close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12177

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61N 5/06
A 61N 7/00
СПОСОБ КОМБИНИРОВАННОЙ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ
ТЕРАПИИ ПЕРЕВИТОГО ПОД КОЖУ АЛЬВЕОЛЯРНОГО РАКА
ПЕЧЕНИ РС-1 У КРЫСЫ
(21) Номер заявки: a 20070897
(22) 2007.07.16
(43) 2008.02.28
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр онкологии и
медицинской радиологии имени
Н.Н.Александрова" (BY)
(72) Авторы: Истомин Юрий Петрович;
Попова Наталья Анатольевна; Петров Петр Тимофеевич; Волотовская
Анна Викторовна (BY)
BY 12177 C1 2009.08.30
BY (11) 12177
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н.Александрова" (BY)
(56) ЯРОСЛАВЦЕВА-ИСАЕВА Е.В. и др.
Лазерная медицина. - 2004. - Т. 8. Вып. 1-2. - С. 8-14.
RU 2300403 C1, 2007.
RU 2160614 C1, 2000.
BY 5651 C1, 2003.
RU 2189261 C2, 2002.
(57)
Способ комбинированной фотодинамической терапии перевитого под кожу альвеолярного рака печени РС-1 у крысы, включающий проведение анестезиологического пособия,
введение в опухоль фотосенсибилизатора и лазерное облучение опухоли, отличающийся
тем, что в качестве фотосенсибилизатора используют "Фотолон" в виде 5 % мази, причем
мазь наносят на опухоль, над которой предварительно удаляют лоскут кожи, в количестве
0,3 мл на 1 см2 и вводят в опухоль путем фонофореза в непрерывном режиме с частотой
ультразвука 880 кГц при интенсивности 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин, затем место нанесения мази укрывают от доступа света, через 2 ч остаток мази смывают и проводят лазерное
облучение опухоли экспозиционной дозой 100 Дж/см2 при длине волны излучения 670 нм,
мощности излучения на выходе 0,4 Вт, плотности потока мощности излучения 0,51 Вт/см2
и диаметре светового пятна 1 см.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной онкологии, а
именно к комбинированной фотодинамической терапии перевитого под кожу альвеолярного рака печени РС-1 у крысы, и предназначено для высокоэффективного разрушения
опухоли. Способ фотодинамической терапии характеризуется селективным и органощадящим действием, что позволяет использовать его в случаях, когда другие способы лечения неэффективны или невозможны, не уступает традиционным методам лечения, хорошо
сочетается с ними и практически не имеет противопоказаний.
Известен способ фотодинамической терапии с внутрибрюшинным введением фотосенсибилизаторов "Фотогем", "Фотосенс", хлорин Е6 в дозах 2,5; 5,0; 10,0 мг/кг массы
животного [1]. Работа выполнена на беспородных крысах с перевитой опухолью саркома M1.
Шерстный покров в зоне роста опухоли депилировали кремом. Плотность экспозицион-
BY 12177 C1 2009.08.30
ной дозы облучения составляла 150, 300, 600 Дж/см2. Для облучения животных наркотизировали. Облучение после введения "Фотогема" проводили на лазерном терапевтическом
аппарате на красителе с накачкой "Металаз-М-1" (λ = 620-680 нм, ООО "Метахрон", Москва);
"Фотосенса" - на полупроводниковом лазерном аппарате "ЛД 680-2000" (λ = 675 ± 5 нм,
"Biospec", Москва); хлорина Е6 - на полупроводниковом лазерном аппарате "Актус-2"
(λ = 662 нм, ЗАО "Полупроводниковые приборы", Санкт-Петербург). Величина мощности
излучения составляла 0,75 Вт (соответствует верхней границе мощности излучения и диаметру светового пятна 1,5 см), плотность мощности лазерного излучения - 420 мВт/см2.
Динамическое наблюдение за животными проводили на 3, 7, 10, 14, 21 сутки, регистрировали общее физиологическое состояние, объем опухоли, динамику роста саркомы M1
(определяли по коэффициенту абсолютного прироста опухоли).
Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:
накопление фотосенсибилизатора в здоровых тканях организма, что приводит к развитию фототоксической реакции кожи при воздействии солнечного света, нарушению функциональной активности органов с высокой метаболической активностью;
риск инфицирования;
невозможно провести количественную оценку площади повреждения опухоли.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ фотодинамической терапии с локальным (внутритканевым) введением фотосенсибилизатора "Фотодитазин" [2]. В
экспериментальных условиях фотодинамическая терапия проводилась на белых беспородных крысах с перевитой опухолью саркома M1. Животных брали в эксперимент после
достижения опухолью размеров от 0,6 до 1,3 см, шерстный покров в зоне опухоли депилировали.
Всем животным инъекции раствора фотосенсибилизатора (объем раствора соответствовал половине объема опухоли) проводились медленно, перпендикулярно опухоли, с
продвижением иглы к основанию опухоли. Источником светового излучения служил
аппарат "Ламеда". Максимальная средняя мощность рабочего излучения на выходе оптического разъема аппарата составляла 1,5 Вт, длина волны 662 нм, световая энергия подводилась перпендикулярно поверхности опухоли, облучение проводилось однократно,
1-3 полями (в зависимости от размеров опухоли). Эффект оценивали по коэффициенту
абсолютного прироста (торможения) опухоли на 7, 10, 14, 21 сутки.
Однако известный, принятый за прототип, способ обладает следующими недостатками:
есть вероятность диссеминации и/или метастазирования опухоли;
риск инфицирования;
невозможно провести количественную оценку площади повреждения опухоли.
В настоящее время на базе НФЦ РУП "Белмедпрепараты" разработано средство для
фотодинамической терапии злокачественных новообразований - мазь "Фотолон", представляющее собой молекулярный комплекс хлорина Е6 и его производных с поливинилпирролидоном.
Задача предлагаемого изобретения - создание способа комбинированной фотодинамической терапии альвеолярного рака печени РС-1 у крысы на основе фонофоретического
введения фотосенсибилизатора в ткань опухоли и оценка его эффективности.
Техническим результатом является уменьшение времени, необходимого для создания
эффективной концентрации фотосенсибилизатора в опухолевой ткани, повышение противоопухолевого эффекта фотодинамической терапии, минимизация риска системных побочных реакций.
Технический результат достигается путем проведения фотодинамической терапии с
использованием фонофоретического введения фотосенсибилизатора в ткань опухоли. Фонофорез мази "Фотолон" позволяет увеличить пенетрацию фотосенсибилизатора и приводит к интенсивному, избирательному накоплению препарата в ткани опухоли. Местное
применение фотосенсибилизатора практически исключает риск развития фотодерматитов.
2
BY 12177 C1 2009.08.30
Предлагаемый способ комбинированной фотодинамической терапии позволяет направленно воздействовать на опухоль. Облучение накопившегося в ткани опухоли фотосенсибилизатора светом соответствующей длины волны приводит к его активации, вызывая
индуцированную фотохимическую реакцию с образованием синглетного кислорода, который обладает высокой окислительной способностью, вследствие чего реализуется разрушающее воздействие на клетки опухоли (некроз, апоптоз).
Способ осуществляется следующим образом.
Белой беспородной крысе выполняют перевивку опухоли РС-1 (альвеолярный рак печени), закупленную в банке опухолевых штаммов ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.
Опухоль перевивают подкожно, в паховую область путем введения 0,5 мл 10 % опухолевой
взвеси в растворе Хенкса. Животное берут в эксперимент через 24-28 дней, по достижению
размеров опухоли 2-2,5 см в диаметре. Все манипуляции на животном осуществляют после введения последнего в состояние нейролептоанальгезии (раствор дроперидола и фентанила 2 : 1 по 0,2 мл на 100 г массы тела внутримышечно).
Все животные (144 белые беспородные крысы, весом 150 ± 10 г, разводки вивария ГУ
РНПЦ ОМР им. Н.Н.Александрова) распределены на 24 группы в зависимости от способа
местного применения 5 % мази "Фотолон" и временного интервала между нанесением фотосенсибилизатора и проведением лазерного облучения (экспозиция).
Наркотизированную крысу с перевитой опухолью РС-1 фиксируют, депилируют шерсть
над опухолью, срезают лоскут кожи над опухолью площадью 1 см2 и наносят тонкий слой
(0,3 мл) 5 % мази "Фотолон".
Процедуру фонофореза (аппарат УЗТ 1.04-0, завод Эмма, Россия, с излучателем 1 см)
проводят непосредственно после нанесения мази ультразвуком частотой 880 кГц при интенсивности 0,4 и 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин в непрерывном режиме.
В контрольных группах крысам проводят аппликацию мази "Фотолон" без воздействия ультразвуком.
Опухоль с мазью (место воздействия) закрывают полиэтиленовой пленкой и фольгой
для предотвращения действия света и высыхания.
Время аппликации мази "Фотолон" в контрольных группах и в группах с фонофорезом
составляет 15, 30, 45 мин, 1, 2, 3, 4 и 5 ч. Перед проведением облучения остатки мази тщательно смывают с поверхности опухоли РС-1 крысы теплым мыльным раствором и антисептиком, это место просушивают. Затем крысе проводят сеанс фотодинамической терапии, используя лазерную медицинскую установку "ЛД 680-2000" ("Биоспек", Москва) на
основе полупроводникового лазерного диода с длиной волны излучения 670 нм. Экспозиционная доза составляет 100 Дж/см2, мощность на выходе - 0,4 Вт, плотность потока
мощности - 0,51 Вт/см2, диаметр светового пятна - 1 см, время облучения - 3 мин 27 с. Параметры облучения остаются неизменными и выбраны таким образом, чтобы достичь
лишь частичного некротизирования опухолевой ткани и установить наличие модифицирующего действия ультразвука на эффективность фотодинамической терапии.
Через 24 ч после фотооблучения наркотизированной крысе проводят витальное окрашивание синькой Эванса. Для этого в хвостовую вену крысы вводят 1 % раствор синьки
Эванса из расчета 1 мл на 100 г веса. Умерщвление животного осуществляют с помощью
общепринятого метода эвтаназии. Опухоль иссекают, фиксируют в 10 % растворе формалина и делают поперечные срезы по наибольшему диаметру новообразования. Срезы регистрируют цифровой фотокамерой, сопряженной с компьютером.
Расчет площади некрозов опухоли проводят с помощью компьютерной программы
"Damage of tumor".
Наибольший процент площади некроза опухоли РС-1 крысы наблюдается при проведении фонофореза мази "Фотолон" ультразвуком с интенсивностью 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин
с последующим проведением сеанса фотодинамической терапии через 2 ч (таблица и
фиг. 1).
3
BY 12177 C1 2009.08.30
Процент площади некрозов опухоли РС-1 крыс после аппликации и аппликации
и фонофореза 5 % мази "Фотолон" с фотооблучением в дозе 100 Дж/см2
Временной
интервал
15
30
45
1
2
3
4
5
мин
мин
мин
ч
ч
ч
ч
ч
Аппликация
мази "Фотолон"
(серия 1)
6,02±1,56
8,64±1,80
11,03±1,64
14,23±1,95
15,22±4,37
17,06±2,74
19,22±3,97
19,53±4,88
Аппликация
и фонофорез
(0,4 Вт/см2)
(серия 2)
Процент площади некрозов
19,13±1,73
23,60±3,26
24,22±3,05
26,08±3,65
38,46±13,04
48,67±13,93
52,52±7,27
51,29±10,78
Аппликация
и фонофорез
(0,7 Вт/см2)
(серия 3)
28,35±3,28
31,70±1,32
33,55±5,07
35,24±3,36
42,57±16,19
52,00±13,31
55,41±16,73
55,68±11,68
Среди существенных признаков, характеризующих способ комбинированной фотодинамической терапии злокачественной опухоли РС-1 крысы, отличительными являются:
после депиляции шерсти удаление лоскута кожи над опухолью площадью 1 см2;
нанесение на обнаженную поверхность опухоли 0,3 мл 5 % мази "Фотолон";
фонофорез мази "Фотолон" ультразвуком частотой 880 кГц в при интенсивности
0,7 Вт/см2 в течение 10 мин, в непрерывном режиме (излучатель 1 см);
экспозиция опухоли без доступа света в течение 2 ч;
удаление с поверхности опухоли остатков фотосенсибилизатора;
проведение лазерного облучения опухоли светом с длиной волны 670 нм, экспозиционная доза - 100 Дж/см2, мощность на выходе - 0,4 Вт, плотность потока мощности 0,51 Вт/см2, диаметр светового пятна - 1 см, время облучения - 3 мин 27 с.
Реализация предложенного способа комбинированной фотодинамической терапии
злокачественной опухоли РС-1 у крысы иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Наркотизированной крысе весом 152 г с перевитой опухолью РС-1 (2,5 см в диаметре)
после фиксации выполнили депиляцию шерсти и иссечение лоскута кожи над опухолью
площадью 1 см2. На обнаженную поверхность опухоли нанесли 0,3 мл 5 % мази "Фотолон". Процедуру фонофореза провели непосредственно после нанесения мази ультразвуком
частотой 880 кГц в непрерывном режиме при интенсивности 0,7 Вт/см2 в течение 10 мин
(излучатель 1 см). Место воздействия (опухоль с мазью) закрыли светонепроницаемым
материалом и выдержали без доступа света 2 ч. Через 2 ч остатки мази тщательно удалили
с поверхности опухоли. Провели сеанс фотодинамической терапии с длиной волны излучения 670 нм, экспозиционная доза - 100 Дж/см2, мощность на выходе - 0,4 Вт, плотность
потока мощности - 0,51 Вт/см2, диаметр светового пятна - 1 см, время облучения - 3 мин 27 с.
Через 24 ч после облучения в хвостовую вену крысы ввели 1 % раствор синьки из расчета 1 мл на 100 г веса. Умерщвление осуществили с помощью общепринятого метода эвтаназии (хлороформ). Опухоль иссекли, фиксировали в 10 % растворе формалина и сделали
поперечные срезы по наибольшему диаметру новообразования. Срезы регистрировали
цифровой фотокамерой, сопряженной с компьютером.
Расчет площади некрозов опухоли проводили с помощью компьютерной программы
"Damage of tumor".
Площадь гистотопографического среза опухоли РС-1 - 2,21 см2, площадь некроза опухоли - 1,74 см2, процент площади некроза - 78,5 % (фиг. 2).
Пример 2.
Наркотизированной крысе весом 125 г с перевитой опухолью РС-1 (2,5 см в диаметре)
после фиксации выполнили депиляцию шерсти и иссечение лоскута кожи над опухолью
4
BY 12177 C1 2009.08.30
площадью 1 см2. На обнаженную поверхность опухоли нанесли 0,3 мл 5 % мази "Фотолон". Процедуру фонофореза провели непосредственно после нанесения мази ультразвуком частотой 880 кГц в непрерывном режиме при интенсивности 0,7 Вт/см2 в течение
10 мин (излучатель 1 см). Место воздействия (опухоль с мазью) закрыли светонепроницаемым материалом и выдержали без доступа света 2 ч. Через 2 ч остатки мази тщательно
удалили с поверхности опухоли. Провели сеанс фотодинамической терапии с длиной волны излучения 670 нм, экспозиционная доза - 100 Дж/см2, мощность на выходе - 0,4 Вт,
плотность потока мощности - 0,51 Вт/см2, диаметр светового пятна - 1 см, время облучения - 3 мин 27 сек.
Через 24 часа после облучения в хвостовую вену крысы ввели 1 % раствор синьки из
расчета 1 мл на 100 г веса. Умерщвление осуществили с помощью общепринятого метода
эвтаназии (хлороформ). Опухоль иссекли, фиксировали в 10 % растворе формалина и сделали поперечные срезы по наибольшему диаметру новообразования. Срезы регистрировали цифровой фотокамерой, сопряженной с компьютером.
Расчет площади некрозов опухоли проводили с помощью компьютерной программы
"Damage of tumor".
Площадь гистотопографического среза опухоли РС-1 - 1,98 см2, площадь некроза опухоли - 1,35 см2, процент площади некроза - 68,01 % (фиг. 3).
Таким образом, предлагаемый способ комбинированной фотодинамической терапии
позволяет установить, что ультразвуковое воздействие обладает модифицирующей способностью и приводит к уменьшению времени, необходимого для создания эффективной
концентрации фотосенсибилизатора в опухолевой ткани и повышению противоопухолевого эффекта фотодинамической терапии в целом.
Источники информации:
1. Бурмистрова Н.В., Каплан М.А., Бродский Р.А., Мардынская В.П. Оценка эффективности фотодинамической терапии саркомы M1 с "Фотогемом", "Фотосенсом", препаратом хлорина Е6 // Физическая медицина. - 2005. - Т. 15. - № 1. - С. 10-17.
2. Ярославцева-Исаева Е.В., Каплан М.А. Фотодинамическая терапия базальноклеточного рака кожи с локальным введением фотосенсибилизатора // Лазерная медицина. 2004. - Т. 8. - Вып. 1-2. - С. 8-14 (прототип).
Фиг. 1 Процент площади некрозов опухоли РС-1 крыс после аппликации
и аппликации и фонофореза 5% мази "Фотолон" с фотооблучением в дозе 100 Дж/см2
5
BY 12177 C1 2009.08.30
Фиг. 2. Гистотопографический срез опухоли PC-1 крысы
Фиг. 3. Гистотопографический срез опухоли PC-1 крысы
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
6
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
1 726 Кб
Теги
by12177, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа