close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12500

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/531
СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ ДЛЯ ПОСТАНОВКИ
РЕАКЦИИ ЗАДЕРЖКИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
(21) Номер заявки: a 20070787
(22) 2007.06.25
(43) 2008.02.28
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебская ордена "Знак Почета"
государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(72) Авторы: Корочкин Рудольф Борисович; Прудников Виктор Сергеевич;
Вербицкий Анатолий Анатольевич;
Прудников Александр Викторович
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебская ордена "Знак
Почета" государственная академия
ветеринарной медицины" (BY)
BY 12500 C1 2009.10.30
BY (11) 12500
(13) C1
(19)
(56) Методы лабораторной диагностики
вирусных болезней животных: Справочник. - Москва: Агропромиздат, 1986, С. 226-227.
GB 1186544, 1970.
SU 1121825 A1, 1996.
SU 648228, 1979.
SU 995744, 1983.
ТВЕРДОХЛЕБОВА Т.И. и др. Медицинская паразитология и паразитарные
болезни, 2005. - № 2. - С. 29-32.
КИРЬЯНОВА Г.Ю. Разработка консервирующего раствора на основе модифицированного деионизированного желатина для пролонгированного хранения
отмытых эритроцитов. Автореферат.Санкт-Петербург, 2005. - С. 8-9, 20-23.
(57)
Способ стабилизации эритроцитов для постановки реакции задержки гемагглютинации, включающий получение эритроцитов из крови животного-донора, отличающийся
тем, что эритроциты в виде 10 %-ной взвеси в изотоническом растворе натрия хлорида
стабилизируют путем смешивания с равным объемом 50 %-ного формалина и инкубирования смеси при комнатной температуре в течение 48 часов.
Изобретение относится к области серологических и вирусологических исследований, в
частности к способу стабилизации эритроцитов, применяемых при постановке реакции
задержки (торможения) гемагглютинации (РЗГА, РТГА).
При постановке реакции задержки (торможения) гемагглютинации в диагностике вирусных болезней животных и человека используют в качестве компонента 1 %-ную взвесь
эритроцитов, получаемых из крови животных-доноров (куры, морские свинки и др.) после
дефибринирования или стабилизации химическими веществами (трилон Б, натрия цитрат,
гепарин и др.) с последующим отделением от них плазмы путем многократного центрифугирования. Приготовленные таким образом эритроциты способны вступать во взаимодействие с рецепторами вируса (гемагглютинины), в результате чего наступает их агглютинация
(склеивание).
Однако этот способ постановки реакции задержки (торможения) гемагглютинации
требует использования только свежеприготовленных эритроцитов, сохраняемых в холо-
BY 12500 C1 2009.10.30
дильнике (4 °С) непродолжительное время на срок не более 3-5 дней [1], что обусловливает необходимость постоянного содержания животных-доноров в лаборатории.
Целью изобретения является разработка способа стабилизации эритроцитов, предназначенных для постановки реакции задержки (торможения) гемагглютинации, позволяющего сохранять и использовать их в качестве компонента реакции в течение одного года
(срок наблюдения) с сохранением чувствительности и специфичности реакции.
Поставленная цель достигается за счет стабилизации полученных эритроцитов 50 %ным раствором формалина.
Формалин (40 %-ный водный раствор формальдегида) является наиболее распространенной фиксирующей жидкостью с достаточно высокой фиксирующей способностью и
используется при проведении гистологических и патогистологических исследований. В
основе стабилизирующего действия формальдегида лежит его способность взаимодействовать с клетками и вызывать стабилизацию белков цитоплазматической мембраны, в результате чего клетка приобретает более высокую стабильность [2].
Заявляемый способ стабилизации эритроцитов для постановки реакции задержки гемагглютинации заключается в том, что эритроциты в виде 10 %-ной взвеси в изотоническом растворе натрия хлорида стабилизируют путем смешивания с равным объемом 50 %ного формалина и инкубирования смеси при комнатной температуре в течение 48 часов.
Способ стабилизации эритроцитов осуществляют следующим образом. Получение эритроцитов из крови животных-доноров проводят по общепринятой методике. Затем из полученного осадка эритроцитов готовят 10 %-ную взвесь путем добавления девяти объемов
стерильного изотонического раствора (0,85 %-ный раствор натрия хлорида). К полученной 10 %-ной взвеси эритроцитов при постоянном перемешивании постепенно добавляют
равный объем 50 %-ного раствора формалина, который предварительно готовят путем
смешивания равных объемов продажного формалина и изотонического раствора (0,85 %ный раствор натрия хлорида). После тщательного перемешивания смесь оставляют на 48
часов при комнатной температуре. После осаждения эритроцитов на дно раствор формалина удаляют и к осадку эритроцитов добавляют 10 объемов стерильного изотонического
раствора, затем смесь встряхивают и дополнительно оставляют в холодильнике при 4 °С
на 8 часов до полного оседания эритроцитов. Образовавшуюся надосадочную жидкость
повторно удаляют и вновь добавляют стерильный изотонический раствор в том же объеме.
Полученную суспензию центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 минут, надосадочную жидкость отсасывают и к осадку эритроцитов добавляют стерильный изотонический раствор в объеме, равном удаленному. Отмывание эритроцитов от формалина таким
образом повторяют 6 раз, после чего к осадку эритроцитов добавляют девять объемов стерильного изотонического раствора, тщательно перемешивают до получения равномерной
смеси и взвесь эритроцитов разливают в стерильную стеклянную посуду. Полученную таким образом 10 %-ную взвесь формалинизированных эритроцитов хранят в холодильнике
при 4 °С в течение одного года. При этом в течение указанного периода они полностью
пригодны для постановки реакции задержки (торможения) гемагглютинации.
В день постановки реакции из исходной 10 %-ной взвеси фиксированных эритроцитов
готовят 1 %-ную взвесь на изотоническом растворе и используют в реакции.
Использование в реакции задержки (торможения) гемагглютинации стабилизированных формалином эритроцитов, сохраняемых при 4 °С в течение одного года, не оказывает
влияния на качество реакции. При этом стабилизированные эритроциты полностью сохраняют способность взаимодействовать с гемагглютининами вируса. Сохранение чувствительности и специфичности реакции задержки (торможения) гемагглютинации определяют по
получению аналогичных результатов исследования сыворотки крови с определением антител к вирусу и идентификации вируса в исследуемом вируссодержащем материале, а
также получению аналогичных контрольных результатов на самоагглютинацию стабилизированных эритроцитов и агглютинацию в присутствии сыворотки крови при традиционной методике постановки реакции и с использованием стабилизированных эритроцитов.
2
BY 12500 C1 2009.10.30
Результаты исследований сыворотки крови свиней и птицы для обнаружения специфических антител к вирусам гриппа и ньюкаслской болезни подтверждают возможность
использования в реакции задержки (торможения) гемагглютинации стабилизированных
формалином эритроцитов в течение одного года после их получения, в результате чего
отпадает необходимость постоянного приготовления свежих эритроцитов для постановки
реакции.
Источники информации:
1. Сюрин В.Н. и др. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных:
справочник. - Москва: Агропромиздат, 1986. - С. 227, [8] л.ил.: ил.
2. Препарат для фиксации материала для микроскопического исследования: пат. Респ.
Беларусь 5417, МПК G 01N 1/36 / Грошев И.М. [и др.]; заявитель ОАО "Витебскдрев" № 19990188; заявл. 26.02.99; опубл. 30.09.03 // Афiцыйны бюл. / Нац. Цэнтр iнтэлектуал.
Уласцiвасцi - 2003.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
76 Кб
Теги
патент, by12500
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа