close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11671

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.02.28
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 35/66
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИММУНОКОРРЕКЦИИ
ИЗ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНЫХ БАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: a 20070348
(22) 2007.04.04
(43) 2007.10.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебская ордена "Знак Почета"
государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(72) Авторы: Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович;
Вербицкий Анатолий Анатольевич;
Зайцева Виктория Владимировна
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебская ордена "Знак
Почета" государственная академия
ветеринарной медицины" (BY)
BY 11671 C1 2009.02.28
BY (11) 11671
(13) C1
(19)
(56) BY 7787 C1, 2006.
BY 4371 C1, 2002.
ЗАЙЦЕВА А.В. и др. Сельское хозяйство - проблемы и перспективы. Тезисы
Международной научно-практической
студенческой конференции. - Гродно,
2005. Т. 3. - С. 191-192.
ВЕРБИЦКИЙ А.А. и др. Ученые записки Учреждения образования "Витебская
ордена "Знак Почета" государственная
академия ветеринарной медицины",
2006. Т. 42. Вып. 1. Ч. 2. - С. 6-9.
SU 592333, 1978.
RU 2051969 C1, 1996.
RU 2112531 C1, 1998.
SU 1630830 A1, 1991.
(57)
Способ получения препарата для иммунокоррекции из сальмонеллезных бактерий,
включающий выращивание бактерий, отделение биомассы, экстрагирование из нее фракции, содержащей липополисахариды и полипептиды, центрифугирование полученного
экстракта и смешивание центрифугата с тиосульфатом натрия, отличающийся тем, что
экстрагирование осуществляют 0,1-0,4 %-ным раствором димера этиленимина при температуре 90-120 °С в течение 30-120 мин, центрифугат и тиосульфат натрия смешивают в
массовом соотношении (50-100): (1-1,5) и фильтруют через мембраны 300 КД и 5 КД.
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, а именно к способу получения
иммуномодулятора из соматических антигенов сальмонеллезных бактерий.
Известны способы получения иммуномодулирующих препаратов из компонентов бактериальных клеток:
детоксицированный липополисахарид из нейсерий [5];
липополисахарид из биомассы авирулентного штамма S. shigella sonnei выделяют водно-фенольной экстракцией при температуре 65 °С по способу О. Westphal, К. Jann [11] и
очищают гельфильтрацией на сефадексе G-200 [7];
липополисахарид получают путем экстракции бактерий трихлоруксусной кислотой [8];
липополисахарид из биомассы В. pertussis штамма 475 выделяют по методу О. Westphal et all. [10] и очищают путем трехкратного пересаждения и дальнейшего центрифугирования при 15000 д в течение 2 ч [9];
липополисахарид из биомассы пуллорных бактерий Salmonellum pullorum gallinarum
штамма 24 КСТ [2, 3] выделяют путем экстракции биомассы бактерий 0,5 %-ным раство-
BY 11671 C1 2009.02.28
ром аммиака при температуре 80 °С в течение 60 мин и последующей обработки экстракта
формалинизированными эритроцитами в соотношении 1: 1 [4];
липополисахарид из биомассы сальмонелл обрабатывают ацетоном, обрабатывают
0,5-1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 90-105 °С в течение 60-100 мин, полученный экстракт центрифугируют и смешивают с тиосульфатом натрия в соотношении
ингредиентов (вес. %) 100:1-200:1 [6].
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
способ получения биологически активного препарата из сальмонелла тифи [1].
Этот препарат представляет собой полисахаридную фракцию соматического О-антигена бактерий брюшного тифа, который получают путем депротеинизации фенольного
антигена с последующим удалением липида А при гидролизе в ацетоне.
Однако препарат, полученный из биомассы сальмонелла тифи, обладает высокой реактогенностью и низкой биологической активностью.
Задача изобретения - увеличение биологической активности целевого продукта и снижение его реактогенности.
Поставленная цель достигается тем, что биомассу сальмонелл экстрагируют 0,1-0,4 %ным раствором димера этиленимина (ДЭИ).
Для нейтрализации ДЭИ к экстракту добавляют в соотношении (50-100): (1-1,5) тиосульфат натрия. Экстракт инкубируют в течение 30-120 мин, центрифугируют, очищают и
концентрируют на мембранах соответственно 300 КД и 5 КД.
Сущность изобретения. Способ получения препарата для иммунокоррекции из сальмонеллезных бактерий, включающий выращивание бактерий, отделение биомассы, экстрагирование из нее фракции, содержащей липополисахариды и полипептиды, центрифугирование полученного экстракта и смешивание центрифугата с тиосульфатом натрия,
отличающийся тем, что экстрагирование осуществляют 0,1-0,4 %-ным раствором димера
этиленимина при температуре 90-120 °С в течение 30-120 мин, центрифугат и тиосульфат
натрия смешивают в массовом соотношении (50-100): (1-1,5) и фильтруют через мембраны 300 КД и 5 КД.
Пример 1.
Сальмонеллезные бактерии выращивают на питательной среде, содержащей в качестве белковой основы гидролизат мясокостной муки или мяса и пептона, содержащей биологически активные вещества - нуклеинат натрия или экстракт дрожжевой и левамизол.
Выращенную баксуспензию сальмонеллезных бактерий отделяют от культуральной
жидкости путем центрифугирования. Биомассу, отделенную от культуральной жидкости,
ресуспендируют в 0,05 %-ном растворе ДЭИ. Гидролиз ведут при температуре 120 °С в
течение 120 мин, полученный экстракт центрифугируют, смешивают с тиосульфатом натрия
в соотношении ингредиентов (мас. %) 100:1,5 и фильтруют через мембраны 300 КД и 5 КД.
Препарат при внутрибрюшинном введении в дозе 0,5 см3 не вызывал гибели белых
мышей. Выход препарата составлял к весу сухой биомассы бактерий - 4,6 %.
Для контроля биологической активности препарат дважды вводили подкожно в дозе
0,1 см3/гол белым мышам за 3 суток и через 3 суток после инфицирования рожистыми
бактериями матрикса Конева в дозе 2 LD50. Контрольным мышам перед инфицированием
препарат не применяли. Наблюдение вели в течение 12 суток после инфицирования животных.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 26,6 % белых мышей.
Пример 2.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл ресуспендировали в 0,1 %-ном растворе ДЭИ и инкубировали в течение 60 мин.
Выход препарата составил 7,4 %.
Введение препарата белым мышам обеспечивало выживаемость 50,0 % лабораторных
животных, инфицированных рожистыми бактериями матрикса Конева в дозе 2 LD50.
2
BY 11671 C1 2009.02.28
Пример 3.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,4 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 120 мин.
Выход препарата составил 8,8 %.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 60,0 % белых мышей, инфицированных рожистыми бактериями матрикса Конева в дозе 2 LD50.
Пример 4.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,5 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 100 мин.
Выход препарата составил 9,4 %.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 43,3 % белых мышей, инфицированных рожистыми бактериями матрикса Конева в дозе 2 LD50.
Пример 5.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 105 °С в течение 60 мин.
Выход препарата составил 8,6 %.
Введение препарата способствовало выживанию 60,0 % инфицированных лабораторных животных.
Пример 6.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,3 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 30 мин.
Выход препарата составил 8,5 %.
Введение препарата способствовало выживанию 56,6 % инфицированных лабораторных животных.
Пример 7.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 20 мин.
Выход препарата составил 7,2 %.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 43,3 % инфицированных мышей.
Пример 8.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 60 мин. Экстракт смешивали с
тиосульфатом натрия в соотношении 50:2.
Выход препарата составил 8,7 %.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 60,0 % инфицированных животных.
Пример 9.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 105 °С в течение 60 мин. Экстракт смешивали с
тиосульфатом натрия в соотношении 100:3.
Выход препарата составил 8,5 %.
Введение препарата обеспечивало выживаемость 60,0 % инфицированных животных.
Пример 10.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 100 мин. Экстракт смешивали
с тиосульфатом натрия в соотношении 100:1.
Выход препарата составил 8,7 %.
Препарат был реактогенным, так как при введении в дозе 0,5 см3 внутрибрюшинно
вызывал гибель 40 % белых мышей.
Пример 11.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,2 %-ном растворе ДЭИ при температуре 80 °С в течение 60 мин.
Выход препарата составил 6,3 %.
Введение препарата способствовало выживанию 43,3 % инфицированных животных.
3
BY 11671 C1 2009.02.28
Пример 12.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,3 %-ном растворе ДЭИ при температуре 132 °С в течение 60 мин.
Выход препарата составил 6,9 %.
Введение препарата способствовало выживанию 36,7 % инфицированных животных.
Пример 13.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инкубировали в
0,3 %-ном растворе ДЭИ при температуре 120 °С в течение 150 мин.
Выход препарата составил 8,4 %.
Введение препарата способствовало выживанию 40,0 % инфицированных животных.
Из полученных данных следует, что при изготовлении препарата биомассу сальмонелл
следует ресуспендировать в 0,1-0,4 %-ном растворе ДЭИ и инкубировать при температуре
90-120 °С в течение 30-120 мин. Экстракт следует центрифугировать, а полученный продукт смешивать с тиосульфатом натрия в соотношении (50-100): (1-1,5).
Выход препарата при вышеуказанных режимах составляет 7,4-8,8 %. Полученный препарат защищает 50-60 % животных, инфицированных 2 LD50 рожистыми бактериями матрикса Конева.
При смешивании центрифугата с тиосульфатом натрия в соотношении 100:1 повышается реактогенность препарата.
Добавление более высокой концентрации тиосульфата натрия в центрифугат не целесообразно.
При других технологических параметрах обработки биомассы сальмонелл препарат
обеспечивает защиту 36,7-43,3 % инфицированных животных.
Источники информации:
1. Лазарева Д.Н. Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М: Медицина, 1985. - С. 15.
2. Вербицкий А.А. и др. Ученые записки Учреждения образования "Витебская ордена
"Знак Почета" государственная академия ветеринарной медицины", 2006. - Т. 42. Вып. 1.
Ч. 2. - С. 6-9.
3. Зайцева А.В. и др. Сельское хозяйство - проблемы и перспективы. Тезисы Международной научно-практической студенческой конференции. - Гродно, 2005, Т. 3. - С. 191-192.
4. Заявка на изобретение 19980808, 1999.
5. Дельвич А.А. и др. Протективная активность детоксицированного липополисахарида
Neiseria meningitidis серогруппы А в опытах in vivo // Микробиология. - 1989. - № 5. - С. 70.
6. Патент РБ 7787, МПК А 61K 35/74, 39/112, 2006.
7. Татаренко Т.М., Дальвадяну С.М., Бахрах Е.Э. Проблемы особоопасных инфекций. Саратов, 1972. Вып. 3 (25). - С. 93-98.
8. Boivin A., Vesrobcani L. // C.R. Sos. Biol. - 1993. - Vol. 144. - P. 307-310.
9. Dalla Venezia N., Minka S., Brunetean M. Et all. // Europ. J. Biochem. - 1985. -Vol. 151. P. 399-404.
10. Staub A.M. // Meth. Carbohydr. Chem. - 1965. - Vol. 5. - P. 92-95.
11. Westphal O., Jann K. // Meth. Carbohydr. Chem. - 1965. - Vol. 5. - P. 83-91.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
81 Кб
Теги
патент, by11671
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа