close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12547

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 36/18
A 61P 13/00
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
И ПРОФИЛАКТИКИ ГИПЕРПЛАЗИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ
ЖЕЛЕЗЫ, ПРОСТАТИТА, АЛОПЕЦИИ И ГИРСУТИЗМА,
ПОЛУЧАЕМАЯ ИЗ ПЛОДОВ КОРОЛЕВСКОЙ ПАЛЬМЫ
ROYSTONEA REGIA, И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: a 20051013
(22) 2004.03.15
(31) 2003-0062 (32) 2003.03.20 (33) CU
(85) 2005.10.20
(86) PCT/CU2004/000004, 2004.03.15
(87) WO 2004/082696, 2004.09.30
(43) 2006.10.30
(71) Заявитель: ЛАБОРАТОРИОС ДАЛМЕР С.А. (CU)
BY 12547 C1 2009.10.30
BY (11) 12547
(13) C1
(19)
(72) Авторы: ЛАГУНА ГРАНЬЯ, АБИЛИО
МЕЛКЬЯДЕС; РОДРИГЕЗ ЛЕЙЕС,
ЕДУАРДО, АНТОНИО; МАС ФЕРРЕИРО, РОСА МАРИА; КАРБАХАЛ
КИНТАНА, ДАИСИЙ; АРРУЗАЗАБАЛА ВАЛМАНЬЯ, МАРИА ДЕ ЛОУРДЕС; МОЛИНА КЕВАС, ВИВИАН; ГОНЗАЛЕЗ КАНАВАСИОЛО,
ВИКТОР, ЛУИС (CU)
(73) Патентообладатель: ЛАБОРАТОРИОС
ДАЛМЕР С.А. (CU)
(56) CU 21519 A1, 1987.
CN 1184670, 1998.
(57)
1. Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики доброкачественной гиперплазии предстательной железы, простатита, алопеции и гирсутизма, получаемая из зеленых или спелых плодов королевской пальмы Roystonea regia, содержащая смесь
первичных жирных кислот с 8-28 атомами углерода, включающую каприловую кислоту,
каприновую кислоту, лауриновую кислоту, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, пальмитолеиновую кислоту, стеариновую кислоту и смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты и линоленовой кислоты, при следующем их соотношении, мас. %:
каприловая кислота
до 3,0
каприновая кислота
до 3,0
лауриновая кислота
3,0-40,0
миристиновая кислота
4,0-15,0
пальмитиновая кислота
10,0-80,0
пальмитолеиновая кислота
0,15-20,0
стеариновая кислота
0,1-5,0
смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты и линоленовой кислоты
3,0-50,0.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что выполнена в виде
твердого препарата, представляющего собой капсулы, желатинизированные капсулы, таблетки, в виде эмульсии, настоек, бальзамов для орального применения, а также в виде свечей или шампуней местного действия.
BY 12547 C1 2009.10.30
3. Способ получения фармацевтической композиции из плодов королевской пальмы
Roystonea regia по п. 1, включающий высушивание плодов, измельчение до размера частиц менее 5000 мкм, щелочной гидролиз гидроксидами щелочных или щелочноземельных
металлов или гидроксидом аммония, экстракцию спиртами с 1-3 атомами углерода или
углеводородами с 5-8 атомами углерода при нагревании и перемешивании, удаление органического растворителя, фильтрацию и выпаривание до сухого состояния.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что углеводороды выбирают из группы, включающей пентан, гексан, гептан и октан, а спирты выбирают из группы, включающей метанол, этанол, н-пропанол и 2-пропанол.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности
к новой фармацевтической композиции и способу ее получения из плодов королевской
пальмы (Roystonea regia) для профилактики и лечения доброкачественной гиперплазии
предстательной железы, простатита, алопеции и гирсутизма. Композиция в соответствии с
настоящим изобретением состоит из смеси первичных жирных кислот. Жирные кислоты
содержат от 8 до 28 атомов углерода, в частности от 8 до 18 атомов углерода. Более конкретно, смесь состоит из насыщенных с неразветвленной цепью свободных жирных кислот с 8, 10, 12, 14, 16 и 18 атомами углерода и мононенасыщенных свободных жирных
кислот с атомами углерода в соотношении 16:1 и 18:1.
Настоящую композицию получают из плодов королевской пальмы, которые предварительно высушивают и измельчают. Далее растительный материал подвергают умеренному
щелочному гидролизу до получения омыленного продукта и селективной экстракции
спиртами или углеводородами при нагревании или перемешивании, удалению органического растворителя, фильтрации и выпариванию до сухого состояния.
Полученные таким образом смеси аналогичны активному ингредиенту, содержащемуся в различных фармацевтических средствах, для лечения доброкачественной гиперплазии
предстательной железы и простатита, а также других заболеваний, таких как алопеция и
гирсутизм.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, т.к. полученная фармацевтическая композиция также может быть использована в фармацевтических средствах в качестве лекарственных препаратов для лечения доброкачественной
гиперплазии предстательной железы, простатита, алопеции и гирсутизма.
Простата является железой, расположенной под мочевым пузырем, и доброкачественная гиперплазия предстательной железы является заболеванием, поражающим более 50 %
мужчин старше 50 лет. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы заключается в разрастании мышечной ткани и эпителиальной структуры, которое может привести
к затруднению мочеиспускания, в результате чего во многих случаях требуется хирургическое вмешательство для устранения симптомов задержки мочи, таких как нарушение
мочеиспускания, включая никтурию (Madsen and Bruskewitz, Curr Opinion Nephrol Hipert
4: 455-459, 1995). Несмотря на то что хирургическое вмешательство, в частности трансуретальная резекция, являлось общепринятым лечением пациентов, страдающих этой патологией, в последнее время появилось множество других способов лечения (Oesterling,
New Engl. J. Med 332: 99-109, 1995; Geller et al, J. Clin. Endocrinol Metab. 80, 745-756,
1995), которые включают неинвазивную хирургию и медикаментозное лечение с применением, например, ингибиторов фермента 5α-редуктазы, антагонистов альфа-адренергических рецепторов и фитотерапевтических экстрактов.
Мужские половые гормоны, в основном тестостерон, играют исключительно важную
роль в патологической этиологии данного заболевания, трансформируясь через 5α-редуктазу
в более активное производное - дигидротестостерон, который связывает андрогенные рецепторы, тем самым способствуя синтезу протеина и последующему клеточному росту. Следова2
BY 12547 C1 2009.10.30
тельно, повышенная активность 5α-редуктазы может привести к возникновению доброкачественной гиперплазии предстательной железы, так как у пациентов, страдающих от такой
патологии, проявляются повышенные в 4-6 раз уровни дигидротестостерона.
Точная причина доброкачественной гиперплазии предстательной железы неясна, но
явно обусловлена наличием яичек, и частотность этого заболевания возрастает с возрастом. Андроген, ответственный за рост простаты, является дигидротестостероном, образующимся в простате из тестостерона путем реакции, катализируемой ферментом 5αредуктазы. Проведенные исследования показали, что рост простаты непосредственно обусловлен повышением уровня дигидротестостерона. С другой стороны, у мужчин старше
50 лет увеличивается образование эстрадиола по сравнению с андрогенами, при этом было
обнаружено, что эстрогены действуют комбинированно с дигидротестостероном, вызывая
гиперплазию предстательной железы в экспериментальных моделях.
Симптомы доброкачественной гиперплазии предстательной железы связаны с закупоркой или раздражением уретры, создающими дискомфорт для пациента. Эти симптомы
включают никтурию, дизурию (боль при мочеиспускании), снижение объема и напора потока мочи, чувство неполного опорожнения мочевого пузыря и задержку мочи. Большинство из симптомов проявляются постепенно, но, когда нарушения становятся более
выраженными, симптомы ухудшаются, в результате чего требуется применение фармакологической терапии.
Таким образом, α-адрегенергические антагонисты, такие как альфузосин, доксазосин,
теразосин и т.д. (Chappie, Eur. Urol 29, 129-144, 1996), и ряд растительных экстрактов нашли
широкое применение для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
В настоящее время фитотерапевтическая продукция широко применяется в Европе и Соединенных Штатах Америки, составляя при этом 80 % от всех лекарственных препаратов,
предписываемых для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы.
В частности, популярными являются экстракты из плодов пальмы сереноа (Sabal serrulata, син. Serenoa repens) и из корней Urtica dioica. Было проведено клиническое контролируемое исследование двойным слепым методом для сравнения воздействия экстрактов
пальмы сереноа и финастерида, сильно действующего ингибитора 5α-редуктазы, демонстрирующих аналогичную эффективность при лечении этими двумя препаратами после
6 месяцев терапии (Carraro et al, Prostate 29, 231-240, 1996; Marks et al Journal of Urology
163: 1451-1456, 2000). С другой стороны, экстракт из корней Urtica dioica клинически использовался для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. Гистологические и биологические данные указывают на то, что экстракты корня оказывают
влияние на рост клеток простаты, вызываемый андрогенами.
Механизм действия пальмы сереноа изучен не полностью, и, вероятно, действие экстракта обусловлено более чем одним механизмом. Таким образом, исследователи подтвердили, что он способен оказывать неконкурентное подавление альфа-адренергических
рецепторов, указывая на то, что механизм аналогичен механизму тамсулозина. Другие авторы считают, что пальма сереноа обеспечивает эпителиальное сокращение (сжатие), возможно, обусловленное разрывом железы, что указывает на механизм, аналогичный
механизму финастерида, при котором происходит подавление фермента 5α-редуктазы,
что, вероятно, является основным механизмом (Niederprum et al, Annals N.Y. Acad Sci,
768, 227-30, 1995).
Андрогенная алопеция широко распространена как среди мужчин, так и среди женщин,
поскольку облысение непосредственно связано с уровнями фермента 5α-редуктазы, при
этом андроген, связанный с облысением, является дигидротестостероном, образуемым из
тестостерона за счет действия этого фермента. Таким образом, повышенные уровни фермента 5α-редуктазы были обнаружены в лобной зоне лысых мужчин (Bingham KD et al, J.
Endocrinology 57, 111, 1973), в то время как мужчины с синдромом недостаточности фермента 5α-редуктазы не страдают от облысения (Ebling FJ, Clin Endocrinol Metab 319, 1986).
3
BY 12547 C1 2009.10.30
Как было продемонстрировано, облысение является широко распространенным явлением, которое может начаться непосредственно после наступления половой зрелости, в
результате чего есть необходимость в разработке продукта, позволяющего предотвратить
облысение как у мужчин, так и у женщин.
Как известно, липидные экстракты из пальмы сереноа подавляют образование гормона дигидротестостерона, блокируя 50 % мест связывания дигидротестостерона с рецепторами и его проникновение в ядра предстательных клеток, тем самым мощно подавляя
активность фермента 5α-редуктазы. Поэтому экстракты плодов таких видов растений использовались для лечения алопеции (WO 97/02041, USA 6,019,976, WO 98/33472).
Экстракт из пальмы сереноа, серийно производимый и используемый для лечения
доброкачественной гиперплазии предстательной железы, представляет собой смесь жирных кислот, содержащих стерины, и высокомолекулярные спирты, полученные из плодов
растения в соответствии с различными опубликованными способами (ЕРО 541853, ЕРО
492305, ЕРО 250953, USA Patent 6,039,950, Cristoni, Fitoterapia 68, 355, 1997; DeSwaef Nat
Prod Letters 7, 223, 1996). Тем не менее, некоторые авторы сообщали об исключительно
простом и экономичном способе, аналогичном способу, заявляемому в настоящем изобретении, для использования плодов Аrесасеае, в данном случае - плодов Roystonea regia.
Способ изготовления композиции в соответствии с настоящим изобретением основан
на высушивании спелых плодов Roystonea regia. Высушенные плоды измельчают для получения тонкомолотого порошка с размером частиц < 5000 мкм. Далее указанный порошок подвергают щелочному гидролизу, проводимому с использованием щелочных,
щелочноземельных металлов или гидроксидом аммония; затем проводят селективную
экстракцию в органических растворителях или сверхкритическую хроматографию с использованием СО2.
Гидролизованный растительный материал экстрагирует в обычном экстракторе для
экстракции жидкостью твердого тела, в котором указанные жирные кислоты отделяются
от других компонентов, присутствующих в плодах, путем селективной экстракции в соответствующих растворителях, таких как спирты, содержащие от 1 до 3 атомов углерода, и
углеводороды, содержащие от 5 до 8 атомов углерода. Такие растворители включают метанол, этанол, н-пропанол, 2-пропанол, гексан, пентан, гептан и октан.
Выход продукта составляет от 5 до 20 %. Состав полученной смеси кислот включает
насыщенные кислоты, содержащие 12, 14, 16 и 18 атомов углерода, а также ненасыщенные кислоты с атомами углерода в соотношении 16:1 и 18:1, количественный и качественный состав которых приведен в табл. 1.
Таблица 1
Состав жирных кислот, присутствующих в липидном экстракте плодов
Roystonea regie
Компонент
Относительный процент кислот в смеси
Каприловая кислота (С8:0)
до 3,0
Каприновая кислота (С10:0)
до 3,0
Лауриновая кислота (С12:0)
3,0-40,0
Миристиновая кислота (С14:0)
4,0-15,0
Пальмитиновая кислота (16:0)
10,0-80,0
Пальмитолеиновая кислота (16:1)
0,15-20,0
Стеариновая кислота (С18:0)
0,1-5,0
Смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты
3,0-50,0*
и линоленовой кислоты
* Количественно определено как сумма хроматографического пика, в котором элюирует олеиновая кислота (60-70 % от пика), линолевая кислота (25-40 % от пика) и линоленовая кислота (< 10 % от хроматографического пика).
4
BY 12547 C1 2009.10.30
Общая оценка вещества, полученного из плодов Roystonea regia в соответствии с настоящим изобретением, показывает, что такой состав является исключительно безопасным,
хорошо переносимым и обладает соответствующими преимуществами, подтвержденными
результатами тестов на токсичность, проведенными на грызунах, у которых не была выявлена токсичность, вызванная с веществом.
Задача настоящего изобретения детально описана ниже со ссылками на нижеприведенные примеры, но не ограничивается ими.
Пример 1.
Свежие плоды Roystonea regia весом 5 кг помещают в печь при контролируемой температуре 45 °С на 7 дней. Далее, высушенные плоды измельчают в мельнице до частиц
размером от 1500 до 2000 мкм, и 1000 г такого порошка помещают в смесительный реактор и подвергают щелочному гидролизу. Далее продукт экстрагируют с помощью 10 л
гексана при температуре до 50 °С и постоянном перемешивании в течение 36 ч. Затем
продукт фильтруют и выпаривают до сухого состояния при 50 °С в вакууме. Вес полученного экстракта составляет 98,5 г, и в табл. 2 приведен его состав, определенный с помощью газовой хроматографии.
Таблица 2
Состав жирных кислот, присутствующих в липидном
экстракте плодов Roystonea regia
Относительный процент
Компонент
кислот в смеси
Каприловая кислота (С8:0)
1,0
Каприновая кислота (С10:0)
1,0
Лауриновая кислота (С12:0)
5,7
Миристиновая кислота (С14:0)
4,4
Пальмитиновая кислота (16:0)
75,1
Пальмитолеиновая кислота (16:1)
1,9
Стеариновая кислота (С18:0)
1,9
Смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты и линоленовой
9,1
кислоты
Пример 2.
Свежие плоды Roystonea regia весом 10 кг помещают в печь при контролируемой температуре 45 °С на 7 дней. Далее, высушенные плоды измельчают в мельнице до частиц
размером < 1500 мкм, и 1500 г такого порошка подвергают щелочному гидролизу. Далее
продукт экстрагируют при 60 °С в течение 48 ч в экстракторе Soxhlet, содержащем 10 л
этанола. Затем органический раствор экстрагируют, фильтруют и выпаривают до сухого
состояния при 50 °С в вакууме. Полученный экстракт взвешивают и анализируют с помощью газовой хроматографии, состав экстракта приведен в табл. 3.
Таблица 3
Состав жирных кислот, присутствующих в липидном экстракте
плодов Roystonea regia
Компонент
Относительный процент кислот в смеси
Каприловая кислота (С8:0)
1,0
Каприновая кислота (С10:0)
1,0
Лауриновая кислота (С12:0)
3,2
Миристиновая кислота (С14:0)
5,5
Пальмитиновая кислота (16:0)
27,1
Пальмитолеиновая кислота (16:1)
18,5
Стеариновая кислота (С18:0)
0,3
Смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты
43,4
и линоленовой кислоты
5
BY 12547 C1 2009.10.30
Пример 3.
Свежие плоды Roystonea regia весом 5 кг помещают в печь при контролируемой температуре 45 °С на 7 дней. Затем высушенные плоды измельчают в мельнице до частиц
размером от 1500 до 1800 мкм, и 1000 г такого порошка подвергают щелочному гидролизу. Далее продукт экстрагируют в смесительном реакторе, содержащем 10 л гептана, при
температуре до 60 °С и постоянном перемешивании в течение 50 ч. Затем растворитель
экстрагируют и выпаривают до сухого состояния при 65 °С в вакууме. Полученный экстракт взвешивают и анализируют с помощью газовой хроматографии, состав экстракта
приведен в табл. 4.
Таблица 4
Состав жирных кислот, присутствующих в липидном
экстракте плодов Roystonea regia
Относительный процент
Компонент
кислот в смеси
Каприловая кислота (С8:0)
1,0
Каприновая кислота (С10:0)
1,0
Лауриновая кислота (С12:0)
3,16
Миристиновая кислота (С14:0)
12,7
Пальмитиновая кислота (16:0)
13,0
Пальмитолеиновая кислота (16:1)
1,7
Стеариновая кислота (С18:0)
2,3
Смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты и линолено36,6
вой кислоты
Пример 4.
Свежие плоды Roystonea regia весом 5 кг помещают в печь при контролируемой температуре 45 °С на 7 дней. Затем высушенные плоды измельчают в мельнице до частиц
размером от 1000 до 1800 мкм, и 1000 г такого порошка обрабатывают гидроксидом аммония, смачивая весь объем порошка. Далее порошок экстрагируют в смесительном реакторе, содержащем 10 л гексана, при 55 °С и постоянном перемешивании в течение 36 ч.
Затем растворитель удаляют и выпаривают до сухого состояния при 50 °С в вакууме.
Полученный экстракт взвешивают и анализируют с помощью газовой хроматографии, состав экстракта приведен в табл. 5.
Таблица 5
Состав жирных кислот, присутствующих в липидном
экстракте плодов Roystonea regia
Относительный процент
Компонент
кислот в смеси
Каприловая кислота (С8:0)
1,0
Каприновая кислота (С10:0)
1,0
Лауриновая кислота (С12:0)
19,7
Миристиновая кислота (С14:0)
9,7
Пальмитиновая кислота (16:0)
14,8
Пальмитолеиновая кислота (16:1)
0,2
Стеариновая кислота (С18:0)
3,8
Смесь олеиновой кислоты, линолевой кислоты и линоленовой
49,8
кислоты
Пример 5.
Для оценки воздействия липидного экстракта из плодов Roystonea regia самцов белой
мыши OF1 весом 30-40 г адаптировали к лабораторным условиям в течение 7 дней при
контролируемой температуре (25 ± 2 °С) и влажности. После периода адаптации животных произвольно разделили на различные экспериментальные группы. Экстракт из Roys6
BY 12547 C1 2009.10.30
tonea regia суспендировали в растворителе Tween-20/H2O, и лечение проводилось путем
орального введения препарата (5 мл/кг), при этом контрольные животные получали растворитель. Отложенный тестостерон растворяли в растительном масле и вводили внутримышечно в виде разовой дозы 100 мг/кг. Животных произвольно распределили на
следующие группы: 1) отрицательный контроль; 2) положительный контроль (животным
делали инъекцию тестостерона и орально вводили растворитель); 3), 4) и 5) животным
вводили внутримышечно тестостерон и орально экстракт плодов Roystonea regia при дозе
200, 400 и 800 мг/кг соответственно; 6) животным делали инъекцию тестостерона и
орально вводили экстракт плодов пальмы сереноа при дозе 400 мг/кг.
После завершения периода введения доз (14 дней) мышей умерщвили, их брюшные
полости вскрыли путем разреза по вентральной срединной линии, предстательные железы
отделили и взвесили. Сравнение между группами, принимавшими препараты, и контрольными группами проводили с помощью U-теста Mann Whitney. Результаты приведены в
табл. 6.
Как видно, отложенный тестостерон (100 мг/кг), вводимый внутримышечно, привел к
значительному увеличению веса простаты и отношению веса простаты к весу тела по
сравнению с отрицательной контрольной группой.
Таблица 6
Воздействие липидного экстракта плодов Roystonea regia на мышей
с искусственной гиперплазией предстательной железы
Отношение веса
Дозы
% подавЛечение
Кол-во Вес тела
Вес простаты
простаты к весу
(мг/кг)
ления
тела
Контроль 10
36,0±0,7
25,7±3,2
0,72±0,09
Контроль +
10
35,5±0,68 54,7±3,8 + + +
1,55±0,12 + + +
Roystonea
200
10
35,4±0,77 38,7±2,6**55,1
1,09±0,08*
55,4
regia
Roystonea
400
9
33,7±1,2
32,3±1,2**77,2
0,96±0,03**
71,8
regia
Roystonea
800
11
33,6±0,7 26,6±1,9***96,6
0,78±0,04***
92,7
regia
Пальма се400
8
34,3±0,84 36,6±2,5**62,1
1,06±0,06**
59,0
реноа
Вес тела (г), вес простаты (мг), + + + - р < 0,001 Sham по отношению к контрольной
группе, U-тесту Mann Whitney, * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001, сравнение с контрольной группой.
Оральное введение препаратов для лечения с использованием композиций в соответствии с настоящим изобретением (200-800 мг/кг) в течение 2 недель позволило в значительной степени подавить в зависимости от дозы увеличение размера простаты,
вызванное тестостероном, в результате чего было достигнуто подавление в размере 92,7 %
при максимальной дозе 800 мг/кг, а также существенно снижено в зависимости от дозы
отношение веса простаты к весу тела, в результате чего был достигнут процент подавления в размере 96,6 % при дозе 800 мг/кг. С другой стороны, лечение повторными дозами с
использованием экстракта плодов пальмы сереноа (400 мг/кг) позволило подавить увеличение простаты на 62 % и снизить отношение вес простаты - вес тела на 59 %, в результате чего он оказался менее эффективным, чем экстракт плодов Roystonea regia, который
при аналогичной дозе позволил достичь подавления в размере 77 и 72 % соответственно.
Результаты, полученные в данном эксперименте, демонстрируют эффективность экстракта плодов Roystonea regia при лечении гиперплазии предстательной железы, искусственно вызванной у мышей, при этом наблюдалось сокращение размера простаты в
7
BY 12547 C1 2009.10.30
зависимости от дозы, в результате чего было достигнуто подавление в размере 96,6 % при
дозе 400 мг/кг. Таким образом, был достигнут более высокий процент подавления по
сравнению с аналогичными дозами экстракта плодов пальмы сереноа.
Пример 6.
Для оценки воздействия липидного экстракта из плодов Roystonea regia самцов крыс
Sprague Dawley весом 250-270 г адаптировали к лабораторным условиям в течение 7 дней
при контролируемой температуре (25±2 °С) и влажности. После периода адаптации животных произвольно разделяли на различные экспериментальные группы.
Экстракт из Roystonea regia суспендировали в растворителе Tween-20/Н2О, и лечение
проводили путем орального приема препарата (5 мл/кг), при этом контрольные животные
получали растворитель. Пропионат тестостерона растворяли в растительном масле и
впрыскивали подкожно при 4 мг/кг в течение 14 дней.
Животных произвольно распределили на 6 следующих групп: 1) отрицательный контроль + растительное масло; 2) положительный контроль (растворитель) + тестостерон; 3),
4) и 5) животным вводили внутримышечно тестостерон и орально экстракт плодов Roystonea regia при дозах 50, 200 и 400 мг/кг соответственно; 6) животным впрыскивали внутримышечно тестостерон и вводился орально экстракт плодов пальмы сереноа при дозе
400 мг/кг. После завершения периода введения доз (2 недели) крыс умерщвляли и кровь
полностью спускали, их брюшные полости вскрывали путем разреза по вентральной срединной линии, предстательные железы отделяли и взвешивали. Сравнение между группами, принимавшими препараты, и контрольными группами, проводили с помощью U-теста
Mann Whitney. Результаты приведены в табл. 7. Как видно, отложенный тестостерон
(100 мг/кг), вводившийся внутримышечно, привел к значительному увеличению веса простаты и отношения веса простаты к весу тела по сравнению с отрицательной контрольной
группой.
Таблица 7
Воздействие липидного экстракта плодов Roystonea regia на крыс
с искусственной гиперплазией предстательной железы
Отношение
Дозы Кол% подав- веса проста- % подавЛечение
Вес тела
Вес простаты
(мг/кг) во
ления
ты к весу теления
ла
Контроль 0
10 354,7±6,9
576,03±51,4
1,6±0,15
Контроль +
0
10 339,5±6,5 916,07±34,4 + + +
2,7±0,12 + + +
Roystonea
50
9 322,5±10,2
895,4±34,6
6
2,7±0,11
0
regia
Roystonea
200
9 335,3±6,4
838,05±30,9
23
2,5±0,09
19
regia
Roystonea
400
10 342,4±6,4 776,01 + 35,4*
41
2,2 + 0,11*
45
regia
Вес тела (г), вес простаты (мг), + + + - р < 0,0001 Sham по отношению к контрольной
группе, * р < 0,05, ** р < 0,01, *** сравнение с контрольной группой, U-тест Mann
Whitney.
Как видно, подкожное введение тестостерона при дозе 4 мг/кг в течение 14 дней привело к значительному увеличению веса простаты и отношения веса простаты к весу тела
по сравнению с группой отрицательного контроля. Оральное введение экстрактов плодов
Roystonea regia и пальмы сереноа (400 мг/кг) в течение 2 недель позволило в значительной
степени подавить увеличение размера простаты, вызванное впрыскиванием тестостерона,
в результате чего было достигнуто подавление в размере 41 и 58 % соответственно. При
дозе 400 мг/кг экстракт плодов Roystonea regia также позволил значительно снизить от8
BY 12547 C1 2009.10.30
ношение вес простаты - вес тела, в результате чего был достигнут процент подавления в
размере 45 %.
Результаты, полученные в данном эксперименте, указывают на эффективность лечения экстрактом плодов Roystonea regia при дозе 400 мг/кг в течение 14 дней у крыс, которым впрыскивался тестостерон, при этом наблюдалось ингибирование увеличения
размера простаты по отношению к весу тела при лечении двумя видами экстракта (45 %),
что является приемлемым для потенциального терапевтического применения экстракта
плодов королевской пальмы.
Пример 7.
Для оценки воздействия экстракта из плодов Roystonea regia самцов крыс Sprague
Dawley весом 250-270 г адаптировали к лабораторным условиям в течение 7 дней при
контролируемой температуре (25±2 °С) и влажности. После периода адаптации животных
произвольно разделяли на различные экспериментальные группы. Пропионат тестостерона растворяли в растительном масле и впрыскивали подкожно при ежедневных дозах 3 и 4
мг/кг в течение 14 дней.
Экстракт из плодов Roystonea regia суспендировали в растворителе Tween-20/H2O и
лечение проводили путем орального приема препарата (5 мл/кг), при этом контрольные
животные получали индифферентное вещество.
Крысы, которым был введен тестостерон при дозе 3 мг/кг, были распределены по
5 экспериментальным группам: 1) отрицательный контроль + растительное масло; 2) положительный контроль (индифферентное вещество.) + тестостерон; 3), 4) экстракт плодов
Roystonea regia при дозах 50 и 200 мг/кг + тестостерон; 5) экстракт плодов пальмы сереноа
при дозе 200 мг/кг + тестостерон. В свою очередь, животные, которые получали тестостерон при дозе 4 мг/кг, были распределены по 6 экспериментальным группам:
1) отрицательный контроль (растительное масло); 2) положительный контроль (растворитель) + тестостерон; 3), 4) и 5) экстракт плодов Roystonea regia при дозах 50, 200 и
400 мг/кг + тестостерон; 6) экстракт плодов пальмы сереноа при дозе 400 мг/кг + тестостерон. Лечение с применением препаратов проводили в течение 14 дней. Результаты
приведены в табл. 8 и 9.
Таблица 8
Воздействие липидного экстракта плодов Roystonea regia на крыс
с искусственной гиперплазией предстательной железы
Дозы
Лечение
Кол-во
Вес тела
Вес простаты
(мг/кг)
Контроль 0
9
507,0±35
1,43±0,09
Контроль +
0
8
886,0±78,8 + +
2,69±0,26 + + +
Roystonea regia
50
10
684,8±34,7*
2,05±0,11*
Roystonea regia
200
10
693,1±36,5*
2,11±0,13а
Пальма сереноа
200
10
710,0±43,31t
2,08 + 0,14а
Вес тела (г), вес простаты (мг), + + - р < 0,01; + + + - р < 0,001, сравнение с Sham;
* р < 0,05; а - р = 0,05, сравнение с контрольной группой (U-тест Mann Whitney).
Таблица 9
Воздействие липидного экстракта плодов Roystonea regia на крыс
с искусственной гиперплазией предстательной железы
Отношение
Дозы КолЛечение
Вес тела
Вес простаты
вес проста% подавления
(мг/кг) во
ты/вес тела
Контроль 0
10 354,7±6,90
576,03±51,4
1,6±0,15
Контроль +
0
10 339,5±6,50 916,07±34,4 + + + 2,7±0,12 + + +
9
BY 12547 C1 2009.10.30
Лечение
Roystonea
regia
Roystonea
regia
Roystonea
regia
Пальма сереноа
Дозы Кол(мг/кг) во
Вес тела
Вес простаты
Продолжение таблицы 9
Отношение
вес проста% подавления
ты/вес тела
50
9
322,5 + 10,2
895,40±34,6
2,7±0,11
6,0
200
9
335,3±6,40
838,05±30,9
2,5±0,09
22,9
400
10
342,4±6,40
776,01±35,4*
2,2±0,11*
41,2
400
10
328,5±6,80
720,1 ±41,8**
2,2±0,12*
57,6
Вес тела (г), вес простаты (мг), + + - р < 0,01; + + + - р < 0,001, сравнение с Sham,
* р < 0,05, ** р < 0,01, t - p = 0,06, сравнение с контрольной группой + (U-тест Mann Whitney).
Пример 8.
В исследовании использовали кроликов весом 4-5 кг. Длину шерсти каждого кролика
измеряли перед применением и после применения экстракта плодов Roystonea regia. Замер
длины шерсти проводили до, в течение и после орального введения экстракта плодов
Roystonea regia с интервалом 4 недели между каждым измерением. После воздействия седативным средством у каждого животного выбривали дорсальный участок площадью
приблизительно в один квадратный дюйм и взвешивали сбритую с этого участка шерсть.
Кролики с выбритым участком шерсти были разделены на 4 группы, по пять кроликов
в каждой группе, при этом кроликам в первой группе ежедневно вводили раз в день дозу в
400 мг экстракта плодов Roystonea regia, в то время как кролики 2-й группы получали
ежедневно раз в день дозу индифферентного вещества. В свою очередь, кролики 3-й группы ежедневно получали 400 мг экстракта плодов Roystonea regia, разделенного на две дозы по 200 мг, а кролики в 4-й группе получали индифферентное вещество, разделенное на
две дозы, как в 3-й группе.
Сравнение изменений веса шерсти, растущей на указанных участках, было проведено
с использованием дисперсионного анализа для получения сравнительных данных между
группами, и был проведен тест Wilcoxon для парных образцов с целью определения изменений внутри групп. Изменения рассматривались как существенно различные для
р < 0,05.
Результаты данного исследования продемонстрировали, что шерсть у кроликов из 1-й
и 3-й групп росла намного быстрее, чем у кроликов из 2-й и 4-й групп, а также ее вес значительно превышал начальный вес, что указывает на то, что экстракт плодов Roystonea
regia можно использовать для лечения алопеции.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
10
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
157 Кб
Теги
патент, by12547
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа