close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY11798

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.04.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 12N 5/08
СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ГЛИОМЫ С6 В УСЛОВИЯХ
ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА
(21) Номер заявки: a 20060677
(22) 2006.07.06
(43) 2008.02.28
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Лукашевич Надежда Владимировна; Лукашевич Владимир
Сергеевич (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
BY 11798 C1 2009.04.30
BY (11) 11798
(13) C1
(19)
(56) Жук О.Н. и др. Функциональная нейроморфология. Фундаментальные и прикладные исследования. - Мн., 2001. C. 100-102.
Гронская Р.И. и др. Функциональная
нейроморфология. Фундаментальные
и прикладные исследования. - Мн.,
2001. - C. 77-79.
Володкович О.И. и др. Функциональная нейроморфология. Фундаментальные и прикладные исследования. Мн., 2001. - C. 66-69.
Лукашевич И.Б. и др. Тезисы докладов
X съезда Белорусского общества физиологов. - Мн., 2001. - C. 93-94.
(57)
Способ повышения жизнеспособности культивируемых клеток глиомы С6 в условиях
оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода, включающий добавление в среду
культивирования биологически активной субстанции, отличающийся тем, что в качестве
биологически активной субстанции используют плазминоген, причем его добавляют до
конечной концентрации 10-7 М.
Изобретение относится к физиологии к разделу культивирования клеточных культур.
Известен способ культивирования перевиваемых клеточных культур, заключающийся в
том, что суспензию клеток плотностью 104 - 105 на 1-10 мл высевают на пластиковые или
стеклянные со специальным покрытием чашки Петри в синтетической питательной среде,
содержащей 10-15 % телячьей, бычьей или лошадиной сыворотки или их смеси и культивируют при 37 °С в атмосфере 5 % CO2 и 95 % воздуха. Через 3 суток количество клеток
возрастает в 3-5 раз. Культивирование со сменой среды 1 раз в 3 суток продолжают до получения необходимого количества клеток. Для проведения исследований по изучению
влияния различных факторов на культивируемые клетки культуральную среду меняют на
такую же, но содержащую 0,5 % сыворотки (истощенная культуральная среда) и используют для экспериментов (1) - аналог.
Известен способ культивирования, при котором добавление в культуральную среду
H2O2 вызывает дозозависимое повреждение клеток глиомы С6, вплоть до гибели, с изменениями ряда биохимических показателей. Предварительное добавление в культуральную
среду эстрогена в концентрации 4×10-6 М предотвращало гибель клеток и возвращало значения ряда биохимических показателей к норме (2) - прототип.
BY 11798 C1 2009.04.30
Общими признаками заявляемого способа и прототипа являются культивирование
клеток глиомы С6 в синтетической питательной среде, как указывалось выше, нанесение
повреждающего воздействия перекисью водорода и помещение клеток в среду, содержащую биологически активную субстанцию.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего повысить
жизнеспособность культивируемых клеток глиомы С6 более специфически, т.е. при более
низких концентрациях активной биологической субстанции в условиях оксидативного
стресса, вызванного добавлением перекиси водорода.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ повышения жизнеспособности культивируемых клеток глиомы С6 в условиях оксидативного стресса, вызванного
перекисью водорода, включающий добавление в среду культивирования биологически активной субстанции, при этом в качестве биологически активной субстанции используют
плазминоген, причем его добавляют в конечной концентрации 10-7м.
Плазминоген - гликопротеин с ММ 85 кДа - является одним из основных компонентов
системы экстраклеточного протеолиза. Он секретируется и захватывается некоторыми
клетками, инициируя каскад пострецепторных событий, приводящих к усилению клеточного деления. Этим можно объяснить его пролиферативное действие в концентрации 10-10 М,
то есть количестве, необходимом для связывания с рецептором. При концентрации 10-7 М
его действие особенно выражено. Это связано с тем, что на эффект рецепторного связывания
накладывается способность плазминогена изменять свойства плазматической мембраны.
Пример: суспензию клеток плотностью 104-105 на 1-10 мл высевают на пластиковые или
стеклянные со специальным покрытием чашки Петри в модифицированной среде Игла
(DMEM) и культивируют при 37 °С атмосфере 5 % CO2 и 95 % воздуха. Через 3 суток количество клеток возрастает в 3-5 раз. Культивирование со сменой среды 1 раз в 3 суток продолжают до получения необходимого количества клеток. Для проведения исследований
культуральную среду меняют на истощенную и содержащую 0,1 - 1×10-3 М перекиси водорода. Во второй серии перед добавлением перекиси в культуральную среду вносят 10-7 М
плазминогена.
Следует отметить, что как концентрация эстрогена - женского полового гормона, неспецифического модулятора клеточной активности - по способу-прототипу составляла
4×10-6 М, т.е. как минимум в 40 раз выше.
Пролиферативную активность клеток оценивают по уровню биосинтеза ДНК, РНК и
белка (3), жизнеспособность клеток - микроскопически (4).
Перекись водорода в концентрациях 0,1 - 1×10-3 М вызывает дозозависимую гибель
или повреждение клеток, выражающуюся в изменении веретенообразной формы на полигональную или округлую с появлением апоптотических телец. Наблюдалось также дозозависимое падение уровней ДНК, РНК и белка. При добавлении в среду плазминогена
наблюдают значительно менее выраженные морфологические изменения. При сохранении
дозозависимого угнетения перекисью биосинтеза макромолекул плазминоген, уже при концентрации H2O2 0,3×10-3М, вызывает возврат уровней ДНК и РНК к контрольным величинам.
Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается
в протекторном действии плазминогена на морфофункциональное состояние клеток глиомы С6 в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода.
Источники информации:
1. Banker G., Goslin K. Culturing Nerve Cells. A Bradford Book. The MIT Press. Cambridge. Massachusetts, 1991. - P. 207-213.
2. Sur P, Sribnick E.A, Wingrave J.M., et al. Estrogen attenuates oxidative stress-induced
apoptosis in C6 glial cells. Brain Res., 2003 May 9;971(2):178-88.
3. Gery L., Gershon R.K., Waksman B.H. J. Exp. Med., 1972. - Vol. 136. - P.128.
4. Адамс Р. Методы культуры клеток для биохимиков. - М.: Мир, 1983. - С. 93-94.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
2
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
73 Кб
Теги
by11798, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа