close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11494

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2008.12.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 11494
(13) C1
(19)
A 61K 36/185
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ
ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
(21) Номер заявки: a 20060712
(22) 2006.07.11
(43) 2008.02.28
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Кузнецова Зинаида Павловна; Цыганков Василий Георгиевич; Бондарук Алла Михайловна;
Соколов Сергей Михайлович; Левашкевич Антон Леонидович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(56) BY 5575 C1, 2003.
SU 1143423 A, 1985.
SU 942761 A, 1982.
RU 2105563 C1, 1998.
RU 2224535 C1, 2004.
US 2002/0136783 A1.
ЛОБАНОВА А.А. и др. Химия растительного сырья. - 2004. - № 1. - С. 47-52.
BY 11494 C1 2008.12.30
(57)
Способ получения фенольных веществ из растительного сырья, включающий 3-кратное экстрагирование сырья этанолом, концентрирование объединенных экстрактов путем
упаривания под вакуумом при температуре от 50 до 60 °С, отделение осадка центрифугированием и выделение фенольных веществ из надосадочной жидкости на полиамидном
адсорбенте, отличающийся тем, что в качестве сырья используют высушенные при температуре 15-20 °С листья горца сахалинского, а экстрагирование фенольных веществ проводят 72-90 % этанолом, причем массовое соотношение сырье : этанол составляет 1:5.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способов выделения биологически активных веществ, обладающих рядом эффектов, опосредованных Р-витаминной активностью.
Известен способ получения флавоноидов, обладающих Р-витаминной активностью,
где в качестве растительного сырья используют надземную часть горца Вейриха, экстрагирование проводят 86-96 %-ным этиловым спиртом, очистку от балластных веществ проводят с помощью полиамидного адсорбента и центрифугирования при 60-70 тыс.об/мин в
течение 20-30 мин.
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому [1].
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является получение комплекса биологически активных веществ (БАВ) из растительного сырья путем его экстрагирования этанолом, упаривания, очистки с использованием полиамидного адсорбента и
центрифугирования.
Способ-прототип позволяет получить из указанного растительного сырья только вещества, относящиеся к классу флавонолов.
Задачей заявляемого изобретения является расширение сырьевой базы и получение
субстанции биологически активных веществ, обладающих антиоксидантной и адаптогенной активностью.
BY 11494 C1 2008.12.30
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ получения фенольных
веществ из растительного сырья, включающий 3-кратное экстрагирование сырья этанолом, концентрирование объединенных экстрактов путем упаривания под вакуумом при
температуре от 50 до 60 °С, отделение осадка центрифугированием и выделение фенольных веществ из надосадочной жидкости на полиамидном адсорбенте, при этом в качестве
сырья используют высушенные при температуре 15-20 °С листья горца сахалинского, а
экстрагирование фенольных веществ проводят 72-90 % этанолом, причем массовое соотношение сырье : этанол составляет 1:5.
Горец сахалинский является типичным представителем крупнотравья. По внешнему
виду он скорее напоминает кустарник, чем травянистое растение, так как его стебли достигают высоты 2,5-4,5 м. Листья широкоовальные, длина 10-30 см, ширина 4,25 см.
Достоинство предложенного растения состоит еще и в его экологической продуктивности. Однажды посаженное оно может без пересева давать высокие урожаи зеленой массы до 700 ц/га в течение более 15 лет с незначительными затратами на выращивание. В
субстанции, полученной из листьев горца сахалинского, наряду с флавоноловыми веществами присутствуют вещества, относящиеся к классу флавонов и производных антрацена, с
выраженным антиоксидантным и адаптогенным действием.
Пример.
1 кг воздушно-сухих листьев горца сахалинского экстрагируют 72-90 %-ным этиловым спиртом при температуре + 15-20 °С в течение трех суток (1 слив в сутки). Соотношение сырья к экстрагенту 1:5 соответственно. Объединенные элюаты концентрируют в
вакууме при температуре 50-60 °С до водного остатка, который затем помещают в колонку, наполненную полиамидным адсорбентом (250 г), размером 10 × 50 см.
Элюирование целевого продукта проводят 80 %-ным этиловым спиртом, этанольные
экстракты объединяют, центрифугируют при 60 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость отделяют и испаряют в испарителе при 50-60 °С. Выход - 3,8-4,0 %. Этанол и полиамид могут быть использованы многократно с небольшими потерями.
Суммарный комплекс БАВ листьев горца сахалинского - аморфный порошок грязнозеленого цвета, хорошо растворим в этиловом спирту любого разбавления.
Фитохимическими методами в суммарном препарате установлены, т.е. идентифицированы, основные компоненты, преобладающие в количественном отношении, а именно:
в группе флавонолов идентифицирован кверцетин, авикулярин, кверцитрин, гиперин, в
группе флавонов - лютеолин-7-глюкозид и три виценина, производные апигенина, в группе антрагликозидов - фисцион и эмодин.
Проведено комплексное доклиническое изучение выделенного комплекса БАВ и показано, что субстанция флавоноидов не проявляет первичной токсичности при ее пероральном введении беспородным мышам в 5-кратной терапевтической дозе. LD50 субстанции
БАВ составляет 6,06 г/кг массы тела.
Пероральное введение нарастающих дозировок субстанции (от 4,5 до 9,0 г/кг массы)
не вызывает гибели крыс линии Вистар и увеличение весовых коэффициентов основных
органов обеспечения (табл. 1).
Исследование острой токсичности БАВ горца сахалинского показало, что пероральное
введение нарастающих дозировок препарата практически не сказывается на показателях
"красной" и "белой" крови крыс Вистар (табл. 2).
Изученный комплекс не нарушает функциональную белок-синтезирующую активность печени, не провоцирует чрезмерную активацию процессов эндогенного протеолиза,
не вызывает дисбаланса в системе протеиназы - ингибиторы протеиназ и функциональную
недостаточность экзопептидаз, не оказывает токсического повреждения почечной паренхимы, не нарушает функции почек по экскреции мочевины и креатинина (табл. 3).
При изучении содержания продуктов перекисного окисления липидов в плазме крови
крыс в диапазоне доз от 4,5 до 9,0 г/кг массы животного выявлена выраженная интенсификация процессов ПОЛ, обусловленная дозами (в несколько тысяч раз превышающими
2
BY 11494 C1 2008.12.30
терапевтическую) и проявлявшаяся в накоплении как промежуточных, так и конечного
метаболита ПОЛ, дозовой зависимости при этом не установлено (табл. 4).
При изучении хронической токсичности установлено, что пероральное введение БАВ
горца сахалинского и препарата аналога рутина в течение 4-х месяцев не вызывало изменений красной крови экспериментальных животных.
При введении исследуемого препарата в течение 1-2 месяцев повышался коагуляционный потенциал крови, что однако компенсировалось усилением плазминовой активности. При более длительном введении (3-4 месяца) комплекс БАВ оказывал гипокоагуляционное действие. При исследовании влияния препарата в отдаленном периоде отмечалась
повышенная активность антикоагулянтов через 1 месяц и полное отсутствие какого-либо
влияния спустя 3 месяца после окончания введения.
В результате изучения специфических видов токсичности и специфической активности на модели истощающей физической нагрузки (плавание) БАВ горца сахалинского были сделаны следующие выводы.
Интрагастрально вводимая животным субстанция горца сахалинского в пятикратной
суточной терапевтической дозе не вызывала патоморфологических изменений в основных
органах жизнеобеспечения организма и по своему действию ничем не отличалась от препарата рутина.
У субстанции из горца сахалинского не выявлены тератогенные и эмбриотоксические
эффекты.
Исследование влияния субстанции БАВ фенольной природы на процессы ПОЛ при
моделировании длительной утомляемости свидетельствует о том, что они оказывают антиоксидантное и адаптогенное действие при длительной нагрузке.
Изучение состояния показателей свертывающей системы крови крыс при моделировании острой утомляемости с предварительным введением флавоноидов горца сахалинского
показало их корригирующее влияние на адаптогенно-защитные механизмы, регулирующие свертывающую систему крови организма, находящегося в экстремальных условиях,
поскольку изученный комплекс БАВ обладает рядом полезных биологических свойств,
таких как антиоксидантное и адаптогенное в отношении отдельных молекулярнофизиологических механизмов поддержания гомеостаза.
Установлено, что у исследуемого комплекса отсутствует выраженное негативное действие на основные структурно-метаболические системы организма экспериментальных
животных.
Таким образом, достигаемым техническим результатом заявляемого способа является
возможность расширить сырьевую базу, являющуюся источником для создания группы
лечебно-профилактических средств, улучшающих процессы адаптации и нормализации
нарушенных функций организма, что крайне важно для развития отечественной фармакологической промышленности и уменьшения зависимости отечественной медицины от
импорта аналогичных лекарственных средств.
Таблица 1
Влияние различных дозировок субстанции флавоноидов на весовые коэффициенты
основных внутренних органов крыс
Серия
Печень
Сердце
Легкое
Селезенка
Почки
эксперимента
Контроль
2,88±0,440
0,38±0,023
0,66±0,034
0,41±0,027
0,061±0,019
4,5 г/кг
3,39±0,151* 0,37±0,042
0,66±0,058
0,46±0,020
0,61±0,025
6,0 г/кг
3,14±0,113* 0,38±0,011
0,71±0,063
0,46±0,052
0,61±0,014
7,5 г/кг
3,52±0,156* 0,35±0,019
0,67±0,096
0,041±0,032
0,61±0,029
9,0 г/кг
3,30±0,120* 0,41±0,025
0,73±0,067
0,44±0,056
0,70±0,067
Примечание: * - достоверность различий по отношению к контролю при уровне значимости Р < 0,05.
3
BY 11494 C1 2008.12.30
Таблица 2
Изменение цитогематометрических показателей периферической крови крыс
при введении нарастающих дозировок субстанции флавоноидов
Содержание Количество Количество
Показатель Количество
Условия
гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, гематокрита, тромбоцитов,
эксперимента
г/л
1012/л
109/л
%
109/л
Контроль
136,7±1,31
6,8±0,05
10,3±0,83
39,6±0,81
747±45,81
4,5 г/кг
141,0±2,19
6,5±0,20
12,9±0,36
39,7±1,85
708±34,68
6,0 г/кг
138±2,20
6,8±0,27
16,5±1,31*
41,8±2,94
708±49,62
7,5 г/кг
141,5±4,13
7,0±0,24
12,8±1,17
42,1±3,53
645±66,66
9,0 г/кг
130,7±1,76
6,7±0,29
12,5±0,91
39,4±1,50
909±39,28
Примечание: * - уровень значимости различий при Р < 0,05.
Таблица 3
Влияние нарастающих дозировок субстанции флавоноидов на содержание белка
и уровень метаболитов протеинового обмена в плазме крови крыс
Условия
Общий белок,
Альбумин, г/л
эксперимента
г/л
Контроль
57,8±2,78
25,8±1,03
4,5 г/кг
54,0±1,84
24,9±0,67
6,0 г/кг
63,0±1,85
22,3±1,14
7,5 г/кг
60,3±1,22
24,4±0,12
9,0 г/кг
56,7±2,27
21,9±1,47
СМ, г/л
0,786±0,023
0,738±0,016
0,722±0,031
0,760±0,082
0,867±0,035
Мочевина,
мМ/л
2,85±0,115
2,62±0,122
2,80±0,165
3,61±0,093
2,47±0,116
МкМ/л
64,53±2,735
63,40±1,525
67,37±1,132
67,61±1,030
58,83±0,998
Таблица 4
Содержание продуктов ПОЛ в плазме крови крыс при исследовании
острой токсичности суммарных комплексов флавоноидов горца сахалинского
в различных дозировках
Условия
эксперимента
Контроль
4,5 г/кг
6,0 г/кг
7,5 г/кг
9,0 г/кг
ТК,
ед. ОП/мл
0,37±0,002
0,50±0,003*
0,50±0,005*
0,52±0,005*
0,50±0,004*
ДК,
ед. ОП/мл
0,83±0,002*
1,14±0,017*
1,13±0,010*
1,15±0,004*
1,10±0,007*
НЛ,
ед. ОП/мл
2,64±0,003
2,88±0,002*
2,87±0,004*
2,88±0,009*
2,87±0,009*
Источники информации:
1. Патент РБ 5575 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
ИО
0,31±0,002
0,40±0,005*
0,39±0,04*
0,40±0,000*
0,38±0,003
МДА
НМ/мл
3,36±0,140
6,83±0,412*
7,14±0,498*
5,95±0,456*
8,05±0,320*
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
99 Кб
Теги
by11494, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа