плодовой оболочки вызревших семян подсолнечника, обработанной растворителем из ряда: экстракционный
бензин, петролейный эфир, нефрас [4], либо подвергнутой кислотному гидролизу [5]. Такие сорбенты используют в качестве средств очистки растворов, пищевых продуктов, выведения тяжелых металлов.
2
BY 11471 C1 2008.12.30
Для лечебных целей представляет интерес меланинсодержащий фитосорбент (МНФсорбент) из плодовой оболочки вызревших семян подсолнечника, получаемый кислотным
гидролизом с выделением высокомолекулярного полимера нерегулярного строения, содержащий лигнин, целлюлозу и меланин в виде порошка темно-коричневого или черного
цвета (в зависимости от типа исходного сырья), без вкуса, со слабым специфическим запахом [6, 7].
Меланинсодержащий фитосорбент [7] характеризуется наличием высокой концентрации парамагнитных центров (1,2 ± 0,7)·1018 спин/г сухого веса, не растворим в воде, кислотах, органических растворителях и частично растворяется в щелочах с разрушением
структуры. Элементный состав включает углерод, водород, азот, кислород и серу при следующем соотношении компонентов, мас. %:
углерод
54,62-55,63
водород
5,26-5,36
азот
0,82-1,48
кислород
37,23-39,0
сера, не более
0,3.
Сорбционная емкость МНФ-сорбента по железу при pH 3,0 составляет 0,47 ± 0,07 meq/г
сухого веса. МНФ-сорбент эффективен при очистке водопроводной воды от ионов
Са(2 + ). Так, при исходном содержании в воде ионов кальция (21 ± 4)·10-4 м, после прохождения ее через колонку с МНФ-сорбентом их концентрация, измеренная с помощью
арсеназо 3, составляет (0,8 ± 0,1)·10-4 м. МНФ-сорбент хорошо поглощает ряд тяжелых
металлов и радионуклидов и эффективно работает в области pH 2-8,5, а связанная им
нефть удерживается на поверхности воды без дополнительного использования поверхностно-активных веществ в течение длительного времени. МНФ-сорбент характеризуется
высокой сорбционной емкостью и низкой зольностью.
МНФ-сорбент может применяться в пищевой промышленности, в экологии для очистки сред от загрязнений, в частности для удаления радионуклидов из растворов, очистки от
нефтепродуктов, в сельском хозяйстве для удаления тяжелых металлов из организма животного.
Целью настоящего изобретения является применение известного вещества (средства
очистки) меланинсодержащего фитосорбента для профилактики и лечения таких заболеваний животных, как токсикозы, свободно-радикальные патологии, диарейные синдромы,
вызванные экотоксикантами, вирусными и бактериальными инфекциями.
Техническим результатом изобретения является расширение ассортимента фармацевтических препаратов для профилактики и лечения животных, что достигается благодаря
связыванию в организме различных экотоксикантов, вирусов, патогенных бактерий и токсических продуктов их жизнедеятельности, что приводит к снятию общей интоксикации и
генерализации негативных процессов различной этиологии за счет использования целебных свойств МНФ-сорбента.
Изобретение основано на применении меланинсодержащего фитосорбента, полученного кислотным гидролизом плодовой оболочки семян подсолнечника и представляющего
собой высокомолекулярный полимер нерегулярного строения на основе лигнина, целлюлозы меланина, структурированных в пористую многоуровневую матрицу с полимодальным распределением пор, для профилактики и лечения заболеваний животных, вызванных
микотоксинами, пестицидами, вирусными и бактериальными инфекциями.
Для профилактики экотоксикозов и отравлений недоброкачественным кормом препарат задают вместе с кормом в количестве (0,15-2,0) % от массы корма в зависимости от
степени зараженности корма, а для лечения при заражениях бактериями Salmonella enteridis, Escherichia coli, вирусами болезни Ньюкасла, инфекционного бронхита и инфекционного ларинготрахеита препарат вводят в желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) вместе с
3
BY 11471 C1 2008.12.30
кормом в количестве (0,2-1,5) г/кг массы тела (1-2) раза в сутки в течение (5-14) суток до
исчезновения клинических признаков заболевания.
Антимикробные действия МНФ-сорбента возможно усилить введением серебра сорбцией из раствора нитрата серебра с концентрацией Ag+ в интервале (9,7·10-4 - 0,97) г/л или
пробиотических бактерий в количестве не менее 109КОЕ/1 г сорбента. В качестве пробиотических бактерий используют бактерии рода Bacillus Subtilius или Lactobacillus, или Bifidobacterium.
Сущность изобретения состоит в следующем.
Исследованиями установлено, что известный МНФ-сорбент, получаемый из плодовой
оболочки вызревших семян подсолнечника, с элементным составом, мас. %:
углерод
54,62-55,63
водород
5,26-5,36
азот
0,82-1,48
кислород
37,23-39,0
сера, не более
0,3.
содержит химические компоненты - лигнин, целлюлозу и меланин, которые образуют гетерополимер, структурированный в пористую многоуровневую матрицу с высокими адсорбционно-структурными свойствами, а также широкую гамму биологически активных
углеродсодержащих веществ: биофлавоноиды в количестве (142,6-615,5) мг/ %, полисахариды (глюкозу, фруктозу, сахарозу) - (0,195-0,444) %, пектины - (0,499-1,912) %, лейкоантоцианы - (0,1-2,76) %, катехины - (0,2-146,6) мг/ %, фенолкарбоновые кислоты - (212,5697,9) мг/ % и дубильные вещества - (0,58-0,83) %.
Медико-биологическое действие обусловлено наличием в МНФ-сорбенте оптимально
сбалансированных и биологически активных углеродсодержащих веществ и биологически
активного природного полимера защитного действия - меланина, что придает ему высоко
выраженные антиоксидантные, антибактериальные и антивирусные свойства. Его же
сорбционная активность по отношению к экотоксикантам и микроорганизмам определяется химической природой, размерами и характером пор, сформированных основными
компонентами - лигнином, целлюлозой и меланином.
Важной особенностью химической природы внутренней поверхности МНФ-сорбента
как лечебного средства является наличие ионообменных групп кислотного характера
(гидроксильных, карбоксильных и карбонильных), благодаря которым он обладает слабыми катионообменными свойствами, что позволяет использовать матрицу фитосорбента
для введения различных микроэлементов. Так, исследованиями in vitro установлено, что
наличие в структуре сорбента ионов серебра Ag+ существенно повышает его антимикробную активность. МНФ-сорбент способен также адсорбировать целые микробные клетки,
что позволяет вводить в него активные пробиотики, в частности микробные клетки родов
Lactobacillus, Bifidobacterium, Bacillus и некоторые другие, которые выгодно заселяют организм хозяина, улучшая его пищеварение, и способствуют подавлению болезнетворных
бактерий в организме животных.
Для достижения оптимального лечебного эффекта при применении МНФ-сорбента в
качестве лекарственного препарата определяющее значение имеет структура сорбента с
определенным полимодальным распределением пор (микро-, мезо-, макро-), наличием на
поверхности химически активных центров и биологически активных ингредиентов, что
обеспечивает высокие селективные свойства и способность к сорбции молекул различных
размеров, геометрии и химической природы, в т.ч. опасных химических веществ - пестицидов, микотоксинов, сложных углеводородов, а также вирусов и патогенных бактерий.
Установлено, что в качестве препарата для лечения и профилактики токсикозов различной этиологии у животных необходимо использовать МНФ-сорбент, содержащий в
своем составе лигнин, целлюлозу и меланин, структурированные в пористую многоуровневую матрицу, при следующем соотношении компонентов, мас. %:
4
BY 11471 C1 2008.12.30
лигнин
39,9-58,8
целлюлоза
40,6-50,9
меланин
1,0-8,0
биологически активные углеродсодержащие вещества до 100 %:
биофлавоноиды, мг/ %
142,6-615,5
полисахариды (глюкозу, фруктозу, сахарозу)
0,195-0,444
пектины
0,499-1,912
лейкоантоцианы
0,1-2,76
катехины, мг/ %
0,2-146,6
фенолкарбоновые кислоты, мг/ %
212,5-697,9
дубильные вещества
0,58-0,83.
МНФ-сорбент с пробиотическими бактериями в количестве не менее 109КОЕ/1 г сорбента (сорбент-пробиотический комплекс (СПК)) оказывает усиленное защитное действие
за счет предотвращения колонизации и вытеснения патогенной микрофлоры из желудочно-кишечного тракта, а присутствие в пористой матрице сорбента серебра обеспечивает
более широкий спектр антибактериального действия. Применение такого препарата позволяет купировать негативное действие экотоксикантов, предупредить (или быстро снять
общую интоксикацию) генерализацию негативных процессов в организме и способствует
нормальному развитию и сохранению продуктивности животных.
Сущность изобретения поясняется графиками на фиг. 1-11.
На фиг. 1 представлена динамика остаточных количеств линдана в печени цыплят.
На фиг. 2 - динамика остаточных количеств линдана в мышцах цыплят.
На фиг. 3, 4 - хроматограммы сорбции пестицидов.
На фиг. 5 - тушение хемилюминесценции люминола МНФ-сорбентом.
На фиг. 6 - активность α-амилазы в слизистой оболочке тощей кишки.
На фиг. 7 - содержание малонового диальдегида в сыворотке крови цыплят.
На фиг. 8 - содержание гидроперекисей в сыворотке крови цыплят.
На фиг. 9 - кислотное число жира цыплят через 30 дней после начала опыта.
На фиг. 10 - содержание МДА в мозге цыплят через 30 дней после начала опыта.
На фиг. 11 - фото морфологии поверхности сорбента с микробной биомассой пробиотических бактерий (увеличение в 1000 раз).
Исследованиями in vitro и in vivo определены оптимальные биологически активные дозы и разработаны схемы введения МНФ-сорбента в качестве фармацевтического препарата.
Ниже приведены примеры реализации изобретения.
Пример 1.
Эффективность сорбции микотоксинов в условиях in vitro.
В табл. 1 проиллюстрирована эффективность связывания различных микотоксинов
МНФ-сорбентом в сравнении с известным в ветеринарной практике препаратом "Микосорб" (адсорбция, % микотоксинов).
Таблица 1
Микотоксины
Вид сорбента
Афлотоксин В1 Зеараленон
Охратоксин А
Т-2 токсин
МН-сорбент
(*)100
(*)99,67 ± 0,3 (**)77,87 ± 12,3 (*)93,6 ± 6,4
МН-сорбент + Ag
(*)100
(*)100
64,73
(*)95,45 ± 4,6
"Микосорб"
(*)80,57±8,9
(*)76,56±18,2 (***)77,31 ± 1,8 (*)85,95 ± 14,1
Примечание: (*) время сорбции - 15 мин; (**) время сорбции - 30 мин; (***) время
сорбции - 60 мин в условиях конкурентного связывания.
Как видно из табл. 1, сорбционная активность МНФ-сорбента выше по сравнению с
широко применяемым сорбентом микотоксинов "Микосорб".
Пример 2.
Антибактериальная активность МНФ-сорбента в условиях in vitro.
5
BY 11471 C1 2008.12.30
Таблица 2
Staph.aureus
Е. coli штамм
Past. Multocida
Вид сорбента Экспозиция
штамм "Covan I"
"А-М"
штамм КМИЭВ-26
30 мин
99,8
21,5
9,9
МН-сорбент
24 ч
100,0
95,8
41,0
30 мин
100,0
91,9
50,2
МН-сорбент с
24 ч
100,0
100,0
100,0
ионами серебра
24 ч
32,8
Как видно из табл. 2, МНФ-сорбент с ионами серебра уже в первые 30 мин экспозиции
эффективно подавляет рост колоний бактериальных культур микроорганизмов
Staph.aureus штамм "Covan I", E. coli штамм "А-М" и Past. Multocida штамм КМИЭВ-26.
Такой эффект обусловлен совместным комплексообразующим, биохимическим и каталитическим действием обогащенной биологически активной формы сорбента, содержащей
серебро, на бактериальные ферменты, белки и мембранные структуры энтеропатогенных
микробов.
По степени увеличения чувствительности к действию МНФ-сорбента исследованные
микроорганизмы располагаются в следующем порядке: Pasteurella multocida, Escherichia
coli, Staphylococcus aureus. При этом установлено, что грамположительная микрофлора
более чувствительна к действию сорбента, нежели грамотрицательная.
Ниже приведена сравнительная сорбционная емкость МНФ-сорбента по отношению к
микробным клеткам в сравнении с применяемыми в ветеринарной практике аналогами.
Таблица 3
Адсорбировано метиленового голу- Перерасчет на микробные
Сорбенты
бого, г на 1 г сорбента
клетки, млн/г
МНФ-сорбент
0,0226
226
МНФ-сорбент + Ag
0,0220
220
"Микосорб"
0,0066
66
"Лигнасорб"
0,0103
103
Из табл. 3 видно, что сорбционная емкость МНФ-сорбента к микробным клеткам в
3,3-3,4 раза превышает сорбционную емкость "Микосорба" и в 2,1-2,2 раза - "Лигнасорба".
Пример 3.
Антивирусная активность МНФ-сорбента в условиях in vitro.
Активность МНФ-сорбента в отношении широко распространенных вирусов болезней
птиц, вируса Ньюкаслской болезни (НБ), инфекционной бурсальной болезни (ИББ) - болезнь Гамборо и инфекционного бронхита кур (ИБК), установленная экспериментально,
приведена в табл. 4, 5, 6.
Защитное действие МНФ-сорбента выявлялось на различных линиях перевиваемых
культур клеток: FL (амнион человека), СПЭВ (почка эмбриона свиньи), МДВК (почка быка), FRHK-4 (почка эмбриона зеленой мартышки); и первично-трипсинизированных: ФЭК
(фибробласты эмбриона кур).
В качестве инфекционного материала использовали живые сухие вакцины против
Ньюкаслской болезни птиц (штамм Ла Сота), инфекционного бронхита кур (штамм Н120) и болезни Гамборо (штамм КМИЭВ-13), которые растворяли в физиологическом растворе. Инфекционную дозу вируса определяли титрованием культуральной жидкости вышеуказанных культур клеток.
В табл. 4 - исследование влияния концентрации МНФ-сорбента на титры вирусов ИББ
и ИБК в культурах клеток FL и СПЭВ.
6
BY 11471 C1 2008.12.30
Таблица 4
Снижение титра вируса ИББ в
Снижение титра вируса ИБК в опыте
опыте по сравнению с контропо сравнению с контролем, lg ТЦД50
лем, lg ТЦД50
FL
СПЭВ
FL
СПЭВ
0,325
0,75
0,5
1,0
0,75
0,650
1,5
1,25
1,5
1,25
1,25
2,5
2,0
2,5
1,5
2,5
2,75
2,25
3,25
2,75
5,0
3,25
3,0
3,75
3,25
10,0
3,0
2,5
3,25
2,25
20,0
2,75
2,5
2,0
1,75
Как видно из табл. 4, МНФ-сорбент эффективно предохраняет культуру клеток FL и
СПЭВ от развития ИББ и ИБК. Под его действием снижается титр вируса в опыте по
сравнению с контролем на 0,5-3,75 lg ТЦД50/мл.
В табл. 5 представлено подавление инфекционной активности вирусов ИБК и ИББ
МНФ-сорбентом в зависимости от сроков его внесения на монослой клеток СПЭВ. Как
видно из табл. 5, обработка вирусной суспензии МНФ-сорбентом приводит к подавлению
инфекционной активности вируса ИБК и зависит от продолжительности времени обработки.
Таблица 5
Концентрация
Снижение титра вируса
Сроки внесения МНФТитр вируса,
МНФ-сорбента,
в опыте по сравнению с
сорбента
lg ТЦЦ50/мл
мг/мл
контролем, lg ТЦД50/мл
За 1 час до инфицирования
5,0
0 ± 0,23
4,5
клеток вирусом ИБК
За 1 час до инфицирования
5,0
0 ± 0,12
3,75
клеток вирусом ИББ
Через 1 час после инфицирования клеток вирусом
5,0
3,0 ± 0,52
1,5
ИБК
Через 1 час после инфицирования клеток вирусом
5,0
2,5 ± 0,41
1,25
ИББ
Контроль вируса ИБК (титр,
4,5 ± 0,65
lg ТЦД 50/мл)
Контроль вируса ИББ (титр,
3,75 ± 0,37
lg ТЦД50/мл)
Так, внесение на монослой клеток смеси сорбента с вирусной суспензией после 30 или
60-минутной экспозиции приводит к полному подавлению инфекционной активности вируса ИБК, что выражается в отсутствии ЦПД (цитопатогенное действие) в опыте по сравнению с контролем, где наблюдается 100 %-ная дегенерация монослоя клеток.
В табл. 6 приведены данные по влиянию МНФ-сорбента на титр вируса Ньюкаслской
болезни птиц.
Таблица 6
Концентрация МНФ0
0,325
0,65
1,25
2,5
сорбента, мг/мл
Титр вируса НБ в РГА, log2
8,0
4,0
2,0
0
0
Титр вируса НБ без добавления МНФ-сорбента составляет 8,0 log2. При добавлении
фитосорбента в концентрации 1,25 и 2,5 мг/мл вируссодержащего материала вирус в РГА
Концентрация
МНФ-сорбента,
мг/мл
7
BY 11471 C1 2008.12.30
не выявлялся. В концентрациях 0,325 и 0,65 мг/мл наличие вируса отмечается, но в более
низких титрах, чем в контроле.
Таким образом, in vitro установлено высокое защитное действие МНФ-сорбента на
культуры клеток FL и СПЭВ, инфицированных вирусами инфекционной бурсальной болезни птиц (болезнь Гамборо) и инфекционного бронхита кур, проявляющееся в снижении титра вирусов на 3,25-3,0 lg ТЦД50/мл при инфекционной бурсальной болезни птиц и
на 3,75-3,25 lg ТЦД50/мл при инфекционном бронхите кур по сравнению с контролем.
Пример 4.
Антиоксидантная активность МНФ-сорбента в условиях in vitro.
Антиоксидантная активность (АОА) фитосорбента (суспензия в фосфатном буфере)
исследовалась методом тушения люминесценции люминола. Реакционная среда (общий
объем 3 мл) содержала 50 мМ К-фосфатный буфер, pH 7,4, 100 µM ЭДТА, 2 µМ гемоглобин человека, 90 µМ люминол и различные концентрации фитосорбента. В контрольных
экспериментах вместо фитосорбента использовали 0,1 М К-фосфатный буфер. Хемилюминесценцию начинали добавлением 130 µ.М перекиси водорода в реакционную среду.
На фиг. 5 показана типичная картина тушения хемилюминесценции люминола фитосорбентом (степень тушения люминола при добавлении гомогенной суспензии сорбента в
фосфатном буфере в концентрациях 170, 250, 410, 810 мкг/мл (кривые 2-6 соответственно,
1 - контроль)). Видно, что МНФ-сорбент проявляет АОА, эффективность которой зависит
от концентрации сорбента.
Расчет АОА МНФ-сорбента относительно известного антиоксиданта аскорбата дал
следующий результат: антиоксидантная активность сорбента составила 0,04 ± 0,01 ммоль
аскорбата/грамм сухого веса МНФ-сорбента.
Пример 5.
Сорбционная активность МНФ-сорбента в отношении пестицидов в условиях in vitro.
Эффективность связывания различных пестицидов МНФ-сорбентом в условиях in vitro иллюстрируется на фиг. 3, 4. На фиг. 3 представлены хроматограммы 2, 4-ДБЭ. (а) - до,
(б) - после адсорбции сорбентом при pH≈7, объем экстракта 2 мл, доза пестицидов
10 мкг/г сорбента. График (б) имеет масштаб 1:16. Пик при времени удерживания: 12,88
мин - 2, 4-ДБЭ. На фиг. 4 приведены хроматограммы смеси пестицидов CLP-206 до (а) и
после адсорбции (б) на сорбенте при pH≈7, объем экстракта 2 мл, доза пестицидов
10 мкг/г сорбента. Масштаб графика (б) - 1:10. Пики при временах удерживания: 1-3 мин примеси в экстрагенте (гексане); 5-7 мин - продукты разложения пестицидов; 11,44 мин γ-гексахлорциклогексан (γ-ГХЦГ, линдан); 12,28 - гептахлор; 13,29 - альдрин; 17,88 - диэльдрин, 18,59 - эндрин; 20,05 - ДДД (продукт разложения ДДТ); 20,67 - ДДТ.
Таким образом МНФ-сорбент эффективно поглощает экологически особо опасные
пестициды.
Пример 6.
Профилактика микотоксикозов.
Испытания проводили на цыплятах-бройлерах по схеме: три группы цыплят по 25 голов в каждой размещали в одном виварии в одинаковых условиях микроклимата. Исследования проводили в течение 30 дней до достижения птицей 45-дневного возраста.
Цыплята 1-й группы получали гроуэрный рацион бройлеров с содержанием микотоксинов
Т-2 в количестве 100 мкг/кг массы корма и охратоксин А в количестве 62 мкг/кг массы
корма. Цыплята 2-й группы получали аналогичный рацион, при этом в корм дополнительно вводили МНФ-сорбент в количестве 1 % к массе корма. Цыплята 3-й группы получали
гроуэрный рацион в чистом виде без микотоксинов и МНФ-сорбента. Перекисное число
жира всех кормов соответствовало норме и не превышало 0,1 % йода. В процессе испытаний контролировали каждые 15 дней массу цыплят, каждый день проверялись клинические отклонения, в эти же сроки делался забор крови из подкрыльцовой вены для
определения гематологических и биохимических показателей. По окончании испытаний
8
BY 11471 C1 2008.12.30
птица была убита и проведено патологоанатомическое вскрытие с отбором образцов печени и почек для токсикологических исследований. Также отбирали сердце, печень, селезенку, Фабрициеву сумку, железистый желудок для определения их массы и
гистологических исследований. В табл. 7 приведены токсико-биологические показатели
печени и почек исследованных птиц.
Таблица 7
Показатели
Относительная
Группа живот- Кол-во проб,
Кол-во
биологическая
ных
шт.
инфузорий в 1,0
Токсичность
ценность, %,
см3×104, M ± m
M±m
Печень
Первая
3
309,6 ± 2,25
69,9 ± 1,02
выражена
Вторая
3
438,1 ± 4,35
98,9 ± 0,15
нет
Третья
3
443,0 ± 3,46
100,0 ± 0,21
нет
Почки
Первая
3
327,4 ± 3,24
70,1 ± 0,24
выражена
Вторая
3
416,1 ± 2,56
89,1 ± 0,35
слабо выражена
Третья
3
467,0 ± 2,26
100,0 ± 0,43
нет
Как следует из табл. 7, токсичность проб печени и почек 1-й группы хорошо выражена
и соответственно наблюдается низкая относительная биологическая ценность продуктов
(69,9 % и 70,1 % соответственно). В пробах продуктов 2-й группы птиц, которые получали
МНФ-сорбент, этот показатель выше (98,9 % и 89,1 % соответственно) и приближается к
3-й контрольной группе, а токсичность отсутствует или слабо выражена. Динамика изменения массы показывает, что во 2-й группе цыплят, которые получали МНФ-сорбент,
среднесуточный привес был выше на 11,2 %, чем в контрольной 3-й группе.
Аналогично определяли профилактическую эффективность МНФ-сорбента при микотоксикозе, вызванном зеараленоном. Исследования проводили на молодняке свиней начального периода доращивания.
Были сформированы три группы здоровых поросят 1,5-месячного возраста по 5 голов
в каждой. Предварительно у 3-х животных из каждой группы была проведена операция по
наложению фистулы на тощую кишку с целью анализа кишечного содержимого в процессе пищеварения при микотоксикозе.
Поросятам 1-й группы в течение 3-х недель скармливали корм, пораженный микотоксином зеараленон, в концентрации 0,38-0,40 мг/кг корма с перекисным числом жира, равным 0,1-0,25 % йода. Определение токсичности корма проводили еженедельно.
Животным 2-й группы скармливали корм, пораженный зеараленоном, с добавлением
МНФ-сорбента в количестве 1,5 г на 1 кг корма. Поросята 3-й группы служили контролем,
им скармливали доброкачественный корм.
В процессе испытаний проводили полное клиническое исследование животных, в начале опыта и на 7, 14 и 21 сутки (окончание эксперимента) брали пробы крови для гематологических и биохимических исследований. Взятие крови производили из орбитального
венозного синуса. В начале и на 21 сутки проводили контрольное взвешивание поросят
для определения среднесуточного прироста.
Параллельно проводили исследования тонкокишечного пищеварения, для чего содержимое тонкой кишки брали через фистулу при помощи зонда. О характере кишечного
пищеварения судили по активности альфа-амилазы. При этом альфа-амилазу определяли в
жидкой части кишечного содержимого, в биоптате на поверхности слизистой оболочки, в
трех десорбируемых фракциях и в ткани слизистой оболочки.
9
BY 11471 C1 2008.12.30
На 21 сутки проводили диагностический убой поросят с целью морфологического и
гистологического исследования органов и тканей, ветеринарно-санитарной экспертизы
мяса и внутренних органов.
Установлено, что потребление животными 1-й группы недоброкачественного корма с
повышенным содержанием зеараленона (0,38-0,40 мг/кг корма) вызывало патологический
процесс, характеризовавшийся развитием острого воспаления и воспалительно-дистрофическим поражением печени. В дальнейшем процесс принимал хроническое течение и
появлялись признаки развивающейся почечной недостаточности. Добавление в корм сорбента в количестве 1,5 г/кг корма (животные 2-й группы) оказывало выраженный защитный эффект, который проявлялся:
в снижении интенсивности показателей, характеризующих патологический процесс,
при этом перехода заболевания в хроническую форму и симптомов почечной недостаточности обнаружено не было;
наблюдалось заметно меньшее угнетение процессов тонкокишечного пищеварения, с
последующим его восстановлением;
в улучшении биологической ценности мясных продуктов: зеараленон при поступлении внутрь с кормом значительно нарушал функциональное состояние печени и почек,
что сказывалось на относительной биологической ценности этих органов. При добавлении
в корм, содержащий микотоксины, МНФ-сорбента их биологическая ценность снижалась
незначительно в сравнении со здоровыми животными.
Таким образом, установлено что процессы пищеварения в тонком отделе кишечника,
оцененные по активности α-амилазы, снижены, при этом применение МНФ-сорбента способствует предотвращению угнетения процессов пищеварения, что проиллюстрировано
на фиг. 6. Функциональное состояние печени и почек также значительно нарушается, но
применение МНФ-сорбента способствует сохранению их биологической ценности в сравнении с больными животными.
Пример 7.
Лечение диарейного синдрома у птиц.
Для определения эффективности лечения было сформировано 3 группы цыплят 10дневного возраста: 2 опытные и 1 контрольная группы по 10 голов в каждой. Цыплята
всех групп перед началом исследований были взвешены. В течение 5 дней цыплятам 1-й
опытной группы задавали комбикорм с добавлением 1 % МНФ-сорбент-пробиотического
комплекса (СПК) от массы корма; цыплятам 2-й группы задавали корм с добавлением
10 мл (0,02 г) базового пробиотика-аналога, "препарат бациллярный субтилис БПС-44";
цыплята 3-й группы (контрольная) получали комбикорм без добавок препаратов. Затем
цыплят всех групп взвесили и заразили перорально взвесью бактерий Escherichia coli (патогенный птичий штамм СМ) по 1,2 мл в концентрации 250 млн. КОЕ/мл (1 заражающая
доза - 300 млн. КОЕ). Наблюдение проводили за зараженными цыплятами и дальнейшее
применение препаратов по вышеприведенной схеме вели еще 5 дней. Динамика привесов
цыплят на разных этапах хода исследований отражена в табл. 8.
Таблица 8
Через 5 дней (заражение)
Через 10 дней
% привеса от
Группа
Масса, г (фон)
% привеса от
Масса, г
Масса, г
фона/от зарафона
жения
1. СПК
151,9
46,1
239,8
130,6/57,9
104,0
2. БПС-44
148,4
42,7
236,9
127,8/59,6
3. (контроль)
132,5
27,4
216,4
108,1/63,3
За весь период наблюдения цыплята в двух первых группах не заболели, были клинически здоровы, активно потребляли корм и воду. В контрольной группе цыплят отмечены
угнетение, потеря аппетита, снижение потребления воды, в 2 случаях понос, на 4-й день
10
BY 11471 C1 2008.12.30
пал один цыпленок. Как видно из табл. 8, МНФ-сорбент-пробиотический комплекс (СПК)
оказывает эффективное ростостимулирующее действие, превосходящее по действию базовый препарат БПС-44. По сравнению с базовым препаратом применение нового комплекса СПК в профилактический и лечебный период увеличило привесы цыплят на 2,8 3,4 %. На фиг. 11 представлена поверхность сорбента с микробной биомассой пробиотических бактерий (увеличение в 1000 раз), которая наглядно поясняет сущность высокой
эффективности препарата СПК.
Пример 8.
Изучение лечебно-профилактической эффективности МНФ-сорбент-пробиотического
комплекса при диарейных синдромах у поросят.
Для изучения лечебно-профилактической эффективности МНФ-сорбент-пробиотического (СПК) комплекса при диарейных синдромах у поросят были сформированы группы
поросят 1,5-месячного возраста по 7 голов в каждой. Диарейные синдромы были вызваны
посредством заражения всех экспериментальных поросят культурой Sal. Cholerae Suis в
дозе 2-109 КОЕ на 1 кг массы животного. Данная культура была выбрана для заражения
животных, так как сальмонеллез является одной из самых опасных токсикоинфекций,
приводящих к вспышкам пищевых инфекций у людей, одним из клинических признаков
которого являются диарейные синдромы животных.
После появления и развития симптомов сальмонеллеза поросятам 1-й группы внутримышечно вводили антибиотик кобактан в дозе 0,5 мл на 10 кг массы поросенка и антитоксическую сыворотку в дозе 30 мл на животное. Поросятам 2-й группы в качестве лечения
внутримышечно вводили антибиотик кобактан в дозе 0,5 мл на 10 кг массы поросенка и
внутрь задавали МНФ-сорбент в дозе 1 г/кг массы животного. Животным 3-й группы
внутримышечно вводили антибиотик кобактан в дозе 0,5 мл на 10 кг массы поросенка и
внутрь задавали СПК в дозе 1 г/кг массы животного. Поросятам 4-й группы внутрь задавали МНФ-сорбент в дозе 1 г/кг массы животного. Животным 5-й группы - антибиотик
кобактан в дозе 0,5 мл на 10 кг массы поросенка. Поросятам 6-й группы внутрь задавали
СПК в дозе 1 г/кг массы животного.
Препараты животным вводили один раз в сутки в течение 5 дней. Животным 7-й группы никакого лечения не оказывалось, они служили контролем. За 5 дней до заражения поросятам 6-й группы внутрь задавали СПК один раз в сутки в дозе 1 г/кг живой массы.
В течение всего эксперимента проводили полное клиническое исследование животных, а также в начале, на 4 и 10 сутки (окончание эксперимента) брали пробы крови для
гематологических и биохимических исследований. На 10 сутки опыта провели диагностический убой экспериментальных поросят с целью морфологического, гистологического,
бактериологического исследования органов и тканей, ветеринарно-санитарной экспертизы
мяса и внутренних органов.
Было установлено, что:
лечение молодняка свиней с применением кобактана и антитоксической сыворотки
(1), кобактана и МНФ-сорбента (2), кобактана и СПК (3) при лечении поросят, больных
сальмонеллезом, способствуют быстрому, на 5 сутки, исчезновению клинических симптомов заболевания, ликвидации инфекционно-воспалительного процесса, состояния токсикоза и восстановлению функции печени;
у поросят, которым применяли с профилактической целью СПК, на протяжении всего
эксперимента (группа 6) достоверных изменений, указывающих на развитие инфекционно-воспалительных процессов, не отмечалось;
ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и органов туш экспериментальных животных
показала, что:
применение препаратов, использованных в эксперименте, не оказывает влияния на
химический состав мышечной ткани убойных животных;
11
BY 11471 C1 2008.12.30
физико-химические показатели мяса поросят всех групп достоверных различий не
имели и находились в пределах нормы. Однако pH мяса животных 6-й группы был несколько ниже, что способствует лучшему созреванию и хранению мяса;
показатели биологической ценности мяса животных подопытных и контрольной групп
достоверных различий не имели. Проявлений токсичности не было установлено ни в одной из исследуемых проб;
значительные сдвиги были обнаружены при определении биологической ценности и
безвредности паренхиматозных органов животных, печени и почек. Наблюдалось некоторое снижение биологической ценности продукта в группах 4 и 5. В пробах данных групп
также была выявлена слабо выраженная токсичность, которая проявлялась снижением
степени размножения инфузорий на 10 %, изменением их формы и наличием погибших
инфузорий.
В пробах 1-й, 2-й, 3-й и 6-й групп изменений вышеуказанных показателей не наблюдалось. В табл. 9 представлены токсико-биологические показатели печени, а в табл. 10 токсико-биологические показатели почек.
Таблица 9
Показатели
Группа
Количество инфузорий в Относительная биологичеживотных
Токсичность
ская ценность, %, M ± m
1,0 см3×104, M ± m
1
458,1 ± 2,15
98,0 ± 1,25
нет
2
438,1 ± 4,35
98,9 ± 0,15
нет
3
443,0 ± 3,46
100,0 ± 0,21
нет
4
309,6 ± 2,25
89,9 ± 1,02
слабо выражена
5
312,6 ± 4,45
86,2 ± 2,42
слабо выражена
6
453,0 ± 4,12
100,0 ± 0,51
нет
Таблица 10
Группа
животных
Количество инфузорий
в 1,0 см3×104, M ± m
477,0 ± 2,45
464,0 ± 3,42
467,0 ± 2,26
416,1 ± 21,56
427,4 ± 3,24
458,0 ± 4,16
Показатели
Относительная биологическая ценность, %, M ± m
100,0 ± 0,74
99,0 ± 0,43
100,0 ± 0,43
89,1 ± 0,35
87,1 ± 0,24
99,5 ± 1,53
Токсичность
1
нет
2
нет
3
нет
4
слабо выражена
5
слабо выражена
6
нет
Пример 9.
Лечебно-профилактическое действие МНФ-сорбента при заражениях птиц вирусами
Ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) и инфекционного
бронхита кур (ИБК) in vivo.
Для изучения влияния МНФ-сорбента на вирус болезни Ньюкасла в условиях in vivo
было сформировано 2 группы СПФ-цыплят (свободных от патогенных факторов) 12дневного возраста по 10 голов в каждой группе. Цыплята группы 1 (опыт) получали с
кормом МНФ-сорбент из расчета 1 % в течение 5 дней до заражения и далее в течение 10
дней после заражения вирусом болезни Ньюкасла. Цыплята группы 2 (контроль) получали
корм без сорбента. Заражение цыплят обеих групп проводили методом внутримышечной
инъекции референтного вирулентного штамма "Т-53" вируса болезни Ньюкасла в дозе
1000 ЭЛД50/мл в объеме 0,2 мл. Наблюдение за цыплятами вели в течение 10 дней после
заражения.
12
BY 11471 C1 2008.12.30
На 4-й день после заражения в группе 2 (контроль) отмечено заболевание 2 цыплят с
характерными клиническими признаками: паралич задних конечностей, тремор головы. 2
цыпленка погибли. На 5 день в группе 1 (опыт) заболел с характерными признаками 1 цыпленок. В группе 2 (контроль) заболело 3 цыпленка. В течение дня все заболевшие цыплята погибли. На 6 день в группе 2 (контроль) отмечено заболевание и гибель еще 2 цыплят.
На 7 день после заражения в каждой группе заболело и погибло по 2 цыпленка. На 8 день
в группе 1 заболел и погиб 1 цыпленок, в группе 2 заболел 1 (последний) цыпленок, который погиб на 9 день после заражения. В группе 1 при последующем наблюдении в течение 5 дней заболевания и гибели цыплят не наблюдалось. Данные по динамике
заболеваемости и гибели цыплят приведены в табл. 11.
Таблица 11
Дни после
Группа 1 (опыт)
Группа 2 (контроль)
заражения
Заболело
Пало
Заболело
Пало
4
2
2
5
1
1
3
j
6
2
2
7
2
2
2
2
8
1
1
1
9
1
10
Итого
4
4
10
10
%
40
40
100
100
Как видно, в группе 2 наблюдалась 100 % заболеваемость и гибель цыплят. В 1-й
группе 60 % цыплят не заболели.
Все погибшие цыплята вскрывались и подвергались патологоанатомическому обследованию. У всех погибших цыплят наблюдали геморрагическое воспаление двенадцатиперстной кишки с некротическим очагами, выступающими над слизистой оболочкой, у 3
цыплят из группы 2, кроме того, наблюдались кровоизлияния в области перехода мышечного желудка в железистый.
Для изучения влияния МНФ-сорбента на вирус инфекционного бронхита кур в условиях in vivo было сформировано 2 группы СПФ-цыплят 12-дневного возраста по 10 голов
в каждой группе. Цыплята группы 1 (опыт) получали с кормом МНФ-сорбент из расчета
1 % в течение 5 дней до заражения и далее в течение 10 дней после заражения вирусом
инфекционного бронхита кур. Цыплята группы 2 (контроль) получали корм без сорбента.
Заражение цыплят обеих групп проводили интраназальным методом референтным вирулентным штаммом "Чапаевский" вируса инфекционного бронхита кур в дозе 10000 ЭИД50/мл
в объеме 0,2 мл. Наблюдение за цыплятами вели в течение 10 дней после заражения. Взвешивание цыплят проводили до начала опыта (фон), через 5 дней (заражение) и через 15
дней (завершение опыта).
В течение периода наблюдения в опытной группе заболело 5 цыплят, в контрольной 8, гибели цыплят не наблюдалось. Заболевание протекало в легкой форме с респираторным синдромом (конъюнктивиты, риниты). На 10 день после заражения птица обеих
групп была убита и подвергнута патологоанатомическому вскрытию. У больных птиц отмечали серозный катаральный экссудат в трахее. При исследовании сывороток крови на
10 день после заражения методом ИФА в опытной группе отсутствие антител выявлено в
30 %, а в контроле - в 10 % случаев.
Таблица 12
Группы
Фон
Через 5 дней
Через 15 дней
1 (опыт)
178,2 ± 6,7
279,1 ± 9,8
635,0 ± 11,3
2 (контроль)
163,7 ± 7,4
267,7 ± 8,5
570,0 ± 10,4
13
BY 11471 C1 2008.12.30
Прирост массы в опытной группе (табл. 12) за 10 дней после заражения составил
355,9 г, в контроле - 302,3 г из расчета на 1 цыпленка.
Для изучения влияния МНФ-сорбента на вирус инфекционного ларинготрахеита птиц
было сформировано 2 группы СПФ-цыплят 25-дневного возраста по 10 голов в каждой
группе. Цыплята группы 1 (опыт) получали с кормом фитосорбент из расчета 1 % в течение 5 дней до заражения и далее в течение 10 дней после заражения вирусом инфекционного ларинготрахеита. Цыплята группы 2 (контроль) получали корм без сорбента.
Заражение цыплят обеих групп проводили интратрахеальным методом референтным вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса инфекционного бронхита кур в дозе
10000 ЭИД50/мл в объеме 0,2 мл. Наблюдение за цыплятами вели в течение 10 дней после
заражения. Взвешивание цыплят проводили перед заражением, через 10 дней (завершение
опыта).
В течение периода наблюдения в опытной группе заболело 6 цыплят, в контрольной -8,
гибели цыплят не наблюдалось. Заболевание протекало в легкой форме с воспалением
конъюнктивы. На 10 день после заражения птица обеих групп была убита и подвергнута
патологоанатомическому вскрытию. У больных птиц отмечали фибринозное воспаление
конъюнктивы. При исследовании сывороток крови на 10 день после заражения методом
ИФА в опытной группе отсутствие антител выявлено в 20 %, а в контроле - в 10 % случаев.
Таблица 13
Группы
Фон (заражение)
Через 10 дней
1 (опыт)
734,4 ± 11,0
1520 ± 12,3
2 (контроль)
715,6 ± 9,9
1480 ± 12,8
Прирост массы в опытной группе (табл. 13) за 10 дней после заражения составил
785,6 г, в контроле - 764,4 г из расчета на 1 цыпленка.
Таким образом, выявлена высокая лечебно-профилактическая эффективность МНФсорбента при заражении цыплят вирусом болезни Ньюкасла: сохранность в опыте - 60 %,
в контроле - 0. Высокая эффективность сорбента по отношению к данному вирусу связана
с его основной локализацией в тонком и толстом отделах кишечника.
Меньшая эффективность МНФ-сорбента наблюдалась при заражении цыплят вирусами инфекционного бронхита и инфекционного ларинготрахеита птиц, что связано с их основной локализацией в респираторных органах.
Пример 10.
Лечение поросят, больных токсической гепатодистрофией.
Лечение проводили на двух группах поросят по 15 голов в каждой, больных токсической гепатодистрофией. Поросятам первой группы (подопытной) в качестве основного
лечебного препарата задавался МНФ-сорбент вместе с кормом в дозе 0,5 г/кг массы поросенка ежедневно до выздоровления. Животные второй группы (контрольной) находились
в аналогичных условиях кормления и содержания с подопытными, а лечение проводилось
стандартным препаратом - антибиотиком геомицин.
В процессе лечения у всех животных устанавливали клинический статус. В первые, 3,
6 и 9 сутки лечения у 5 поросят каждой группы брали кровь для биохимического исследования. В табл. 14 приведена динамика некоторых показателей жирового, пигментного,
белкового и углеводного обменов под влиянием лечения (M ± m, P).
14
BY 11471 C1 2008.12.30
Таблица 14
Группы
Дни лечения
До лечения
поросят
3
6
9
Холестерин,
подопыт.
4,5 ± 0,03
3,2 ± 0,02
2,3 ± 0,07
2,2 ± 0,05*
ммоль/л
контрольн.
4,6 ± 0,04
4,5 ± 0,03
4,0 ± 0,01
3,4 ± 0,05**
Билирубин,
подопыт.
6,36 ± 0,12
5,25 ± 0,10
4,53 ± 0,05
2,81 ± 0,052*
мкмоль/л
контрольн.
6,0 ± 0,06
6,1 ± 0,063
5,60 ± 0,05
4,43 ± 0,070
Общие липиды, подопыт.
3,7 ± 0,08
3,3 ± 0,01
2,9 ± 0,07
2,6 ± 0,03*
моль/л
контрольн.
3,6 ± 0,06
3,5 ± 0,01
3,6 ± 0,04
3,6 ± 0,03
Ь-липопорт., г/л подопыт.
1,2 ± 0,03
0,8 ± 0,06
0,7 ± 0,02
0,7 ± 0,03*
контрольн.
1,2 ± 0,03
1,1 ± 0,05
1,0 ± 0,02
1,1 ± 0,04
Альбумины, г/л подопыт.
21,8 ± 0,49
22,3 ± 0,51
23,2 ± 0,17
24,8 ± 0,02**
контрольн. 20,9 ± 0,82
21,4 ± 0,67
21,5 ± 0,63
21,9 ± 0,49
Общий белок,
подопыт.
64,8 ± 0,27
63,2 ± 0,10
59,5 ± 0,33
56,7 ± 0,25**
г/л
контрольн. 64,9 ± 0,08
65,1 ± 0,10
64,9 ± 0,10
64,8 ± 0,10
Глюкоза,
подопыт.
4,0 ± 0,07
3,7 ± 0,02
3,3 ± 0,01
3,3 ± 0,02*
ммоль/л
контрольн. 4,1 ± 0,09
4,0 ± 0,03
3,7 ± 0,03
3,5 ± 0,03**
Примечание: * - Р < 0,001 в сравнении с животными до лечения; ** - Р < 0,01 в сравнении с животными до лечения.
Как видно по результатам исследований, у животных подопытной группы, получавших
в процессе лечения МНФ-сорбент, уже на 3 и тем более на 9 сутки лечения происходит восстановление антитоксической функции печени, оптимизируются жировой и пигментный
обмен. После курса лечения препаратом отмечаются процессы репаративной регенерации
печеночных структур, что выражается в уменьшении количества очагов некробиоза гепатоцитов, дискомплексации печеночных балок и незначительном количестве пролифератов.
Пример 11.
Влияние МНФ-сорбента на систему антиокислительной защиты организма цыплятбройлеров при скармливании корма с высоким содержанием переокисленных липидов
(ПОЛ).
Для проведения опыта было сформировано 6 групп цыплят-бройлеров 15-дневного
возраста. Продолжительность опыта составила 30 суток. Соевое масло добавляли в корм
из расчета 4 мл на 100 г корма, при этом кислотное число корма на протяжении опыта находилось в пределах от 26 до 30,0 мг КОН, а перекисное число - от 0,45 до 0,59 % йода,
при норме не более 20,0 мг КОН и не более 0,3 % йода соответственно. Корм с испорченным жиром получали цыплята первой, второй, третьей и четвертой групп. При этом первой группе цыплят в корм добавляли испытуемый МНФ-сорбент из расчета 0,5 % к массе
корма, второй - 1 %, третьей - 1,5 %, четвертой - 2 %. Пятая группа цыплят получала
обычный корм (рецепта 5Б) для цыплят-бройлеров с нормальными перекисными и кислотными числами жира (кислотное число жира - 20,0 мг КОН, а перекисное число жира 0,06 % йода.) Шестая группа цыплят получала аналогичный корм с добавлением соевого
масла с показателями окисления, как в 1-4 группах.
На протяжении опыта за птицей всех групп велось ежедневное наблюдение. Учитывалось клиническое состояние птицы, поедаемость корма, поведение. Перед началом опыта
(фон), а также на 15 и 30 сутки опыта проводили взвешивание птицы и взятие крови
(цельной и на сыворотку). В крови определяли показатели перекисного окисления липидов - малоновый диальдегид (МДА), гидроперекиси липидов, активность супероксиддисмутазы (СОД).
По окончании опыта был проведен убой птицы и отбор проб внутреннего жира и мозга. Во внутреннем жире было определено кислотное и перекисное число. В мозге определяли концентрацию МДА.
Показатели
15
BY 11471 C1 2008.12.30
В опыте отмечается достоверно более низкая активность СОД на 30 сутки опыта в 2-4
группах цыплят по сравнению с группой 6, не превышая таковой в группе 5 (корм с нормальным жиром). Это свидетельствует о снижении интенсивности процессов ПОЛ в
опытных группах по сравнению с контрольными. Защитное действие МНФ-сорбента подтверждается и достоверным снижением концентрации гидроперекисей в опытных группах
на 30 сутки опыта, а концентрации малонового диальдегида на 15 и 30 сутки опыта.
Изучение других биохимических и гематологических параметров показало, что МНФсорбент оказывает ярко выраженный защитный эффект в условиях in vivo от негативного
воздействия кормов с повышенным содержанием продуктов перекисного окисления. Так,
концентрация МДА в крови цыплят опытных групп была меньше на 16-18 %, активность
СОД - ниже на 10-12,5 %, содержание гидроперекисей - на 28-35 % ниже по сравнению с
цыплятами, получавшими окисленный корм без сорбента. При этом данные показатели в
опытных группах выходили на уровень таковых у цыплят из группы, получавшей нормальный корм. Кислотное число внутреннего жира цыплят, получавших сорбент в различных дозах, было ниже на 26-30 %, достоверно не отличаясь от группы цыплят с
нормальным кормом. Концентрация МДА в мозге цыплят опытных групп была ниже на
42-56 % по сравнению с цыплятами, получавшими окисленный корм без сорбента, что иллюстрируется на фиг. 7, 8, 9, 10.
Таким образом, применение МНФ-сорбента оказывает нормализующее влияние на основные показатели перекисного окисления липидов. При этом препарат следует добавлять
в корм на протяжении всего периода скармливания кормов с повышенной степенью окисления.
Пример 12.
Лечение МНФ-сорбентом животных при остром и хроническом отравлениях пестицидами.
Испытания при остром отравлении цыплят-бройлеров гербицидом 2,4-Д и инсектицидом - линданом (1,2,3,4,5,6 - гексахлорциклогексан) проводились следующим образом.
Цыплята-бройлеры 30-дневного возраста были сформированы в две партии в каждой по 2
группы по 25 голов в каждой группе. В каждой партии одна группа цыплят получала с
кормом МНФ-сорбент из расчета 1 % к массе корма. Вторая группа получала корм без
сорбента. На вторые сутки после начала опыта цыплятам вводили однократно в зоб с помощью зонда в первой партии гербицид 2,4-Д в дозе 500 мг/кг массы тела, во второй партии - линдан в дозе 15 мг/кг массы тела. За птицей велось ежедневное наблюдение с
учетом клинического состояния. Через 1, 2, 3, 4, 5 суток после введения пестицидов производили убой пяти цыплят из каждой группы в каждой партии с отбором мышц и печени
для определения остаточных количеств пестицидов.
Характер динамики остаточных количеств гербицида 2,4-Д и линдана, представленный на диаграммах (фиг. 1-2), иллюстрирует эффективность применения МНФ-сорбента
при остром отравлении птицы пестицидами. Из печени цыплят гербицид 2,4 Д практически выводится на 4 сутки, линдан - на 5 сутки, при этом наблюдаются более сглаженные
клинические признаки отравления по сравнению с контрольными группами птиц, не получавших сорбент.
Эффективность применения МНФ-сорбента при хроническом отравлении гербицидом
2,4-Д и линданом соответственно иллюстрируется в табл. 15 и 16, где приведена динамика
массы тела цыплят, получавших МНФ-сорбент. Для проведения исследований было сформировано две партии по 4 группы цыплят 120-дневного возраста по 25 голов в каждой. В
первой партии цыплятам 1, 2, 3 групп вводили гербицид 2,4-Д в дозе 200 мг/кг массы тела.
Во второй партии ежедневно в течение 20 дней с помощью зонда в зоб цыплятам первой,
второй и третьей групп вводили инсектицид линдан в дозе 5 мг/кг массы тела. Группа 4 в
каждой партии служила контролем. В каждой партии первая группа получала МНФсорбент из расчета 1 % к массе корма. Вторая группа получала с кормом фитосорбент из
16
BY 11471 C1 2008.12.30
расчета 2 %. Третья и четвертая группы содержались на обычном рационе без сорбента. За
птицей в каждой партии всех групп велось ежедневное наблюдение с учетом клинического состояния. Определение массы тела, взятие крови для проведения гематологических и
биохимических исследований проводили в следующие сроки: фон, 10 и 20 дней.
Таблица 15
Масса тела цыплят по срокам исследований, г
№ группы
Среднесуточный привес, г
фон
10 дней
20 дней
1 (1 % сорб.) 1120 ± 16,0 1525 ± 21,0
1696 ± 20,0
28,8
2 (2 % сорб.) 1110 ± 14,0 1640 ± 19,5
1745 ± 21,0
31,75
3 (без сорб.)
1100 ± 15,0 1325 ± 16,8*
1446 ± 18,2*
17,3*
4 (контроль)
1100 ± 14,0 1520 ± 22,0
1650 ± 17,5
27,5
Таблица 16
Масса тела цыплят по срокам исследований, г
№ группы
Среднесуточный привес, г
фон
10 дней
20 дней
1 (1 % сорб.)
808 ± 12,0
1157 ± 20,0
1395 ± 20,0
29,3
2 (2 % сорб.)
764 ± 10,0
1120 ± 14,5
1425 ± 23,0
33,05
3 (без сорб.)
788 ± 15,0 1032 ± 18,5*
1270 ± 15,4*
25,4*
4 (контроль)
762 ± 11,0
1138 ± 20,0
1390 ± 17,5
31,4
*
- достоверные отличия с группой 4 (Р < 0,01).
При хроническом отравлении пестицидами у цыплят, получавших с кормом МНФсорбент из расчета 1 и 2 % к массе корма, не отмечено достоверных отличий по динамике
прироста массы тела, гематологическим и биохимическим показателям по сравнению с
контрольными цыплятами, содержащимися на обычном рационе. Цыплята, не получавшие
МНФ-сорбент, при хроническом отравлении пестицидами отставали в росте и развитии от
цыплят контрольных групп. Также наблюдались отклонения по некоторым гематологическим и биохимическим показателям от цыплят контрольной группы. Как видно, применение МНФ-сорбента способствует быстрому выведению пестицидов при острых
отравлениях и нормализует клиническое состояние и обменные процессы при хронических отравлениях.
Пример 13.
Влияние МНФ-сорбента на продуктивность кур-несушек в процессе их содержания и
качество продуктов птицеводства.
Влияние МНФ-сорбента на качество яйца изучалось на 4-х группах кур-несушек породы Хайсекс белый 160-дневного возраста по 25 голов в каждой группе. Продолжительность
испытаний - 30 дней. Первая группа птиц получала стандартный корм рецепта ПК 1Б. Вторая группа получала аналогичный корм с добавкой окисленного соевого масла из расчета
1 % к массе корма, перекисное число жира корма находилось в пределах 0,4-0,5 % йода.
Третья группа получала такой же корм, как и 2 группа, но с дополнительным введением
МНФ-сорбента из расчета 1 % к массе корма. Четвертая группа - контрольная - получала
комбикорм ПК1Б с добавлением доброкачественного соевого масла из расчета 2 % к массе
корма. В процессе испытаний вели ежедневный учет яйценоскости птиц по группам, определяли кислотное число желтка яиц, а также содержание витамина А, каратиноидов, морфологических показателей (индекс-форма, масса, толщина скорлупы и т.д.). В желтке яиц
определяли наличие антител к вирусу болезни Ньюкасла в РТГА (реакция торможения гемагглютинации) и инфекционной бурсальной болезни в реакции диффузионной преципитации (РДП), против которых птицы были вакцинированы в 120-дневном возрасте.
Показатели, иллюстрирующие влияние МНФ-сорбента на яйценоскость, динамику кислотного числа желтка, качество яиц по стандартным показателям и уровень трансовариальных антител в желтке яиц, представлены в таблицах 17, 18, 19, 20.
17
BY 11471 C1 2008.12.30
Таблица 17
Количество яиц по срокам исследований
Всего яиц за Кол-во яиц на
Группы птиц
период опыта
1 голову
1 декада
2 декада
3 декада
1
200
220
227
647
25,9
2
200
225
212
636
25,5
3
212
241
220
674
27,0
4
209
238
223
670
26,8
По данным табл. 17 наибольшая яйценоскость наблюдалась в группе 3, в которой птица получала недоброкачественный корм с сорбентом, и в группе 4, которая получала корм
с добавлением доброкачественного жира. Наименьшая яйценоскость отмечена в группе 2,
где птица получала недоброкачественный корм без МНФ-сорбента.
Таблица 18
Группы птиц
Кислотное число желтков яиц (мг КОН) по срокам исследования
1 декада
2 декада
3 декада
1
6,45 ± 0,3
7,10 ± 0,4
7,58 ± 0,3
2
6,84 ± 0,3
7,60 ± 0,3
7,72 ± 0,4
3
6,03 ± 0,4*
5,90 ± 0,3*
6,40 ± 0,4*
4
6,40 ± 0,3
6,80 ± 0,2
7,60 ± 0,4
* - различия достоверны при Р < 0,05.
По данным табл. 18 кислотное число желтка яиц, полученных от птицы из группы 3,
было достоверно ниже, чем таковое во 2-й группе, что свидетельствует о положительном
влиянии сорбента на этот качественный показатель яиц при скармливании птице кормов с
высокой степенью окисления жира.
Таблица 19
Показатели качества яиц
Толщина
Группы Вит. А,
ИндексКаратиноМасса
Высота
Ед. Хау
скорлупы,
мкг/г
форма
иды, мкг/г
яиц, г белка, Мм
мм
1
7,75 ± 0,3
76,9 ± 2,1 84,0 ± 3,0 18,29 ± 1,1 0,36 ± 0,01 53,4 ± 2,3 7,09 ± 0,4
2
7,79 ± 0,3
75,0 ± 2,0 81,75 ± 3,0 16,08 ± 1,3 0,32 ± 0,02 53,6 ± 2,1 6,43 ± 0,2
3
8,15 ± 0,4* 76,6 ± 2,3 84,4 ± 2,5 19,58 ± 1,0* 0,34 ± 0,01 61,4 ± 2,0* 6,6 ± 0,4
4
7,92 ± 0,3
76,2 ± 2,3 81,9 ± 2,6 18,5 ± 1,1 0,36 ± 0,02 55,1 ± 2,2 6,49 ± 0,3
Нормы не < 6,0
70-80
не < 78
не < 15,0 не < 0,34
52-67
6-8
* - Р < 0,05.
По данным табл. 19 показатели качества яиц, полученных от птиц всех групп, находились в пределах нормы. Однако такие ключевые показатели, как содержание витамина А,
каротиноидов и средней массы яиц, достоверно выше в 3 группе. При этом наибольшая
разница наблюдается по сравнению с группой 2: содержание витамина А - на 4,6 %, каротиноидов - на 21,8 %, средняя масса - 1,6 %.
Таблица 20
Титры антител, log2
№ группы
к вирусу НБ
к вирусу ИББ
I
4,1 ± 0,2
1,8 ± 0,1
II
2,6 ± 0,1*
0*
III
4,0 ± 0,2
1,6 ± 0,1
IV
3,8 ± 0,1
2,0 ± 0,1
* - Р< 0,05.
Данные табл. 20 свидетельствуют, что титры трансовариальных антител к вирусам НБ
и ИББ (болезнь Гамборо) в желтке яиц, полученных от птицы, которой скармливали недоброкачественный комбикорм (группа 2), значительно ниже таковых в других группах.
18
BY 11471 C1 2008.12.30
Таким образом, введение в основной рацион кур-несушек МНФ-сорбента из расчета
1 % к массе корма восстанавливает яйценоскость и качественные показатели пищевого
яйца, нарушенные в результате скармливания птице кормов с прогорклым жиром, при
этом МНФ-сорбент нормализует трансовариальный иммунный ответ.
Фармацевтический препарат - меланинсодержащий МНФ-сорбент для профилактики
и лечения заболеваний животных - прошел необходимый цикл испытаний и может быть
рекомендован для широкого применение на рынке фармацевтических препаратов для животноводства и птицеводства. Особенно эффективно его применение в качестве профилактического средства в составе полнорационных комбикормов для устранения
отрицательного воздействия экотоксикантов на организм животных в зонах постоянного
или временного техногенного загрязнения и в зонах эпизоотий для профилактики заболеваний и токсических состояний животных, снижения или устранения потребности в антибиотиках и других небезопасных препаратах-антидотах.
Существенным преимуществом нового препарата является высокая технологичность и
эффективность использования, широкий спектр действия, дешевизна по сравнению с существующими аналогами.
Источники информации:
1. Углеродный гемосорбент КАУ. Разработчик: Институт сорбции и проблем эндоэкологии АН Украины. Рекламный проспект, КФПК, 1992. 3. 2-3080. Т. 3000.
2. Патент RU 2158128 С1, МПК7 А 61К 31/695, 2000.
3. Патент RU 2146935 С1, МПК7 А 61К 35/66, 35/74, 2000.
4. Патент RU 2 255 803 С1, МПК7 В 01J 20/24, 2005.
5. Патент RU 2067328 С1, МПК6 G 21F 9/12, 1996.
6. Лапина В.А., Рубанов А.С., Донцов А.Е., Островский М.А. Фитосорбент "Виктория" новый перспективный сорбент, полученный из отходов сельскохозяйственного сырья.
Материалы международного семинара "Конверсия научных исследований в Беларуси в
рамках деятельности МНТЦ". Ч.2. - Мн., 1999. - С. 38-41.
7. Патент RU 2 060 818 С1, МПК6 В 01J 20/30, 20/24, 1996 (прототип).
Фиг. 1
Фиг. 2
19
BY 11471 C1 2008.12.30
Фиг. 3
Фиг. 4
Фиг. 5
Фиг. 6
20
BY 11471 C1 2008.12.30
Фиг. 7
Фиг. 8
Фиг. 9
Фиг. 10
Фиг. 11
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
21
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
2 173 Кб
Теги
by11471, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа