close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12255

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.08.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 12255
(13) C1
(19)
G 01N 33/50
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАТИЧЕСКОГО АРТРИТА
(21) Номер заявки: a 20060990
(22) 2006.10.12
(43) 2008.06.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский
университет" (BY)
(72) Авторы: Кундер Елена Владимировна; Литвяков Александр Михайлович; Генералов Игорь Иванович
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебский государственный
ордена Дружбы народов медицинский
университет" (BY)
(56) Методические указания по применению унифицированных клинических
лабораторных методов исследований.М., 1973.- С. 149-153.
SU 1807413 А1, 1993.
КУНДЕР Е.В. и др. Иммунопатология,
аллергология, инфектология.- 2005.№ 3.- С. 26-34.
BY 12255 C1 2009.08.30
(57)
Способ диагностики псориатического артрита, отличающийся тем, что сыворотку
крови больного смешивают и инкубируют с раствором ДНК, определяют ДНКазную активность сыворотки по реакции нераспавшейся ДНК с риванолом, и если при добавке риванола выявляют помутнение реакционной смеси и наличие в ней единичных хлопьев или
нитей ДНК, ДНКазную активность сыворотки определяют как очень высокую и диагностируют псориатический артрит.
Изобретение относится к медицине (ревматологии, иммунологии) и может быть использовано для диагностики и дифференциальной диагностики псориатического артрита.
Для диагностики псориатического артрита в настоящее время используются неспецифические лабораторные показатели (определение ревматоидного фактора, С-реактивного
белка, циркулирующих иммунных комплексов и аутоантител). Все перечисленные критерии не являются специфичными для псориатического артрита и не позволяют провести
дифференциальную диагностику между данной патологией и другими заболеваниями из
группы серонегативных спондилоартритов.
В настоящее время для диагностики ряда патологических состояний предлагают использовать определение ферментативной активности сыворотки крови. В частности, установлено повышение сывороточной ДНКазной активности при остром инфаркте миокарда
[2], определение активности этого сывороточного фермента предлагают использовать в
качестве нового эффективного маркера для ранней диагностики инфаркта миокарда наряду с биохимическими и электрокардиографическими признаками. Проводилось исследование [3] сывороточной ДНКазной активности у больных с системной красной волчанкой.
Показано достоверное снижение уровня данной активности у обследованных пациентов
по сравнению со здоровыми лицами.
BY 12255 C1 2009.08.30
Определение сывороточной ДНКазной активности для диагностики серонегативных
артритов (псориатического артрита, анкилозирующего спондилита и реактивных артритов) до настоящего времени не применялось.
Прототипом заявляемого способа диагностики псориатического артрита является метод определения ревматоидного фактора [1].
Метод включает несколько стадий:
получение сыворотки от больного;
определение ревматоидного фактора.
Недостатком метода является то, что данный способ диагностики является неспецифичным для псориатического артрита.
Несмотря на то, что псориатический артрит относится к группе серонегативных артритов, в названии которых отражена их "отрицательность" по этому признаку, тем не менее, в настоящее время число случаев заболевания с увеличением титров ревматоидного
фактора достигает 15 % [4].
Задачей изобретения является разработка метода лабораторной диагностики псориатического артрита на основе определения сывороточной ДНКазной активности.
Сущность изобретения заключается в том, что после забора у больных сыворотки крови определяется ее ДНКазная активность. По окончании кратковременной (не более 2 часов) инкубации реакционной смеси проводится полуколичественный визуальный учет
результатов активности в баллах.
Способ осуществляется следующим образом.
Негепаринизированную человеческую кровь в количестве 2-3 мл инкубируют при температуре 4 °С до образования сгустка. Затем центрифугируют 10-15 мин в центрифужных
пробирках в центрифуге с бакетным ротором (1500 об/мин). Аккуратно забирают чистую
сыворотку.
Для постановки ДНКазной реакции сыворотку разводят 1/5 изотоническим раствором
хлорида натрия. Постановку реакции проводят в центрифужных пробирках. К 0,1 мл разведенной сыворотки прибавляют 0,2 мл стандартизованного раствора ДНК в концентрации 300
мкг/мл и 0,1 мл трис HCl буфера, содержащего 0,01M MgCl2, рН 8,3. В контроле вместо сыворотки используют физиологический раствор. Пробы инкубируют при 37 °С в течение 2 часов. После инкубации к пробам прибавляют по 20 мкл 0,75 % этакридина лактата (риванола).
Результат оценивают полуколичественно по величине сгустка нераспавшейся ДНК в баллах.
Отсутствие активности (сгусток ДНК) принимают за 0 баллов, минимальная активность
(рыхлый сгусток) - 1 балл, умеренная активность (рыхлый сгусток, хлопья, нити комплекса
ДНК) - 2 балла, высокая активность (хлопья, нити) - 3 балла, очень высокая активность (хлопья, нити, распад сгустка) - 4 балла и распад сгустка ДНК - 5 баллов.
Нами обследовано 77 больных серонегативными артритами (31 пациент с псориатическим артритом, 22 - с анкилозирующим спондилитом и 24 - с реактивными артритами).
Результаты определения уровней ДНКазной активности сывороток у больных представлены в таблице.
Уровни ДНКазной активности сывороток крови у больных
серонегативными артритами
ДНКазная активность сы- Статистическая достоОбследованные лица
вороток, баллы
верность различий
Все обследованные пациенты
2,68±0,145; n = 77
р<0,001
Пациенты с псориатическим артритом
3,81±0,176; n = 31
р<0,001
Пациенты с анкилозирующим спон1,72±0,149; n = 22
р>0,05
дилитом
Пациенты с реактивными артритами
2,16±0,177; n = 24
р<0,05
Здоровые лица
1,58±0,134; n = 36
2
BY 12255 C1 2009.08.30
При сравнении уровней сывороточной ДНКазной активности у пациентов с изученными нозологическими формами серонегативных артритов оказалось, что данный вид активности у больных псориатическим артритом статистически достоверно превышает
аналогичные показатели у больных анкилозирующим спондилитом (р<0,001) и реактивными артритами (р<0,001).
Проведенная оценка ДНКазной активности сывороток крови у больных серонегативными артритами демонстрирует достоверное преобладание этого параметра у больных
псориатическим артритом по сравнению с другими заболеваниями из данной группы. Из
31 обследованного пациента с установленным псориатическим артритом ДНКазная активность сыворотки крови 4 балла и выше наблюдалась у 19 человек (61,3 %), а 3 и более
балла - у 28 человек (90,3 %). Среди 21 пациента с анкилозирующим спондилитом ДНКазная активность сыворотки 4 и более баллов не выявлялась, 3 и более баллов присутствовала у 3 больных (14,3 %). При исследовании ДНКазной активности сыворотки крови у
пациентов с реактивными артритами оказалось, что активность 4 и более баллов присутствует у 2 больных из 25 (8 %), 3 и более баллов - у 7 из 25 больных (28 %). Среди 36 обследованных здоровых лиц ДНКазную активность сыворотки 4 и более баллов не
демонстрировал ни один человек, 3 и более баллов - 7 человек (19,5 %).
Если за диагностический уровень псориатического артрита принять ДНКазную активность сыворотки крови, равную 4 баллам и более, то чувствительность метода составляет
61,3 %, а специфичность равна 95,6 %. Если диагностическим уровнем признать активность 3 и более баллов, то чувствительность метода составляет 90,3 %, а специфичность 78,3 %.
Эффективность определения сывороточной ДНКазной активности для диагностики и
дифференциальной диагностики псориатического артрита определяется тем, что этот метод является простым и дешевым, не требует специальных навыков и оборудования, позволяет получить результат в течение 2,5-3 часов от взятия крови.
Источники информации:
1. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследований.-М., 1973.- С. 149-153 (прототип).
2. Kawai, Y. et al Diagnostic Use of Serum Deoxyribonuclease I Activity as a Novel EarlyPhase Marker in Acute Myocardial Infarction // Circulation.- 2004.- Vol. 109.- P. 2398-2400.
3. Sallai, K. et al Antinucleosome antibodies and decreased deoxyribonuclease activity in
sera of patients with systemic lupus erythematosus // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology.- 2005.- Vol.1.- P. 56-59.
4. Healy P., Helliwell P.S. Classification of the spondyloarthropathies // Curr. Opin. Rheumatol.- 2005.- Vol.17.- P. 395-399.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
79 Кб
Теги
by12255, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа