close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11529

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 11529
(13) C1
(19)
C 07K 1/00
C 12N 9/94
СПОСОБ ГИДРОЛИЗА БЕЛКА
(21) Номер заявки: a 20070345
(22) 2007.04.03
(43) 2008.12.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Никандров Виталий Николаевич; Пыжова Нелли Семеновна;
Шатило Нина Лукинична; Шнып
Ирина Викторовна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(56) Питательные среды в медицинской
микробиологии: Руководство по изготовлению питательных сред для микробиологических институтов и санитарнобактериологических лабораторий. Москва: МЕДГИЗ, 1950. - С. 51-53.
RU 2020153 C1, 1994.
RU 2084172 C1, 1997.
RU 2132142 C1, 1999.
BY 11529 C1 2009.02.28
(57)
Способ гидролиза белка, включающий добавление измельченной ткани или экстракта
поджелудочной железы к водно-солевому раствору белка и инкубирование при 37 °С, отличающийся тем, что в качестве водно-солевого раствора используют 0,0075-0,06 М
фосфатный буфер pH 7,2, содержащий Na2HPO4 и KH2PO4.
Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при производстве микробиологических питательных сред, содержащих гидролизаты белков.
Известен способ панкреатического гидролиза белков, включающий приготовление
водно-солевого раствора или взвеси белков, добавления измельченной ткани или экстракта поджелудочной железы и инкубирование при 37 °С [1].
Указанный способ является прототипом в отношении заявляемого.
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является приготовление водно-солевого раствора или взвеси белков, добавление измельченной ткани или экстракта
поджелудочной железы и инкубирование при 37 °С. Однако недостатком прототипа является недостаточно глубокое и интенсивное расщепление белков.
Задачей заявляемого способа является увеличение глубины и интенсивности расщепления белков.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ гидролиза белка, включающий добавление измельченной ткани
или экстракта поджелудочной железы к водно-солевому раствору белка и инкубирование
при 37 °С, при этом в качестве водно-солевого раствора используют 0,0075-0,06 М фосфатный буфер рН 7,2, содержащий Na2HPO4 и КН2РО4.
Использование в качестве растворителя раствора солей неорганического ортофосфата
позволяет интенсифицирофать расщепление белков и увеличить его глубину при проведении гидролиза экстрактами и тканью поджелудочной железы.
BY 11529 C1 2009.02.28
Пример 1
Расщепление растворов белков экстрактами поджелудочной железы.
В 3 пробирки вносили по 100 мг: в первую - казеина по Гаммерстену, во вторую - гемоглобина быка, в третью - желатина (Serva, Германия), добавляли дистиллированную
воду до объема 10 мл и перемешивали содержимое до растворения белков (контрольные
пробы).
В следующие семь групп пробирок, по 3 в каждой группе, вносили такое же количество одного из указанных белков, добавляли растворы фосфатного буфера рН 7,2 до объема
10 мл и перемешивали содержимое до растворения белков (опытные пробы). При этом
концентрация ортофосфата в первой опытной группе была 0,06М, во второй - 0,03М, в
третьей - 0,015М, в четвертой - 0,0075М, в пятой - 0,00375М, в шестой - 0,00186М.
Для гидролиза использовали экстракт поджелудочной железы быка: навеску ткани измельчали, добавляли 2,5 части дистиллированной воды, 1 часть этанола и оставляли при
комнатной температуре. Через 3 суток фильтровали через капроновую сетку и использовали в работе. Интенсивность гидролиза белков регистрировали методом лизиса в тонком
слое агарового геля [2].
Для этого из полученных растворов белков готовили белок-агаровые пластины, на которые наносили аликвоты экстракта поджелудочной железы микродозатором по 10 мкл.
Затем инкубировали белок-агаровые пластины с нанесенным на поверхность экстрактом
поджелудочной железы при 37 °С в течение 24 часов. После этого обрабатывали все пластины 2 н раствором трихлоруксусной кислоты и измеряли площадь зон расщепления
белков. Результаты сведены в таблицу 1.
Таблица 1
Расщепление белков экстрактом поджелудочной железы
(в мм2 зон лизиса белкового субстрата, n = 4)
Испытуемый вариант
Казеин, 1 %
Гемоглобин, 1 %
Желатин, 1 %
Прототип (контроль)
462±21
87±9
670±30
Заявляемый способ:
добавка солей ортофосфата
0,060 М
659±25*
252±17*
693±29
0,030 М
784±40*
229±14*
688±26
0,015 М
638±21*
229±20*
1008±40*
0,0075 М
560±19*
168±13*
938±35*
0,00375 М
521±20
124±10*
518±20*
0,00186 М
500±25*
79±9
660±29*
* Р ≤ 0,05.
Из материалов таблицы видно, что соли неорганического ортофосфата усиливают панкреатический гидролиз казеина в 1,7-1,2 раза при концентрации 0,060-0,0075М, гидролиз
гемоглобина в 2,9-1,4 раза при той же концентрации, а гидролиз желатина в 1,5-1,4 раза
при концентрации 0,015-0,0075М. Уменьшение концентрации ортофосфата за пределы
заявляемого диапазона ухудшает результат. Увеличение концентрации не приводит к
улучшению результата.
Пример 2
Белоксодержащее сырье.
Белоксодержащее сырье, например вываренный говяжий фарш, помещали в бутыль,
добавляли дистиллированную воду и свежеизмельченную железу. Смесь подщелачивали
20 % раствором NaOH до рН 7,8, добавляли хлороформ (3 % от объема смеси), бутыль с
содержимым инкубировали при 37 °С при периодическом перемешивании смеси (прототип).
2
BY 11529 C1 2009.02.28
В другие 3 бутыли (опыт) вносили те же компоненты, однако дистиллированную воду
заменяли водным раствором солей неорганического ортофосфата при концентрации: первая бутыль - 0,06М, вторая бутыль - 0,03М и третья бутыль - 0,015М. Эти бутыли с содержимым инкубировали также при 37 °С при периодическом перемешивании.
Ежедневно отбирали аликвоты взвеси, центрифугировали при 6000 об/мин в течение
30 мин и в надосадочной жидкости определяли уровень низкомолекулярной пептидной
фракции и остаточного белка [3], кислоторастворимого триптофана [4]. Результаты испытаний сведены в таблицу 2.
Как видно из материалов таблицы, в присутствии солей неорганического ортофосфата
уже в первые сутки происходит переход большего, чем в прототипе, количества белка в
растворимую фазу в 1,1 раза. Затем вследствие расщепления уровень его уменьшается,
особенно заметно при концентрации солей ортофосфата 0,015М. Снижение уровня белка в
прототипе составляет 2,5 г/л, а в этом варианте - 5,0 г/л. Вследствие расщепления белка
накапливаются низкомолекулярные пептиды, триптофан, уровень которых на четвертые
сутки гидролиза в заявляемом способе превышает прототип в 1,45-1,82 раза (низкомолекулярные пептиды) и в 1,42-2,60 раза (триптофан). Это подтверждает более глубокое расщепление белков в заявляемом способе в сравнении с прототипом. Изменения концентрации
ортофосфата за пределы указанных не улучшают результат.
Таблица 2
Изменения уровня белково-азотистых компонентов надосадочной жидкости
панкреатических гидролизатов говяжьего фарша (n = 3)
Испытуемый вариант
Прототип (контроль)
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
Заявляемый способ:
добавка солей
ортофосфата 0,06М
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
0,03М
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
0,015М
1 сутки
2 сутки
3 сутки
4 сутки
Остаточный белок, Низкомолекулярные
г/л
пептиды, г/л
15,5
12,5
15,0
9,5
13,6
7,0
13,0
5,5
Триптофан, г/л
0,18
0,20
0,37
0,19
17,0
14,0
15,0
14,0
12,8
12,0
10,0
9,5
0,22
0,19
0,37
0,49
15,7
15,0
10,0
13,0
12,8
10,3
10,0
10,0
0,26
0,22
0,38
0,37
17,5
12,0
10,0
10,5
10,5
9,5
8,0
8,0
0,17
0,19
0,39
0,27
Таким образом, достигаемый результат заключается в том, что способ позволяет интенсифицировать (усилить) расщепление белков экстрактами или тканью поджелудочной
железы.
Данный способ может найти широкое применение при производстве микробиологических питательных сред, содержащих гидролизаты белков.
3
BY 11529 C1 2009.02.28
Источники информации:
1. Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. - М.-Л.: Медгиз,
1950. - С. 51-53 (прототип).
2. Никандров В.Н., Пыжова Н.С., Шатило Н.Л. Протеолитическая и эндонуклеазная
активность штаммов Corinebacterium diphtheriae при росте на питательных средах сложного
состава. I. "Нейтральные" деполимеразы // Роль антропогенных и природных патогенов в
формировании инфекционных и неинфекционных болезней человека. Медико-экологические аспекты проблемы: Матер. междунар. конф. - Минск, 2002. - C. 326-342.
3. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. / Рунова В.Ф., Бендас Л.Г., Максимова Г.А. и др. - М., 1997. - C. 4-6.
4. Горнак И.М., Получанов B.C., Дуксина В.В., Коваленко С.П. Содержание незаменимых аминокислот в биомассе некоторых почвенных микроорганизмов // Микробы и их
метаболиты. - 1974. - C. 130-138.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
91 Кб
Теги
патент, by11529
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа