close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12584

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 12584
(13) C1
(19)
A 61K 31/455
СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ПРООКСИДАНТНОАНТИОКСИДАНТНОГО БАЛАНСА И ФУНКЦИОНАЛЬНОГО
СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ ПРИ ИШЕМИИ-РЕПЕРФУЗИИ
(21) Номер заявки: a 20080139
(22) 2008.02.08
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Автор: Ходосовский Михаил Николаевич (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(56) ХОДОСОВСКИЙ М.Н. Теоретические
и практические вопросы медицины и
фармации. - Витебск, 2000. - С. 32-33.
ХОДОСОВСКИЙ М.Н. Роль кислородзависимых процессов в патогенезе реперфузионных повреждений печени:
Автореферат диссертации. - Минск,
2003. - С. 4-7, 16-17.
BY 12584 C1 2009.10.30
(57)
Применение 1-метилникотинамида в качестве средства для коррекции прооксидантноантиоксидантного баланса и функционального состояния печени при ишемии-реперфузии.
Изобретение относится к области медицины, а именно к применению лекарственных
средств по новому назначению.
Постишемические повреждения печени часто встречаются в клинике при резекциях,
трансплантации органа, а также при геморрагическом шоке с последующим возмещением
кровопотери (1, 5). Патогенетическими звеньями данных повреждений являются окислительный стресс, воспалительная реакция с иммиграцией лейкоцитов паренхиму органа,
нарушения микроциркуляции, что суммарно приводит к гибели гепатоцитов от некроза
или апоптоза (2, 3, 4). Установлено, что активация свободнорадикальных процессов, таких
как перекисное окисление липидов (ПОЛ), и истощение факторов антиоксидантной защиты способствуют повреждению гепатоцитов в постишемическом периоде (2, 4).
Известно применение природных антиоксидантов (α-токоферол и аскорбиновая кислота) (5), аллопуринола (ингибитора ксантиноксидазы) (6), полиэтиленгликольсупероксиддисмутазы (продолжительно действующей формы данного антиоксидантного
фермента) (7) для коррекции свободнорадикальных процессов при синдроме ишемииреперфузии печени.
Недостатком большинства известных средств является их малое влияние на процессы
микроциркуляции в печени в постишемическом периоде. Нарушение последних может
оказывать существенное влияние на тяжесть реперфузионных повреждений печени (3).
Окислительный стресс может возникать в сосудах печени (8), а вышеперечисленные средства оказывают свое протективное влияние преимущественно на гепатоциты. Кроме того,
аскорбат при дозе более 100 мг/кг может проявлять прооксидантные свойства (9, 10).
BY 12584 C1 2009.10.30
Задача изобретения - расширение арсенала средств, нормализующих прооксидантноантиоксидантный баланс и функциональное состояние печени при ишемии-реперфузии.
Поставленная задача решается применением 1-метилникотинамида в качестве средства для коррекции прооксидантно-антиоксидантного баланса и функционального состояния печени при ишемии-реперфузии.
Известно применение 1-метилникотинамида в составе композиций для лечения кожных заболеваний и нарушений (Патент RU 2199319, опубл. 2003.02.27). Однако из известных сведений с очевидностью не вытекает, что данный препарат можно использовать для
нормализации прооксидантно-антиоксидантного баланса и уменьшения тяжести постишемических повреждений печени.
Работа выполнена на взрослых крысах-самцах Wistar массой 360-440 г, предварительно выдержанных в стандартных условиях вивария. Под комбинированным наркозом (тиопентал натрия 30 мг/кг, калипсол 100 мг/кг) ишемию печени вызывали наложением
сосудистого зажима на a. hepatica propria и v. portae в течение 30 мин, после снятия зажима реперфузионный период длился 120 мин. Вводили силиконный катетер в правое предсердие для получения смешанной венозной крови. Забор образцов крови для оценки
продуктов ПОЛ и факторов антиоксидантной системы осуществляли до, в конце ишемии
и через 120 мин после ее прекращения. Ткани печени для оценки показателей прооксидантно-антиоксидантного состояния брали в конце реперфузии. В качестве контроля использовали образцы печени, взятые у животных до ишемии (n = 6). Степень повреждения
печени оценивали по активности в плазме крови аланин- и аспартатаминотрансфераз
(АлАТ и АсАТ соответственно) по Burtis C.A., et al. (1999), используя стандартный набор
реактивов фирмы "Cormay" (Польша).
Животных разделили на 2 экспериментальные группы: в 1-ой - моделировали ишемию-реперфузию печени (n = 8), во 2-ой - за 10 мин до ишемии-реперфузии печени интраперитонеально вводили 1-метилникотинамид в дозе 100 мг/кг (n = 8).
Изучали следующие показатели прооксидантно-антиоксидантного состояния: диеновые конъюгаты (ДК), основания Шиффа (ОШ), α-токоферол, ретинол и активность каталазы. Содержание ДК в биологическом материале определяли методом ультрафиолетовой
спектрофотометрии при длине волны 233 нм, типичной для конъюгированных диеновых
структур гидроперекисей липидов. Уровень ОШ определяли по интенсивности флюоресценции хлороформного экстракта при длинах волн возбуждения и эмиссии 344 нм и 440 нм,
соответственно на спектрофлюориметре F-4010 фирмы "Hitachi". Содержание α-токоферола и ретинола изучали методом флюориметрического определения по интенсивности
флюоресценции гексанового экстракта. В качестве стандарта использовались α-токоферол
и ретинол фирмы "Sigma". Каталазная активность в биологическом материале оценивалась спектрофотометрическим методом, основанным на способности перекиси водорода
образовывать с солями молибдена стойко окрашенный комплекс. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием t-критерия Стьюдента.
Установлено, что у животных 1-ой группы у опытных крыс на 120-й мин реперфузии
в смешанной венозной крови содержание продуктов ПОЛ увеличивалось. Так уровень ДК
в плазме крови повысился по отношению к исходному на 264,4 % (p < 0,05), а флюоресценция продуктов со свойствами ОШ возросла на 633,3 % (p < 0,05). Те же параметры
ПОЛ были исследованы в образцах печени, где их содержание к концу реперфузионного
периода также возрастало. Одновременно выявлено, что на протяжении ишемииреперфузии печени в крови и тканях печени крыс снижалось содержание ряда антиоксидантов. Так уровень α-токоферола в плазме смешанной венозной крови к концу реперфузионного периода понизился на 19 % (p < 0,05), а ретинола - на 35,8 % (p < 0,05).
Активность каталазы эритроцитов и гомогената печени в конце реперфузии по отношению к исходным уровням падала на 45,8 % (p < 0,05) и 42,7 % (p < 0,05) соответственно.
Содержание α-токоферола и ретинола в тканях печени на 120-й мин реперфузии также
2
BY 12584 C1 2009.10.30
понижалось. Данные результаты указывают на интенсификацию процессов ПОЛ и на истощение механизмов антиоксидантной защиты у экспериментальных животных при ишемииреперфузии печени, что может способствовать развитию постишемических повреждений
органа. Действительно, активность АлАТ и АсАТ в плазме крови на 120 мин реперфузии
возрастала по отношению к исходной в 8,5 (p < 0,001) и в 8,3 раза (p < 0,001) соответственно, указывая на развитие тяжелых повреждений печени в конце постишемического периода у животных 1-ой группы (таблица).
В таблице показано влияние 1-метилникотинамида на показатели прооксидантноантиоксидантного баланса и активность трансаминаз крови при ишемии-реперфузии печени у крыс (M ± m).
Влияние 1-метилникотинамида на показатели
прооксидантно-антиоксидантного баланса
и активность трансаминаз крови
при ишемии-реперфузии печени у крыс (М ± m)
Показатель
Диеновые
коньюгатыпл,
∆Е233/мл
Основания
Шиффапл, ЕД/мл
α-токоферолпл,
мкмоль/л
ретинолпл,
мкмоль/л
Каталазаэр,
ммоль/л*гНb*сек
АлАТ, ЕД/л
АсАТ, ЕД/л
Ишемия-реперфузия
(1-ая группа, n = 8)
Исходный
уровень
30 мин
ишемии
120 мин реперфузии
1,03±0,06
1,8±0,2*
3,76±0,55*
Ишемия-реперфузия +
+ 1-метилникотинамид
(2-ая группа, n = 8)
Исходный 30 мин ише120 мин
уровень
мии
реперфузии
1,0±0,07
1,67±0,14*
1,51±0,09*#
22,58±3,2 58,42±6,91* 165,56±20,28* 20,04±2,78 42,34±5,24* 46,15±7,92*#
21,09±0,33 19,93±0,27* 17,09±0,35* 21,12±0,28
20,36±0,27
18,73±0,22*#
2,77±0,12
2,64±0,1
1,78±0,04*
2,61±0,14
2,35±0,1
2,07±0,07*#
0,9±0,09
2,22±0,24*
0,49±0,01*
0,98±0,08
2,35±0,16*
1,61±0,15*#
51,6±8,0
58,5±7,4
-
437,2±38,2*
484,8±20,6*
48,4±8,0
61,0±3,7
-
220,3±40,9*#
266,0±28,7*#
Примечание: * - достоверное отличие по отношению к исходному уровню в данной
группе, # - достоверное отличие по отношению к 1-ой группе в соответствующий период.
Вместе с тем у крыс, которым назначали 1-метилникотинамид, наблюдались менее
выраженные изменения активности процессов ПОЛ по отношению к животным, которые
1-метилникотинамид не получали. Так на 120-й мин реперфузии в смешанной венозной
крови содержание ДК повысилось по отношению к исходному только на 51,4 % (p < 0,05),
а флюоресценция продуктов со свойствами ОШ возросла на 130,3 % (p < 0,05). Те же параметры ПОЛ были исследованы в образцах печени, где их содержание к концу реперфузионного периода также возрастало, однако оставалось ниже, чем у животных, которым не
давали перед ишемией-реперфузией 1-метилникотинамид. Также выявлено, что у крыс,
которым давали 1-метилникотинамид, на протяжении ишемии-реперфузии печени в крови
содержание ряда антиоксидантов снижалось в меньшей степени, чем у животных без 1метилникотинамида. Так уровень α-токоферола в плазме смешанной венозной крови к
концу реперфузионного периода понизился на 11,3 % (p < 0,05), а ретинола - на 20,7 %
(p < 0,05). Активность каталазы эритроцитов в конце реперфузии пo отношению к исходным уровням, в отличие от животных без метилникотинамида, повышалась на 65,0 %
(p < 0,05). Содержание α-токоферола и ретинола в тканях печени на 120-й мин реперфузии было выше, чем у животных, которым 1-метилникотинамид не давали. Активность
3
BY 12584 C1 2009.10.30
АлАТ и АсАТ в плазме крови на 120 мин реперфузии возрастала по отношению к исходной в 4,6 (p < 0,01) и в 4,4 раза (p < 0,001) соответственно, что было достоверно ниже, чем
у животных 1-ой группы.
В целом, полученные данные свидетельствуют, что у крыс при ишемии-реперфузии
печени наблюдаются тяжелые нарушения прооксидантно-антиоксидантного баланса, которые способствуют развитию постишемических поражений органа. У крыс, получавших
1-метилникотинамид, при ишемии-реперфузии печени наблюдается улучшение параметров прооксидантно-антиоксидантного баланса и биохимических маркеров повреждения
печени по сравнению с животными, которые данный препарат не получали.
Таким образом, 1-метилникотинамид действительно нормализует прооксидантноантиоксидантный баланс и улучшает функциональное состояние печени при ишемииреперфузии.
Источники информации:
1. Glantzounis G.K., Salacinski H.J., Yang W. et al. // Liver Transpl. - 2005. - Vol. 11. No. 9. - P. 1031-1047.
2. Jaeschke H., Lemasters J.J. // Gastroenterology. - 2003. - Vol. 125. - No. 4. - P. 1246-1257.
3. Uhlmann D., Uhlmann S., Spiegel H.U. // J. Cardiovasc. Pharmacol. - 2000. - Vol. 36. No. 5. - P. S212-S214.
4. Зинчук В.В., Ходосовский М.Н. // Успехи физиол. наук. - 2006. - № 4. - С. 45-56.
5. Cerwenka H., Khoschsorur G., Bacher H. et al. // Free Radic. Res. - 1999. - Vol. 30. No. 6. - P. 463-469.
6. Jeon B.R., Yeom D.H., Lee S.M.// Shock. -2001. - Vol. 15. - No. 2. - P. 112-117.
7. Nguyen W.D., Kim D.H., Alam H.B. et al. // Crit. Care. - 1999. - Vol. 3. - No. 5. - P. 127-130.
8. Suzuki M., Fukuhara K., Unno M. et al. // Hepatogastroenterology. - 2000. - Vol. 47. No. 34. - P. 1082-1089.
9. Seo M.Y., Lee S.M. // J. Hepatol. - 2002. - Vol. 36. - No. 1. - P. 72-77.
10. Burtis C.A., Ashwood E.R., ed Tietz. Textbook of Clinical chemistry, 3rd ed Philadelphia, PA: Moss D.W., Henderson A.R., 652 (1999).
11. Патент RU 2199319, опубл. 2003.02.27.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
94 Кб
Теги
by12584, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа