close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12171

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61D 19/00
СОСТАВ ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ И СПОСОБ
КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ СПЕРМЫ БЫКА-ПРОИЗВОДИТЕЛЯ
(21) Номер заявки: a 20070582
(22) 2007.05.18
(43) 2008.12.30
(71) Заявитель: Республиканское унитарное предприятие "Научно-практический центр Национальной академии
наук Беларуси по животноводству"
(BY)
(72) Авторы: Шейко Иван Павлович; Будевич Александр Иванович; Медведев Григорий Федорович; Гуминская Елена Юрьевна (BY)
BY 12171 C1 2009.08.30
BY (11) 12171
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Республиканское
унитарное предприятие "Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству" (BY)
(56) JP 10007501 A, 1998.
SU 1540817 A1, 1990.
WO 2001037655 A1, 2001.
RU 2198622 C2, 2003.
RU 2115386 C1, 1998.
SU 1806692 A1, 1993.
SU 1727816 A1, 1992.
SU 1706608 A1, 1992.
SU 1563690 A1, 1990.
(57)
1. Состав для криоконсервирования спермы быка-производителя, отличающийся тем,
что содержит раствор антибиотиков, фракцию А и фракцию Б, взятые из расчета на 1 мл
спермы в следующих количествах: раствор антибиотиков - 0,02 мл; фракция А - до получения концентрации 200 миллионов сперматозоидов в 1 мл и фракция Б - в объеме, равном
объему фракции А, причем раствор антибиотиков содержит тилозина 0,5 г, гентамицина
2,5 г, линко-спектина от 1,5 до 3,0 г, бидистиллированной воды от 95,5 до 94,0 г; фракция А
содержит цитрата натрия 3-замещенного пищевого 2-водного 2,9 г, лактозы химически
чистой 3,58 г, желтка куриного яйца 25 г, бидистиллированной воды - 97,1 г; фракция Б
содержит цитрата натрия 3-замещенного пищевого 2-водного 2,4 г, лактозы химически чистой 3,58 г, желтка куриного яйца 25 г, глицерина 17,5 г, бидистиллированной воды - 82,5 г.
2. Способ криоконсервирования спермы быка-производителя, отличающийся тем,
что используют состав по п. 1, причем сначала к 1 мл спермы добавляют 0,02 мл раствора
антибиотиков, выдерживают 5 мин при 30 °С, затем добавляют нагретую до 30 °С фракцию А до получения концентрации 200 миллионов сперматозоидов в 1 мл, охлаждают в
течение 2 ч до 5 °С и добавляют охлажденную до 5 °С фракцию Б, в объеме, равном объему фракции А, причем вносят фракцию Б тремя равными частями через 10-15 мин, разбавленную сперму выдерживают 4 ч при 5 °С, после чего замораживают.
Изобретение относится к животноводству, в частности к искусственному осеменению
сельскохозяйственных животных.
Известны среды ЛГЖ и ЛГЦЖ для криоконсервирования спермы быков-производителей,
включающие: лактозу, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный, глицерин,
желток куриного яйца, спермосан-3 (или полимексин-М), воду бидистиллированную. Осмотическое давление данных сред составляет 285-300 миллиосмолей, кислотность 6,8-6,9
BY 12171 C1 2009.08.30
[инструкция по взятию, оценке и замораживанию спермы быков-производителей на племпредприятиях].
Известна среда Сан-Лакт для замораживания спермы барана, содержащая лактозу,
желток куриного яйца, глицерин и дистиллированную воду, причем среда дополнительно
содержит лактобрил [патент РФ № 2115386].
Известна синтетическая среда для разбавления и замораживания спермы баранов, которая дополнительно содержит костный клей [патент РФ 2198622].
Недостатком данных сред является снижение подвижности спермиев, увеличение деструкции их акросомного аппарата после оттаивания и патологических форм и, как следствие,
снижение оплодотворяющей способности спермиев и показателя стельности животных
при искусственном осеменении.
Известен способ криоконсервации спермы животных, включающий разбавление спермы средой, содержащей лактозу, сахарозу, желток куриных яиц, глицерин, спермрсан-3 и
дистиллированную воду. При этом разбавленную сперму охлаждают в холодильнике
до +4 °С в течение 3-5 часов, а затем замораживают на охлажденной в парах азота и обработанной метилаэросилом фторопластовой пластине. Для обработки фторопластовой пластины
применяют различное количество метилаэросила: 1 г, 3 г и 5 г [а.с. СССР 1218518].
Однако в данном способе применяются дорогостоящие препараты, что нежелательно.
Задача изобретения - повышение качества спермы быков-производителей после ее замораживания-оттаивания и показателя оплодотворяемости животных после искусственного осеменения с наименьшими затратами.
Сущность изобретения.
1. Состав для криоконсервирования спермы быка-производителя, который содержит
раствор антибиотиков, фракцию А и фракцию Б, взятые из расчета на 1 мл спермы в следующих количествах: раствор антибиотиков - 0,02 мл; фракция А - до получения концентрации 200 миллионов сперматозоидов в 1 мл и фракция Б - в объеме, равном объему
фракции А, причем раствор антибиотиков содержит тилозина 0,5 г, гентамицина 2,5 г,
линко-спектина от 1,5 до 3,0 г, бидистиллированной воды от 95,5 до 94,0 г; фракция А содержит цитрата натрия 3-замещенного пищевого 2-водного 2,9 г, лактозы химически чистой 3,58 г, желтка куриного яйца 25 г, бидистиллированной воды -97,1 г; фракция Б содержит цитрата натрия 3-замещенного пищевого 2-водного 2,4 г, лактозы химически чистой
3,58 г, желтка куриного яйца 25 г, глицерина 17,5 г, бидистиллированной воды - 82,5 г.
2. Способ криоконсервирования спермы быка-производителя, в котором используют
состав по п. 1, причем сначала к 1 мл спермы добавляют 0,02 мл антибиотиков, выдерживают 5 мин при 30 °С, затем добавляют нагретую до 30 °С фракцию А до получения концентрации 200 миллионов сперматозоидов в 1 мл, охлаждают в течение 2 ч до 5 °С и
добавляют охлажденную до 5 °С фракцию Б в объеме, равном объему фракции А, причем
вносят фракцию Б тремя равными частями через 10-15 мин, разбавленную сперму выдерживают 4 ч при 5 °С, после чего замораживают.
Состав для криоконсервирования спермы быка-производителя готовится следующим
образом. Для получения фракции "А" готовят цитратный буфер на бидистиллированной
воде: 2,9 г натрия цитрата натрия вносят в мерную колбу вместимостью 100 г и добавляют
50-60 г воды, перемешивают до полного растворения с окончательным добавлением воды
до метки. Далее отмеряют 3,58 г лактозы, 25 г желтка куриного яйца, вносят в раствор
цитрата натрия и перемешивают для получения однородной массы раствора. Раствор подогревают до +30 °С.
Для получения фракции Б состава для криоконсервирования готовят цитратный буфер
на бидистиллированной воде: 2,4 г натрия цитрата натрия вносится в колбу и добавляется
82,5 г воды, перемешивают до полного растворения. Отмеряют 3,58 г лактозы, 25 г желтка
куриного яйца, 17,5 г глицерина, вносят в раствор цитрата натрия и перемешивают для
получения однородной массы раствора. Раствор охлаждают до +5 °С.
2
BY 12171 C1 2009.08.30
Далее, в полученную свежую сперму вносят смесь антибиотиков, в состав которой
входят: тилозин - 0,5 г, гентамицин - 2,5 г, линко/спектин - 1,5-3,0 г, бидистиллированная
вода - 95,5-94,0 г. Данный состав разбавляют фракциями А и Б нового состава.
Способ криоконсервирования спермы быка осуществляют следующим образом. В спермоприемник вносят пипеточным дозатором смесь антибиотиков в количестве 0,02 мл
раствора на каждый миллилитр спермы, выдерживают 5 минут при 30 °С и оценивают
подвижность сперматозоидов. Производят разбавление спермы фракцией А состава, для
чего состав приливают аккуратно и медленно в спермоприемник (или по стенкам стеклянного смесителя со спермой) во избежание сильных отрицательных осмотических явлений
из расчета, чтобы объем спермы и состава был наполовину запланированного объема разбавленной спермы (с учетом получения в одном миллилитре 200 миллионов сперматозоидов). Температура спермы и состава должна быть +30 °С.
Разбавленную фракцией А сперму помещают в холодильник, где она охлаждается в
течение 2 ч до 5 °С. Для того чтобы охлаждение проходило равномерно, колбу с разбавленной спермой помещают в стакан с водой, температура которой 30 °С. Фракцию Б состава также помещают в холодильник, где она охлаждается до 5 °С.
В разбавленную фракцией А сперму вносят охлажденную фракцию Б в соотношении
1:1, при этом фракцию Б вносят не сразу, а делят на три равные части и прибавляют через
10-15-минутные интервалы медленно и постепенно. Этот этап разбавления производится в
холодильнике при температуре 5 °С на протяжении 30-45 мин. После финального разбавления в 1 мл разбавленной спермы должно содержаться 100 млн сперматозоидов.
После завершения разбавления сперму расфасовывают в пайетты, которые размещают
в планшеты. В каждой пайетте содержится 25 млн. сперматозоидов. Пайетты помещают в
холодильник, выдерживают при температуре 5 °С в течение 4 ч, замораживают и хранят в
жидком азоте.
После этого оттаивают и проверяют на подвижность, выживаемость, наличие патологических форм и повреждение акросомы и осеменяют животных общепринятыми методами.
Пример.
Для проверки эффективности способа был проведен сравнительный опыт по использованию двухфракционной (опыт) и стандартной (контроль) сред для замораживания
спермы быков-производителей (табл. 1).
Таблица 1
Показатели
Замороженно-оттаянная сперма
Подвижность сперматозоидов, баллов, контроль
опыт
Выживаемость спустя 5 ч, баллов, контроль
опыт
Патологические формы (контроль), всего %
в т. ч. первичные
вторичные
третичные
Патологические формы (опыт), всего %
в т. ч. первичные
вторичные
третичные
Сперматозоидов с повреждениями акросомы, %
контроль
опыт
3
х±m
3,9 ± 0,1
4,0 ± 0,0
1,7 ± 0,2
2,6 ± 0,2*
14,2 ± 0,6
1,5 ± 0,1
3,4 ± 0,2
9,1 ± 0,4
10,7 ± 0,7*
1,1 ± 0,1*
2,7 ± 0,2*
6,9 ± 0,4*
8,1 ± 0,6
6,3 ± 0,3*
BY 12171 C1 2009.08.30
Подвижность сперматозоидов после выдержки спермы в течение 5 ч при температуре
38 °С при использовании стандартной среды снизилась до 1,7±0,2 баллов, а новой среды только до 2,6±0,2 баллов. Различие по этому показателю достоверно (Р<0,05).
Различия между опытными и контрольными образцами спермы по общему проценту
патологических форм сперматозоидов, а также по частоте первичных, вторичных и третичных нарушений существенные (Р<0,05) в пользу новой среды.
В образцах спермы с испытуемой средой меньше выявлялось и сперматозоидов с повреждениями акросомы. Различие по этому показателю также существенное (Р<0,05).
В табл. 2 приведены данные по оплодотворяемости животных, осемененных спермой,
замороженной новым способом.
Таблица 2
Показатели
Первое осеменение, всего
в т.ч. плодотворное
%
Повторное осеменение, всего
в т.ч. плодотворное
%
Оплодотворилось в среднем
Третье осеменение, всего
в т. ч. плодотворное
Всего проведено осеменений
в т.ч. плодотворных
%
всего
111
84
75,6
2
1
50,0
75,2
1
1
114
86
75,4
Опыт
в том числе
коров
телок
82
29
63
21
76,8
72,4
1
1
1
100,0
5,9
73,3
1
1
84
30
64
22
76,1
73,3
всего
80
45
56,3
14
11
78,6
48,9
3
3
97
59
60,8
Контроль
в том числе
коров
телок
62
18
36
9
58,0
50,0
9
5
6
5
66,6
100,0
59,1
60,8
3
3
74
23
45
14
60,8
60,8
Следует отметить, что оплодотворяемость коров и телок в опытной группе была в
среднем на 14,6 % выше, чем в контрольной (соответственно 75,4 % и 60,8 %). Различие
характерно и для коров (76,1 % и 60,8 %), и для телок (73,3 % и 60,8 %).
Особенно велика разница между группами была в оплодотворяемости после первого
осеменения. В опытной группе она составила 75,6 % (76,8 % и 72,4 для коров и телок) и
56,3 % в контрольной (соответственно 58,0 % и 50,0 %).
Таким образом, использование для разбавления спермы опытной среды способствовало
повышению ее качества после оттаивания и показателя оплодотворяемости после искусственного осеменения.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
91 Кб
Теги
by12171, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа