close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12675

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.12.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 21/64
СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕЛЕНА В
БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ ИЛИ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
(21) Номер заявки: a 20080587
(22) 2008.05.08
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Ивашкевич Людмила Станиславовна; Зайцев Виктор Александрович; Филонов Валерий Петрович; Бутько Зинаида Трофимовна
(BY)
BY 12675 C1 2009.12.30
BY (11) 12675
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены" (BY)
(56) SU 177671, 1965.
SU 373613, 1973.
JP 2007-132790 A, 2007.
JP 2006-337036 A, 2006.
US 4731334 A, 1988.
JP 11-142387 A, 1999.
JP 2008-076253 A, 2008.04.03.
(57)
Способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого образца смесью азотной кислоты и перекиси водорода, восстановление шестивалентного
селена до четырехвалентного, получение комплекса селенистой кислоты и 2,3диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение интенсивности флуоресценции полученного комплекса с последующим определением селена в исследуемом образце, отличающийся тем, что берут образец массой 0,5-1,0 г, мокрое сжигание органической части
исследуемого образца осуществляют в микроволновом анализаторе при объемном соотношении азотной кислоты и перекиси водорода, равном 8‫׃‬2, под давлением 1,1-1,5 МПа в
течение 15-25 минут, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного ведут одновременно с удалением азотной кислоты путем добавления к минерализованному
образцу 0,5 мл 35 %-ной перекиси водорода и 1-2 мл соляной кислоты и упаривания досуха.
Изобретение относится к медицинской химии, биохимии, в частности к способам контроля содержания селена в биологических объектах, пищевых продуктах и предназначено
для лабораторных служб госэпиднадзора и других медицинских учреждений, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также исследующих обеспеченность организма человека важнейшим незаменимым
микроэлементом селеном.
Известен способ флуориметрического определения селена в биологических объектах и
пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого
образца, восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного, образование
комплекса селенистой кислоты и 2,3-диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение
интенсивности флуоресценции полученного комплекса, при этом мокрое сжигание органической части исследуемого образца осуществляют в аналитическом автоклаве смесью
BY 12675 C1 2009.12.30
азотной кислоты и перекиси водорода, взятых в объемном соотношении 2:0,5 под давлением 5-10 МПа в течение 1-2 часов, а азотную кислоту удаляют кипячением образца с добавлением перекиси водорода в течение 10 минут.
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является мокрое сжигание органической
части образца, удаление следов азотной кислоты, восстановление шестивалентного селена
до четырехвалентного, образование между селенистой кислотой и 2,3-диаминонафталином комплекса 4,5-пиазоселенола и последующее флуориметрирование данного
комплекса.
Однако указанный способ-прототип обладает следующими недостатками. Полное
окисление органической части образца достигается в течение 1-2 часов. Процесс удлиняется за счет необходимости предварительной экспозиции образца с окислительной смесью
в течение 10-12 часов, а также охлаждения автоклава после минерализации в течение 4050 минут. Кроме того, азотную кислоту, используемую при анализе в составе окислительной смеси, невозможно удалить кипячением с перекисью водорода. Присутствие остатков
азотной кислоты влияет на флуоресценцию комплекса 4,5-пиазоселенолов и приводит к
искажению результатов анализа.
Задачей заявляемого способа является сокращение времени проведения анализа, повышение точности результатов. Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ флуориметрического определения селена в биологических объектах или пищевых продуктах, включающий мокрое сжигание органической части исследуемого образца смесью азотной кислоты и перекиси водорода, восстановление
шестивалентного селена до четырехвалентного, получение комплекса селенистой кислоты
и 2,3-диаминонафталина - 4,5-пиазоселенола и измерение интенсивности флуоресценции
полученного комплекса с последующим определением селена в исследуемом образце, когда берут образец массой 0,5-1,0 г, мокрое сжигание органической части исследуемого
образца осуществляют в микроволновом минерализаторе при объемном соотношении
азотной кислоты и перекиси водорода, равном 8 : 2, под давлением 1,1-1,5 МПа в течение
15-25 минут; восстановление шестивалентного селена до четырехвалентного ведут одновременно с удалением азотной кислоты путем добавления к минерализованному образцу
0,5 мл 35 %-й перекиси водорода и 1-2 мл соляной кислоты и упаривания досуха.
Результаты определения селена заявляемым способом и согласно прототипу приведены в табл. 1-3. Содержание селена в исследуемых образцах определяют используя в каждой серии определений референс-стандарты. Результаты определений хорошо соответствуют регламентированным значениям.
Пример 1
Определение селена в сыворотке крови.
Во фторопластовом сосуде для микроволнового минерализатора взвешивают 1г исследуемого продукта и соответствующего образца сравнения. Дальнейшие исследования
проводят аналогично, как и при построении калибровочной кривой.
Построение калибровочной кривой
1. Мокрое сжигание.
Для построения калибровочной кривой в 6 фторопластовых сосудах вносят по 3 мл
стандартных рабочих растворов селенистокислого натрия, что соответствует 0; 5; 10; 20;
30; 40 нг селена в пробе. Во все сосуды добавляют по 8 мл концентрированной азотной
кислоты и 2,0 мл перекиси водорода и оставляют при комнатной температуре на 15 минут.
Затем проводят минерализацию в течение 25 минут, используя контрольные цифры давления 1,1 МПа и температуры 210 °С. Анализируемые образцы после микроволновой минерализации охлаждают и содержимое количественно переносят в фарфоровые тигли.
2. Удаление азотной кислоты и восстановление шестивалентного селена до селена четырехвалентного.
2
BY 12675 C1 2009.12.30
Для удаления следов азотной кислоты в пробы добавляют по 0,5 мл 35 %-й перекиси
водорода, по 1 мл 6 М соляной кислоты и упаривают досуха.
Образцы растворяют в 0,1 М соляной кислоте, переносят в мерную колбу требуемого
(в зависимости от содержания селена) объема. Для анализа берут аликвотную часть, равную 1 мл, добавляют 1,0 мл 25 % муравьиной кислоты и перемешивают. На этой стадии
процесс можно оставить до следующего дня.
3. Образование комплекса 4,5-пиазоселенола между селенистой кислотой и 2,3диаминонафталином и его флуориметрическое определение.
В каждую пробирку добавляют по 1,0 мл гидроксиламин солянокислого раствора тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и по 1,0 мл раствора аммиака. Устанавливают pH проб до 1,8-2,0, корректируя его 4М раствором соляной кислоты. К
полученным растворам добавляют по 1,0 мл заранее приготовленного раствора 2,3диаминонафталина и выдерживают 30 минут при 50 °С без попадания прямого света.
По окончании процесса пробы охлаждают до комнатной температуры и каждую интенсивно экстрагируют 2,5 мл циклогексана в течение одной минуты. На спектрофлуориметре измеряют величину флуоресценции органического экстракта (в течение 2 часов)
при длине волны 369 нм и эмиссии 518 нм.
4. Обработка результатов
На основании полученных данных строят калибровочную кривую зависимости флуоресценции от количества селена в пробе.
Массовую долю селена (X) в мкг/кг (мкг/дм) продукта вычисляют по формуле:
Х = В/а·С,
где В - массовая доля селена в пробе, определенная по калибровочной кривой; а - масса
образца, содержащаяся в аликвоте, взятой на анализ, или для жидких продуктов объем образца, взятого на анализ мл.
С - масса навески образца, взятого на анализ, г, или для жидких продуктов объем образца, взятого на анализ, мл.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение двух определений. Относительное стандартное отклонение в интервале от 1 до 600 мкг/кг-10 %.
Полученные данные по определению селена в сыворотке крови приведены в табл. 1.
Таблица 1
Способ исследования Содержание селена,
Сходимость, % Время минерализации,
мкг/л
мин.
Заявляемый способ
75,9 70,9
6,8
25
Прототип
76,2 69,0
9,9
60
Пример 2
Определение селена в волосах головы.
Определение селена в волосах ведем аналогично определению селена в сыворотке
крови. Используемая масса навески - 0,5 г. Полученные данные по определению селена в
волосах головы приведены в табл. 2.
Таблица 2
Способ исследования Содержание селена,
Сходимость, % Время минерализации,
мкг/кг
мин.
Заявляемый способ
459 485
5,5
20
Прототип
448 480
6,9
60
Пример 3
Определение селена в куриных яйцах.
Определение селена в куриных яйцах ведем аналогично определению селена в сыворотке крови. Используемая масса навески - 0,5 г.
Результаты определения селена в куриных яйцах приведены в табл. 3.
3
BY 12675 C1 2009.12.30
Таблица 3
Метод исследований Содержание селена,
Сходимость, % Время минерализации,
мкг/кг
мин.
Заявляемый способ
175,3 187,7
6,8
25
Прототип
169,5 183,3
7,8
120
Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ обладает следующими
преимуществами: сокращает время минерализации органической части образца на 0,5-1,5 часа, повышает точность определения микроэлемента селена в биологических объектах.
Кроме того, метод является более безопасным: давление, создаваемое в автоклаве, составляет 5-10 МПа, в микроволновом минерализаторе - 1,1-1,5 МПа.
Использование данного способа увеличивает выбор вариаций в аппаратурном оформлении, расширяет возможности применения способа для определения содержания микроэлемента селена в пищевых продуктах, биологических средах, организме человека, что
необходимо для исследования обеспеченности организма микроэлементом селеном, а также для диагностики и лечения целого ряда заболеваний, связанных с нарушениями антиоксидантной защитной системы организма.
Источники информации:
1. Патент РБ 8202, МПК G 01N 21/64.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
85 Кб
Теги
патент, by12675
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа