close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12197

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61B 5/00
G 01N 33/487
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ
ТРАВМАТИЧЕСКОГО СИНОВИТА И РЕВМАТИЧЕСКОГО
ЗАБОЛЕВАНИЯ СУСТАВА
(21) Номер заявки: a 20060452
(22) 2006.05.15
(43) 2007.12.30
(71) Заявители: Государственное научное учреждение "Институт биофизики и клеточной инженерии
Национальной академии наук Беларуси"; Государственное учреждение
"Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии" (BY)
(72) Авторы: Слобожанина Екатерина
Ивановна; Козлова Наталья Михайловна; Белоенко Евгений Дмитриевич; Зубрицкая Галина Петровна;
Эйсмонт Олег Леонидович; Скакун
Павел Григорьевич; Букач Дмитрий
Вячеславович; Герасименко Михаил Александрович (BY)
BY 12197 C1 2009.08.30
BY (11) 12197
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатели: Государственное
научное учреждение "Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси";
Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр
травматологии и ортопедии" (BY)
(56) SU 1777076 A1, 1992.
BY 3633 C1, 2000.
RU 2202802 C2, 2003.
(57)
Способ дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического
заболевания сустава, заключающийся в том, что к 2 мл разведенного в соотношении 1 : 9
буферным раствором с рН 7,4 пунктата синовиальной жидкости больного добавляют до
концентрации 10-5М флуоресцентный зонд 1-анилино-8-нафталинсульфонат, инкубируют
30 минут при 20 °С, измеряют максимальную интенсивность флуоресценции связанного с
компонентами синовиальной жидкости зонда при его возбуждении светом с длиной волны
375 нм, и если максимальная интенсивность флуоресценции составляет 235,0 ± 40,0 отн.
ед., диагностируют травматический синовит, а если 82,0 отн. ед. или менее - ревматическое заболевание сустава.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в дифференциальной диагностике повреждений и заболеваний суставов.
Синовиальная среда суставов представляет собой чрезвычайно сложную динамически
сбалансированную систему, изменение ее количественного и качественного состава отра-
BY 12197 C1 2009.08.30
жает нарушение функции сустава, что используется как тест в дифференциальной диагностики суставных заболеваний.
Наиболее точной в настоящее время является дифференциальная диагностика, основанная на микроскопическом исследовании гистологических препаратов, изготовленных
из биоптатов суставных тканей и синовии [1].
Однако проведение гистологических исследований требует значительного времени и
высокой квалификации врача-морфолога, кроме того, многократное повторение их при
необходимости проследить за динамикой развития процесса затруднительно из-за травматичности или невозможности воспроизведения.
Известен способ оценки характера внутрисуставного воспаления путем исследования
структурно-оптических свойств синовиальной жидкости методом поляризационной фотометрии [2]. Данный метод диагностики позволяет быстро решить вопрос о характере воспаления, но не может использоваться для дифференциальной диагностики различных
заболеваний суставов.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является флуоресцентный метод выявления матриксных металлопротеиназ в синовиальной жидкости с
использованием флуорогенного субстрата TN0003, позволяющий определять активность
этих ферментов, в т.ч. при артритах [3].
Данный способ позволяет определить активность воспалительного процесса при артрите, например ревматоидном, но недостаточен для определения характера внутрисуставного воспаления.
Задача, для решения которой создано изобретение, состоит в разработке эффективного
способа дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава.
Поставленная задача решается предлагаемым способом дифференциальной диагностики травматического синовита и ревматического заболевания сустава, для чего к 2 мл
разведенного в соотношении 1 : 9 буферным раствором с pH 7,4 пунктата синовиальной
жидкости больного добавляют до концентрации 10-5 М флуоресцентный зонд 1-аналино8-нафталинсульфонат, инкубируют 30 минут при 20 °С, измеряют максимальную интенсивность флуоресценции связанного с компонентами синовиальной жидкости зонда при
его возбуждении светом с длиной волны 375 нм, и если максимальная интенсивность
флуоресценции составляет 235,0 ± 40,0 отн. ед., диагностируют травматический синовит,
а если 82,0 отн. ед. или менее - ревматическое заболевание сустава.
Способ осуществляется следующим образом.
Синовиальную жидкость больного предварительно центрифугируют для удаления нерастворимого материала и разводят в соотношении 1 : 9 в забуференном растворе NaCl,
pH 7,4. Для определения параметров флуоресценции к 2 мл синовиальной жидкости добавляют 20 мкл 1 10-3М раствора 1-анилино-8-нафталинсульфоната (АНС). Конечная концентрация зонда в образцах синовиальной жидкости должна составлять - 1 10-5М.
Исследуемый образец инкубируют 30 мин при t = 20 ± 2 °С. Флуоресцентные измерения проводят в диапазоне длин волн 390-500 нм, при λвозб. = 375 нм.
Спектры флуоресценции регистрируют на спектрофлуориметре. Определяют интенсивность флуоресценции связанного с компонентами синовиальной жидкости АНС (в
максимуме спектра флуоресценции при длине волны 470 нм).
Выбранный для предлагаемого способа диагностики АНС является флуоресцентным
зондом, который связывается как с липидами, так и с белками синовиальной жидкости, и
интенсивность флуоресценции которого зависит от полярности окружения. Одной из причин пониженной интенсивности флуоресценции АНС в синовиальной жидкости больных
ревматоидным артритом может быть окислительная модификация липопротеинов синовиальной жидкости. Известно, что количество липопротеинов низкой плотности в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом увеличивается, но они находятся в
2
BY 12197 C1 2009.08.30
окисленном состоянии и характеризуются более высоким отрицательным зарядом. В результате этого и может происходить снижение интенсивности флуоресценции связанного
с компонентами синовиальнй жидкости АНС, имеющего также отрицательный заряд.
Пример выполнения способа.
Для исследования возможности использования предложенного способа диагностики
были исследованы пунктаты синовиальной жидкости больных травматическим синовитом
- 12 человек (группа 1) и ревматическим заболеванием суставов - 5 человек (группа 2), находившихся на лечении в клиническом отделении ГУ "Республиканский научнопрактический центр травматологии и ортопедии".
Пунктаты синовиальной жидкости предварительно центрифугировали для удаления
нерастворимого материала и затем разводили в соотношении 1 : 9 в забуференном растворе NaCl, pH 7,4. Для определения параметров их флуоресценции к 2 мл разведенной синовиальной жидкости добавляли 20 мкл 1 10-3 М раствора АНС. Образцы инкубировали 30
мин при t = 20 ± 2 °С. Флуоресцентные измерения образцов проводили при возбуждении
светом длиной волны 375 нм. Регистрацию интенсивности флуоресценции проводили в
максимуме спектра флуоресценции АНС при 470 нм на люминесцентном спектрофотометре "СОЛАР" (Беларусь).
Полученные результаты обрабатывались методом вариационной статистики.
Анализ параметров "внесенной" флуоресценции синовиального выпота больных с синовитами травматического и ревматоидного генеза представлены в таблице и на фигуре.
Интенсивность флуоресценции АНС (λвозб. = 375 нм; λрег = 470 нм), отн. ед.
Травматический синовит (группа 1) Ревматическое заболевание суставов (группа 2)
235 ± 40; n = 12
61,8 ± 19*; n = 5
где n - количество лиц в группе,
∗достоверность различий по сравнению с группой 1, Р < 0,05.
Как видно из представленных в таблице данных, интенсивность флуоресценции АНС
(в максимуме спектра флуоресценции при длине волны 470 нм), связанного с компонентами синовиальной жидкости больных ревматическим заболеванием суставов, достоверно
отличается от такового для группы больных с травматическим синовитом. Это подтверждается и полученными спектрами флуоресценции АНС, связанного с компонентами синовиальной жидкости больных на фигуре. Судя по спектрам флуоресценции АНС,
интенсивность флуоресценции зонда в максимуме спектра люминесценции повышена в
синовиальной жидкости больных травматическим синовитом (спектр 1) по сравнению со
свечением этого зонда в синовиальной жидкости больных с ревматическими заболеваниями суставов (спектр 2).
Таким образом, из полученных результатов следует, что по спектральнофлуоресцентным параметрам зонда АНС, связанного с компонентами синовиальной жидкости (липидами и белками), можно судить о характере внутрисуставного поражения.
Источники информации:
1. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. / Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987.
2. Патент РФ 2159434, МПК G 01N 33/52, 2000.
3. Fluorogenic activity assays for MMP-3 and MMP-1 in synovial fluid. Abstr. Leiden Fibrinolys. and Proteolys. Workshop 7: Extracellul. Proteolys. and Epidemiol., Leiden, 22-24 Apr.,
1998.
3
BY 12197 C1 2009.08.30
Фиг. 1
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
111 Кб
Теги
by12197, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа