close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12869

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.02.28
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 12869
(13) C1
(19)
G 01N 33/48
СПОСОБ ОЦЕНКИ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА
КЛЕТКИ ЧЕЛОВЕКА
(21) Номер заявки: a 20060302
(22) 2006.04.04
(43) 2007.12.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт генетики и цитологии Национальной
академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Моссэ Ирма Борисовна;
Ксензова Татьяна Валентиновна;
Морозик Павел Михайлович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) HEMVANI N. et al. Photomed Laser
Surg.- 2005.- V. 23.- No. 5.- P. 476-479.
LOPES-MARTINS R.A. et al. Photomed
Laser Surg.- 2005.- V. 23.- No. 4.- P. 377381.
BY 12869 C1 2010.02.28
(57)
Способ оценки воздействия лазерного излучения с длиной волны 337 нм частотой 50
или 100 Гц на кератиноциты человека, иммортализованные папилломавирусом человека,
при котором культуральную среду от облученных в течение 1 или 2 мин указанным лазерным излучением клеток, отфильтрованную через фильтр с размером пор 0,22 мкм, переносят к интактным клеткам, выдерживают эти клетки при 37 °С в течение 9-10 дней и
подсчитывают количество образовавшихся колоний, а воздействие лазерного излучения
оценивают по снижению колониеобразующей способности необлученных клеток.
Изобретение относится к области радиобиологии и медицины, в частности к биологическим и генетическим эффектам лазерного излучения, и может использоваться для оценки риска воздействия лазерного излучения на организм человека.
Аналогами данного способа исследования являются методы индукции "байстэндер"
эффекта в клетках человека α- и β-ионизирующим излучением, основанные на передаче
повреждающего фактора из одной клетки в другую через межклеточные контакты или через секрецию в межклеточную культуральную среду "байстэндер" факторов [1, 2]. Известен также способ индукции "байстэндер" эффекта при мечении клеток человека
радиоактивным изотопом 3Н-тимидином [3].
Прототипом по отношению к заявляемому может считаться способ индукции "байстэндер" эффекта в клетках человека с помощью γ-излучения, основанный на переносе
межклеточной культуральной среды от облученных клеток необлученным [4]. Сущность
этого способа заключается в следующем: от облученных малыми дозами γ-излучения клеток-доноров культуральная среда фильтруется и переносится к необлученным клеткамреципиентам, у которых затем наблюдаются клеточные повреждения, характерные для
облученных клеток. При этом в передаче повреждающего фактора не участвуют межклеточные контакты. В последнее время расширяется использование лазерных излучений в
BY 12869 C1 2010.02.28
различных областях науки, техники и медицины. Биологические воздействия лазерных
излучений на человека мало изучены. В связи с этим, недостатком прототипа является невозможность прогнозирования биологических последствий использования лазерных излучений путем экстраполяции данных о биологических эффектах, полученных при
воздействии ионизирующего излучения. Заявляемый способ индукции "байстэндер" эффекта в клетках человека лазерным излучением позволит корректно оценить риск воздействия лазерного излучения на организм человека.
Для решения поставленной задачи разработан комплексный подход, основанный на
цитогенетическом анализе популяции кератиноцитов человека, иммортализованных вирусом папилломы человека in vitro путем оценки уровня колониеобразующей способности
клеток: спонтанного, индуцированного однократным воздействием лазерного излучения и
индуцированного переносом культуральной среды от клеток-доноров клеткамреципиентам. Сущность заявляемого способа заключается в том, что после посева во флаконы определенного количества клеток флаконы прямого облучения и доноры "байстэндер" эффекта подвергают однократному воздействию азотного лазера с длиной волны
λ = 337 Нм в течение 1-2 мин с частотой 50 и 100 Гц. Затем культуральную среду из флаконов с клетками-донорами фильтруют через 0,22 мкм фильтры и замещают ей среду клеток-реципиентов. Клетки хранят в термостате при 37 °С и 5 % CO2. Через 9-10 дней
происходит формирование колоний, клетки фиксируют, окрашивают карболовым фуксином, подсчитывается количество образовавшихся колоний и производится расчет выжившей фракции (отношение образовавшихся колоний к числу посеянных клеток).
На основании проведенных цитогенетических исследований на кератиноцитах человека, иммортализованных папилломавирусом человека, было установлено, что при прямом облучении и при переносе культуральной среды от облученных клеток-доноров
необлученным клеткам-реципиентам наблюдается снижение колониеобразующей способности клеток - так называемый "байстэндер" эффект. Предложенный способ поясняется
таблицей.
Исследование колониеобразующей способности кератиноцитов человека при индукции "байстэндер" эффекта
Время экспозиции 1
Время экспозиции 2
Клеток
Параметр
мин
мин
посеяно
Колоний
%
Колоний
%
Прямое об- Контроль
300
207
69 ± 2,67
207
69 ± 2,67
лучение
Облучение:
частота 50 Гц
300
119
39,67 ± 2,82
108
36 ± 2,77
частота 100 Гц
300
89
29,67 ± 2,64
105
35 ± 2,75
Реципиенты Контроль
"байстэндер" Облучение:
эффекта
частота 50 Гц
частота 100 Гц
Прямое об- Контроль
лучение
Облучение:
300
207
69 ± 2,67
207
69 ± 2,67
300
300
1500
114
110
1388
38 ± 2,80
36,67 ± 2,78
92,53 ± 0,68
129
109
1388
43 ± 2,86
36,33 ± 2,78
92,53 ± 0,68
937
62,47 ± 1,25
частота 50 Гц
1500
частота 100 Гц
1500
960
64 ± 1,24
1077
71,8 ± 1,16
Реципиенты Контроль
"байстэндер" Облучение:
эффекта
частота 50 Гц
частота 100 Гц
1500
1416
94,4 ± 0,59
1416
94,4 ± 0,59
66,27 ± 1,22
905
1002
60,33 ± 1,26
66,8 ± 1,22
1500
1500
994
2
BY 12869 C1 2010.02.28
Полученные данные свидетельствуют о том, что индукция "байстэндер" эффекта происходит при воздействии лазерного излучения с разной мощностью (50 и 100 Гц), при
разных временных экспозициях (1 мин и 2 мин) и при разной плотности популяции клеток
(300 и 1500), что свидетельствует о неслучайном характере наблюдаемого эффекта.
Источники информации:
1. Azzam E.I., de Toledo S.M., Gooding Т., Little J.B. Intercellular communication is involved in the bystander regulation of gene expression in human cells exposed to very low fluences of alpha particles // Radiat Res - 1998. - P. 150:497-504.
2. Prise K.M., Belyakov O.V., Folkard M., Micheal B.O. Studies of the bystander effect in
human fibroblasts using a charged particle microbeam // International Journal of Radiation Biology - 1998. - P. 74:793-798.
3. Bishayee A., Rao D.V., Howell R.W. Evidence for pronounced bystander effects caused
by nonuniform distributions of radioactivity using a novel three-dimensional tissue culture
model. Radiat. Res. - P. 152, 88-97.
4. Mothersill C, Seymour C. Medium from irradiated human epithelial cells but not human
fibroblasts reduces the clonogenic survival of unirradiated cells // International Journal of Radiation Biology - 1997. - P. 71: 421-427.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
79 Кб
Теги
патент, by12869
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа