close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11615

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 11615
(13) C1
(19)
(46) 2009.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
A 61K 38/28
A 61K 47/30
A 61P 5/00
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
БИОАФФИННЫЙ СОРБЕНТ И СПОСОБ ИЗБИРАТЕЛЬНОГО
УДАЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ИНСУЛИНУ ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ
САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
(21) Номер заявки: a 20070741
(22) 2007.06.15
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Голубович Владимир Петрович; Горанов Виталий Анатольевич;
Евстигнеева Елена Борисовна; Чемитова Лилия Михайловна; Третьяк
Станислав Иванович; Макаревич Денис Александрович; Федоров Александр Александрович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт биоорганической химии Национальной
академии наук Беларуси" (BY)
(56) RU 2090186 C1, 1997.
БАКАЛИНСКАЯ О.Н. и др. Эфферентная терапия, 2005. - Т. 11. - № 1. - С. 33-39.
ГОЛУБОВИЧ В.П. и др. Биорегуляторы:
исследование и применение: Сб. науч. тр. Мн.: УП "Технопринт", 2004. - С. 200-209.
SU 1578137 A1, 1990.
МАКАРЕВИЧ Д.А. и др. II Международная конференция. Химия, структура
и функция биомолекул: Тез. док. - Мн.,
2006, PR-89.
МАСЛЮК А.Ф. и др. Укр. бioxiм. журн. 2003. - Т. 75. - № 3. - С. 33-44.
BY 11615 C1 2009.02.28
(57)
1. Биоаффинный сорбент для избирательного удаления антител к инсулину из плазмы
крови больных сахарным диабетом общей формулы
O
NH2
C
CH2
CH
,
CH2 CH
n
Insulin
m
где n - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,
равное 1-70, m - число участков цепи с лигандом, равное 50-10000.
2. Способ избирательного удаления антител к инсулину, при котором проводят гемосорбцию с использованием биоаффинного сорбента по п. 1.
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для избирательного удаления антител к инсулину из плазмы крови больных
сахарным диабетом.
BY 11615 C1 2009.02.28
Известен способ удаления антител к инсулину из плазмы крови больных сахарным
диабетом, который заключается в проведении процедуры плазмафереза. Однако клинический
эффект такой процедуры является непродолжительным (от нескольких дней до 6-8 месяцев), а снижение антител к инсулину неполным. Метод плазмафереза обладает следующими
недостатками: неселективностью - удаляются все компоненты плазмы; ослабление иммунного статуса пациентов из-за сопутствующего удаления антител, не являющихся цитотоксическими в отношении проводимой терапии; тяжело переносится пациентами и
имеется риск осложнений; требует использования плазмозамещающих растворов [1].
В патенте RU 2090186 С1, 1997 описан сорбент и его применение для извлечения антител к инсулину из биологических жидкостей [2] (прототип), представляющий собой гранулированный активированный уголь, содержащий инсулин, ковалентно связанный
(иммобилизованный) с функциональными группами углеродной матрицы в количестве
0,7-2,2 мас. Способ получения сорбента включает последовательную обработку окисленного гранулированного активированного угля растворами водорастворимого карбодиимида и белковой добавки-инсулина.
Заявленный сорбент (прототип) имеет ряд недостатков: способ получения весьма трудоемок (18-20 часов), количество мобилизованного инсулина и сорбционные характеристики матрицы должны удовлетворять заявленным интервалам. Матрица прототипа
обладает меньшей гемосовместимостью по сравнению с матрицей заявляемого сорбента
[3], гемосорбция на угольных сорбентах приводит к травмированию форменных элементов крови [4].
Задачей изобретения является новый гемосорбент для избирательного удаления антител к инсулину из крови больных сахарным диабетом. Поставленная задача достигается
использованием не известного ранее биоаффинного сорбента, где в качестве полимераматрицы используют полиакриламидный гель, а в качестве биоаффинного лиганда инсулин, при следующем соотношении компонентов (мас. %): полиакриламид - от 5 до 10, инсулин - от 0,1 до 0,4.
Сорбент имеет следующую химическую формулу:
O
NH2
C
CH2
,
CH2 CH
CH
n
Insulin
m
где n - число звеньев полиакриламидной цепи между центрами иммобилизации лигандов,
равное 1-70, m - число участков цепи с лигандом, равное 50-10000.
Выбор полиакриламидной матрицы обусловлен ее стабильностью, биологической
инертностью, возможностью введения лиганда на стадии полимеризации. Для превращения вводимого в качестве лиганда инсулина в мономер проводят его ацилирование акрилоилхлоридом. Полученное производное используют как мономер при сополимеризации
акриламида, N,N'-метиленбисакриламида в присутствии персульфата аммония и N,N,N,N'тетраметилендиамина в качестве инициаторов полимеризации.
Получение заявляемого сорбента приведено в примере 1.
Пример 1.
К раствору 0,1 г (0,017 ммоль) инсулина в 50 мл 4 % раствора бикарбоната натрия,
перемешиваемого в течение 15 мин, по каплям прибавляют 0,01 мл (0,13 ммоль) акрилоилхлорида и перемешивают 45 мин при пониженной температуре (4-7 °С). В реакционный
сосуд вносят 2,76 г (38,8 ммоль) акриламида и 0,185 г (1,2 ммоль) N,N'-метиленбисакриламида и перемешивают в течение 15 мин. После растворения компонентов к реакционной смеси прибавляют 0,16 г (0,7 ммоль) персульфата аммония и 0,08 мл (0,5 ммоль)
2
BY 11615 C1 2009.02.28
N,N,N',N'-тетраэтилметилендиамина. Через 1-3 мин образуется прозрачный гель. Гель оставляют на 30 мин, затем измельчают с использованием шприца с диаметром выходного
отверстия 2 мм. Опалесцирующие гранулы сперва многократно промывают дистиллированной водой (общий объем 0,5 л), а затем 0,9 % раствором NaCl (общий объем 0,3 л).
Отмытый гель хранят в 0,9 % растворе NaCl в холодильнике.
Заявляемый биоаффинный сорбент может быть использован для избирательного удаления антител к инсулину из крови больных сахарным диабетом при помощи гемосорбции.
Изучение эффективности заявляемого способа приведено в примере 2.
Пример 2.
При исследовании пациентов, страдающих сахарным диабетом и имеющих ряд осложнений основного заболевания, с помощью набора ORGENTEK (376-15) была отобрана
группа пациентов (n = 18) с повышенным содержанием антител к инсулину (более 0,3 µg/l)
(табл. 1). В 1 серии экспериментов была проведена одна, во 2-й - две, в 3-й - три процедуры гемосорбции с использованием специфического сорбента на основе инсулина. Сразу
после процедуры уровень антител к инсулину не превышал 0,05 µg/l. Через 3 месяца после
гемосорбции только в 2-х случаях уровень антител к инсулину незначительно превысил
0,2 µg/1 (табл. 2).
Таблица 1
Результаты калибровки тест-системы ORGENTEK (376-15).
Wells
1A-B
1C-D
1E-F
1G-H
2A-B
2C-D
2E-F
2G-H
Identity
Calibrator
Calibrator
Calibrator
Calibrator
Calibrator
Calibrator
Unknown
Unknown
A450
0,001
0,05
0,1
0,2
0,5
1,0
1
2
conc.
0,078/0,073
µg/l
µg/l
µg/l
µg/l
µg/l
1,383/1,363
0,336/0,339
µg/l
1
0,110/0,122
0,192/0,206
0,404/0,400
1,064/1,079
2,253/2,289
0,628
0,170
Таблица 2.
Результаты, полученные у пациентов после применения сорбции
Номер
Позиция
STA
STB
STC
STD
STE
STF
А
С
Е
G
А
С
Концентрации AT к инсу- Концентрации AT к инсулину
лину у пациентов с осу пациентов с осложнениями Контроль CV,
ложнениями диабета
%
диабета (µg/l). Через 3 месяца аликвот
после гемосорбции
(µg/l).
1 серия 2 серия 3 серия 1 серия
2 серия 3 серия
0,336
0,632
0,934
0,001
0,001
0,001
0,0
8
2,354
0,345
1,349
0,063
0,02
0,262
6,3
2
0,621
0,602
0,611
0,029
0,012
0,007
12,5
2
0,984
1,005
0,994
0,001
0,231
0,025
25
1
1,503
1,500
1,502
0,045
0,001
0,050
50
0
2,057
2,035
2,046
0,001
0,099
0,010
100
1
Полученные результаты свидетельствуют о выраженной клинической эффективности
разработанного способа. Заявляемый способ позволяет избирательно элиминировать из
крови антитела к инсулину, не изменяя общего уровня иммуноглобулинов крови; не ослабляет иммунный статус пациентов; не требует использования плазмозамещающих растворов; не влияет на показатели иммунитета, относящиеся к антиинфекционной и
антитуморогенной защите.
3
BY 11615 C1 2009.02.28
Источники информации:
1. Atkinson M.A. [et al.] Insulin antibodies as markers for Insulin dependent diabetes mellitus (IDD). Diabetes. - 1985. - № 34. - P. 926-930.
2. Патент РФ 2090186 C1, 1997.
3. Кирковский В.В. Детоксикационная терапия при перитоните. - Мн., 1997.
4. Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М. Эфферентные методы в медицине. - М., 1989. - С. 215.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
92 Кб
Теги
by11615, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа