close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11653

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 11653
(13) C1
(19)
A 61K 41/00
СРЕДСТВО ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА
ЛИМФОЦИТАРНОГО ХОРИОМЕНИНГИТА И ВИРУСА ЛАССА
(21) Номер заявки: a 20051038
(22) 2005.10.28
(43) 2007.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Научно-исследовательский
институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Богданова Наталья Леонидовна; Рустамова Лариса Михайловна; Петкевич Александр Сергеевич
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Министерства здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(56) МАШКОВСКИЙ М.Д. Лекарственные
средства. Т. 2. - Харьков: Торсинг,
1998. - С. 359-360.
BY 11653 C1 2009.02.28
(57)
Применение препарата "Малавит" для ингибирования размножения аренавируса, выбранного из вируса лимфоцитарного хориоменингита и вируса Ласcа, в культуре клеток
Vero.
Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для подавления размножения вирусов лимфоцитарного хориоменингита (ЛХМ) и Ласса в культуре
клеток.
Разработки способов лечения эффективных химио- и других препаратов для терапии и
профилактики инфекций, вызванных РНК-ми вирусами ЛХМ и Ласса (семейство
Arenaviridae), практически отсутствуют [1].
Заболевания, вызванные этими вирусами, высококонтагиозны (передаются воздушнокапельным путем), протекают на фоне высокой температуры, сопровождаются развитием
менингита, менингоэнцефалита, может сопутствовать артрит, миокардит и др., относятся
к малым иммунодефицитам. Заболевание, вызываемое вирусом Ласса, кроме того, отличается высокой летальностью, до 70 %. Инфекции, вызываемые вирусом ЛХМ, регистрируются на территории Республики Беларусь. Источником и резервуаром инфекций ЛХМ и
Ласса являются мыши [2-4].
Наиболее близким по достигаемому результату является способ лечения геморрагических лихорадок, вызываемых вирусами ЛХМ и Ласса, включающий введение лекарственного средства рибавирина, отечественным аналогом которого является рибамидил [5-6].
Однако недостатком известного способа лечения является то, что препарат рибамидил
является высокотоксичным. При применении препарата возможны боли в желудке, метеоризм, повышение уровня непрямого билирубина в крови, развитие катаральных явлений
желудочно-кишечного тракта. В живых организмах он вызывает подавление иммунитета,
BY 11653 C1 2009.02.28
вследствие чего, в частности, развивается хронический кандидоз. Наиболее частым побочным эффектом является гемолитическая анемия. Иногда возникают симптомы аутоиммунных заболеваний, артериальная гипотензия, лейкопения и тромбоцитопения.
Возможно тератогенное и эмбриотоксическое действие, уменьшение выработки и содержания тириотропного гормона, что ведет к нарушению функции щитовидной железы. Его
применение у пациентов до 18 лет не рекомендуется [7, 8].
Кроме того, существует особый спектр противопоказаний по применению рибамидила: острые заболевания печени (в том числе декомпенсированный цирроз, аутоиммунный
гепатит) и почек, первичный гипертиреоз и не поддающиеся лечению заболевания щитовидной железы, беременность, лактация, хроническая сердечная недостаточность IIБ-III
степени, инфаркт миокарда, анемия, а также тяжелая депрессия.
Задачей, которую решает данное изобретение, является разработка новых способов
лечения, эффективных в отношении вируса ЛХМ и Ласса.
Результат достигается применением препарата "Малавит" для ингибирования размножения аренавируса, выбранного из вируса лимфоцитарного хориоменингита и вируса Ласа, в культуре клеток Vero.
Малавит [9] - продукт синтеза достижений биоинформационной медицины, классической фармакологии и гомеопатии, приготовлен из экологически чистого сырья Алтая. В
его состав входят активные комплексы меди и серебра, минерал малахит и др.; кислоты молочная и др., муравьиный спирт, сахар (свекловичный, молочный); ионы серебра, кальция, калия, лития и др.; мумие традиционное и мумие белое (каменное масло); ладан, камедь лиственницы, камедь и смола кедра; почки березы и сосны, кора дуба; экстракты
корней и трав Алтайского региона (пион уклоняющийся, тысячелистник, шалфей лекарственный, бессмертник, мята перечная, календула, ромашка аптечная, аир болотный, чабрец; гомеопатические препараты аконит и бриония и др. - всего 37 компонентов) на
структурированной родниковой воде с низким содержанием спирта без консервантов и
красителей.
Препарат Малавит применяется для подавления роста синегнойной, кишечной и дифтерийной палочек, золотистого стафилококка, стрептококка А и В, цитобактера, сальмонелл, шигелл дизентерии, грибов рода кандида; обладает вирулицидным действием в
отношении вируса простого герпеса 1-го типа, вируса Коксаки ВЗ, везикулярного стоматита гриппа, в т.ч. при укусах энцефалитных клещей в качестве средства для наружного
применения.
Предложенное решение является новым, так как до сих пор не описан способ лечения
препаратом Малавит с помощью инъекций.
Сущность изобретения поясняется следующими примерами.
Пример 1.
Токсичность исследуемого препарата изучали на культуре клеток Vero, выращенных
на дне флаконов объемом 10 мл. Разведения Малавита готовили на среде Д/МЕМ с добавлением 2 % эмбриональной телячьей сыворотки в разведении 10-1, 10-2, 10-3 и 10-4, а также
исследовали цельный раствор препарата. Приготовленные разведения Малавита в объеме
1 мл вносили на отмытый от ростовой среды клеточный монослой. Цитопатическое действие препарата на культуру клеток оценивали через 96 ч по 4-х крестовой системе при
микроскопировании (увеличение 70х). Максимально переносимой концентрацией (МПК)
считали ½ разведения препарата, при которой не было обнаружено цитодеструктивных
изменений клеток. Таким образом, было установлено, что МПК исследуемого препарата
составляет 10-1.
Пример 2.
Двухсуточную культуру клеток Vero заражали вирусом Ласса с множественностью
инфекции 0,1-0,01 бляшкообразующих единиц на клетку (БОЕ/кл.). После адсорбции вируса на культуре клеток вносили вышеописанный препарат в разведениях 10-1, 10-2 и 10-3.
2
BY 11653 C1 2009.02.28
После 72-часовой инкубации отбирали пробы и определяли инфекционную активность
вируса методом редукции бляшек под агарозным покрытием [10, 11].
Контролем служили культуры клеток, зараженные вирусом Ласса в аналогичных условиях, но без препарата в культуральной среде. Результат оценивали по значению химиотерапевтического индекса (ХТИ), который равен отношению МПК к минимально
активной концентрации (МАК), эффект которой находится в диапазоне 1,5-1,7 lg подавления размножения вируса. Установлено, что препарат Малавит обладает выраженным ингибирующим действием в отношении аренавирусов ЛХМ и Ласса (табл. 1).
Как видно из табл. 1, при применении препарата Малавит наблюдается полное подавление размножения вируса в разведениях 10-1, 10-2, в разведении 10-3 снижение инфекционного титра составило 4,8 lg (вирус Ласса) и 4,3 lg (вирус ЛХМ). Таким образом,
максимально активное разведение препарата - 10-1, а минимально активное - 10-3. ХТИ
препарата Малавит равен 100. В то же время, прототип имеет ХТИ, равный 8.
Таблица 1
Ингибирование размножения вирусов ЛХМ и Ласса в присутствии
препарата Малавит в культуре клеток Vero
Титр вируса lg Снижение титра виХТИ
Доза
)
Препарат
БОЕ/кл*
руса lg БОЕ/кл
МПК/МАК
препарата
ЛХМ
Ласса
ЛХМ
Ласса
ЛХМ Ласса
Вирус
0
5,7
6,0
Вирус + Рибамидил 200 мкг/мл
2,2
2,3
3,5
3,7
100 мкг/мл
3,3
3,2
2,4
2,8
8
8
50 мкг/мл
4,0
4,1
1,7
1,9
25 мкг/мл
4,2
4,5
1,5
1,5
12,5 мкг/мл
5,5
5,9
0,2
0,1
Вирус + Малавит
10-1
0
0
5,7
6,0
-2
10
0
0
5,7
6,0
100
100
10-3
1,4
1,2
4,3
4,8
10-4
5,3
5,3
0,5
0,7
Примечание: *) БОЕ/мл - бляшкообразующие единицы.
Пример 3.
Исследования препаратов в экспериментах in vivo были выполнены на беспородных белых мышах массой 8-10 г. Животных заражали интрацеребрально в дозе
1000 БОЕ/мышь, что составляло 10 LD50, в объеме 0,03 мл. Это обеспечивало 100 % гибель контрольных животных. Препарат разводили на бидистиллированной воде и в разведении 10-2 вводили по схеме: за 24 ч, затем за 1 ч до заражения, далее через 24, 48, 72, 96 ч
и 5-8 сутки после заражения. Противовирусную активность препарата оценивали по увеличению выживаемости животных, средней продолжительности жизни (СПЖ), удлинению срока жизни (УСЖ) по сравнению с контрольной группой, которая не получала
препарат.
В результате проведенных испытаний было установлено, что исследуемый препарат
защищал от гибели животных при инфекции Ласса на 57 %, а ЛХМ-инфекции - на 60 %;
СПЖ составляла 12,5 дней (вирус Ласса) и 12 дней (вирус ЛХМ); УСЖ было 4,5 суток
(вирус Ласса) и 4,0 суток (вирус ЛХМ) по сравнению с контролем инфицированных животных, не получавших лечения.
При применении рибамидила в концентрации 50 мг/кг по той же схеме выживаемость
мышей при инфекции Ласса составляла 35 %, инфекции ЛХМ - 33 %; СПЖ - 9,5 дней при
инфекции Ласса и 9,0 дней при инфекции ЛХМ, УСЖ - 1,5 дня при инфекции вируса Ласса и 1,0 дня - при ЛХМ по сравнению с контрольными животными, не получавшими рибамидил (табл. 2).
3
BY 11653 C1 2009.02.28
Таблица 2
Влияние препаратов на выживаемость белых беспородных мышей,
зараженных вирусами ЛХМ и Ласса
СмертВирус
Препарат
Защита, % СПЖ (сутки) УСЖ (сутки)
ность, %
Ласса
Контроль вируса
100
7,0
Вирус + Рибамидил
65
35
8,5
1,5
Вирус + Малавит
43
57
11,5
4,5
ЛХМ
Контроль вируса
100
8,0
Вирус + Рибамидил
67
33
9,0
1,0
Вирус + Малавит
40
60
12,0
4,0
Таким образом, противовирусная активность предложенного препарата значительно
превосходит таковую рибамидила.
Источники информации:
1. Pfau C.J., Bergold J.H., Casals J., et al. Arenaviruses // Intervirology. - 1974. - № 4. P. 207-213.
2. Букринская А.Г. Вирусология. - M.: Медицина, 1986. - С. 302-307.
3. Jarling P.B., Peters C.J. // Arch. Pathol. Lab. Med. - 1992. - Vol. 116. - P. 486-488.
4. McCormik J.B., Tomorol O., Masldl A. et al. Lassa fever in the United States and Nigeria
In: VIIIth Int. Congr. Virology. - Berlin, 1990. - P. 70-114.
5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Харьков: Торсинг, 1998. Т. 2. - С. 359360.
6. Peters C.J., Jahrling Р.В., Liu С.Т., et al. Development of therapeutic measures. Arenaviruses: Biology and Immunotherapy. Experimental Studies of Arenaviral Hemorrhagic Fevers. Berlin, 1987. - P. 47-51.
7. Зудин Б.И., Сабынин В.М., Богданова Н.Л., Капитулец С.П., Рустамова Л.М., Петкевич А.С. Влияние химио- и иммуномодулирующих препаратов на экспериментальный
лимфоцитарный хориоменингит. Современные проблемы инфекционной патологии человека. Эпидемиология, клиника, микробиология, вирусология и иммунология. - Мн., 1998. С. 580.
8. Sherhen E.L., Jones D.E., Peters C.J. et al. Ribavirin treatment of toga-, arena- and bunya
viruses infection in subhuman primates and other animal species. Ribavirin Broad Spectrum
Agent / Ed. R.A. Smith. - New York, 1980. Vol. 4. - P. 170-174.
9. Аннотация по применению Малавита. Сертификат соответствия: № РОСС
RU.АЕ96.В00010 от 27.08.2003; гигиенический сертификат департамента ГСЭС МЗ РФ:
№ 77.99.17 915.Д.002649.05.01 от 17.05.2001.
10. Porterfield I.S., Allison S.A. Studies with Pox viruses by an improved plaque technique
// Virology. - 1960. -№ 10. - P. 233-244.
11. Пшеничнов В.А., Семенов Б.Ф., Зазеров Е.Г. Стандартизация методов вирусологических исследований. - М., 1974. - С. 123-129.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
97 Кб
Теги
by11653, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа