close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY12891

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.02.28
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/50
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ
ВРОЖДЕННОГО ПОРОКА РАЗВИТИЯ ПЛОДА
(21) Номер заявки: a 20070583
(22) 2007.05.18
(43) 2008.12.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Плоцкий Андрей Романович;
Егорова Татьяна Юрьевна; Наумов
Александр Васильевич (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
BY 12891 C1 2010.02.28
BY (11) 12891
(13) C1
(19)
(56) ПЛОЦКИЙ А.Р. и др. Здоровая мать здоровый ребенок: Сб. материалов
VIII съезда педиатров Республики Беларусь. - Минск, 2006. - С. 336-339.
МОЙСЕЕНОК Е.А. Альманах здоровье и питание: Сб. тр. республиканской
научно-практической конференции
"Здоровье и питание". - Минск. -2005. С. 160-163.
WALKER M.C. et al. Am J Obstet Gynecol. - 1999. - V. 180. - No. 3. - pt. 1. P. 660-664.
KANG S.S. et al. Metabolism., 1986. V.35. - No. 10. - P. 889-891.
(57)
Способ прогнозирования врожденного порока развития плода, представляющего собой
патологию передней брюшной стенки, атрезию пищевода, хромосомные аномалии, диафрагмальную грыжу, шейную гигрому, патологию почек или множественные пороки развития,
отличающийся тем, что в плазме крови беременной женщины определяют уровень общего гомоцистеина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием маркера SBD-F и флуоресцентной детекцией при длинах волн возбуждения и
флуоресценции соответственно 385 нм и 515 нм и при уровне гомоцистеина, превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют вероятность врожденного порока развития плода.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, гинекологии и
пренатальной диагностике, и может использоваться для прогнозирования риска развития
врожденных аномалий у плода.
Проведя патентный поиск, нами не выявлено близкого к предлагаемому способа прогнозирования врожденных аномалий развития у плода.
Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования вероятности формирования врожденных аномалий развития у плода в целях проведения качественной и своевременной диагностики этих состояний.
Указанная задача решается путем определения уровня общего гомоцистеина в плазме
беременных женщин методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC high-performance liquid chromatography) с использованием маркера SBD-F и флуоресцентной детекцией при длинах волн возбуждения и флуоресценции соответственно 385 нм и
515 нм, и при уровне гомоцистеина, превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют вероят-
BY 12891 C1 2010.02.28
ность врожденного порока развития плода, представляющего собой патологию передней
брюшной стенки, атрезию пищевода, хромосомные аномалии, диафрагмальную грыжу,
шейную гигрому, патологию почек или множественные пороки развития.
Способ осуществляют следующим образом.
У всех пациенток утром натощак забирают кровь из локтевой вены, помещают в пробирки с гепарином и сразу же центрифугируют. Полученную плазму (в количестве 1 мл)
замораживают при температуре - 18 °С. В дальнейшем образцы плазмы хранят при температуре - 78 °С до момента проведения анализа. Уровень гомоцистеина в плазме крови определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC - high-performance
liquid chromatography) с использованием маркера SBD-F и флуоресцентной детекцией при
длинах волн возбуждения и флуоресценции соответственно 385 нм и 515 нм.
В день проведения исследования 50 мкл размороженной плазмы смешивали с 5 мкл
раствора ТСЕР (tris(2-carboxylethyl)phosphine) (100 мг/мл), после чего оставляли при комнатной температуре на 30 мин. Затем осаждали белки добавлением 50 мкл 10 % раствора
ТХУ (трихлоруксусная кислота) и центрифугировали при 4 °С в течение 15 мин при 16000 g.
В микропробирку объемом 200 мкл, содержащую 2 мкл 1,55 М NaOH, 12,5 мкл 0,125 М
Na-боратного буфера с 200 мг/л ЭДТА, рН 9,5, и 5 мкл раствора SBD-F (ammonium 7fluorobenzo-2-oxa-l,3-diazole-4-sulfonate) (1 мг/мл) в аналогичном буфере, вносили 10 мкл
супернатанта и инкубировали 1 ч при 60 °С. После охлаждения при комнатной температуре в систему вводили 10 мкл реакционной смеси.
Разделение осуществляли на колонке Диасорб 130 C16T, 3×250 мм, 7 мкм. Подвижная
фаза: 0,1 М NaH2PO4, 17 мМ СН3СООН, рН 3,65, 40 мг/л ЭДТА, 3 % ацетонитрила. Скорость
потока 0,6 мл/мин, температура колонки 30 °С. Детектирование осуществлялось по флуоресценции, 379/510 нм. Определения проводили на хроматографической системе Agilent 1100,
содержащей 4-канальный градиентный насос, термостат колонок, автосамплер и детектор
флуоресценции. Регистрация хроматограмм и их количественная обработка осуществлялись с помощью Agilent ChemStation A10.01. При уровне гомоцистеина в плазме крови,
превышающем 7,91 мкмоль/л, прогнозируют высокую вероятность врожденных аномалий
развития у плода. Следовательно, требуется проведение углубленного обследования пациенток для диагностики или исключения врожденных аномалий развития у плода.
Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ "STATISTICA 6.0", "Microsoft Excel". Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (Me, 25 %, 75 %). Сравнение
групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни.
Для доказательства заявляемого способа проведено исследование уровня гомоцистеина у 154 пациенток, которые были разделены на 2 группы. Основную группу составили
102 пациентки, у которых имелись различные виды врожденных аномалий у плода, подтвержденные при патологоанатомическом исследовании абортусов либо при обследовании новорожденных после родов. Группу сравнения составили 52 пациентки, которые
родили детей без врожденных аномалий. Пациентки основной группы были разделены на
несколько подгрупп в зависимости от вида порока развития. Уровень гомоцистеина в
группе сравнения составил 5,81 (4,8-6,77) мкмоль/л.
В таблице показан уровень гомоцистеина (мкмоль/л) в плазме крови беременных в основной и контрольной группах.
Как следует из таблицы, уровень гомоцистеина был достоверно выше при выявлении
у плода пороков центральной нервной системы, хромосомных аномалий, шейной гигромы,
патологии передней брюшной стенки, поликистоза почек, атрезии пищевода, диафрагмальной грыжи, а также при множественных врожденных пороках развития. Уровень гомоцистеина был также повышен при скелетных дисплазиях и в случае обнаружения опухолей,
характерных для перинатального периода, однако это повышение не оказалось статистически достоверным. Не отмечено разницы в уровне общего гомоцистеина при пороках
сердца, патологии легких и расщелин лица у плода по сравнению с контрольной группой.
2
BY 12891 C1 2010.02.28
Уровень гомоцистеина (мкмоль/л) в плазме крови беременных
основной и контрольной групп.
Количество
наблюдений
Исследуемые группы
Гидроцефалия
12
Патология передней брюшной стенки
8
Атрезия пищевода
3
Хромосомные аномалии
5
Врожденные пороки сердца
17
Диафрагмальная грыжа
4
Шейная гигрома
4
Скелетные дисплазии
9
Патология легких
6
Патология почек
6
Пороки нервной трубки
8
Расщелины верхней губы и твердого неба
6
Опухоли перинатального периода
4
Множественные врожденные пороки развития
10
Всего
102
Группа сравнения
52
Уровень гомоцистеина
(мкмоль/л)
Me (25 % - 75 %)
6,80 *
6,04 - 7,36
6,71 *
6,08 - 8,76
7,75 *
6,88 - 13,00
7,13 *
6,75 - 8,26
5,39
5,04 - 6,35
8,90 *
8,11 - 16,14
7,80 *
6,56 - 9,24
6,75
6,24 - 7,29
6,71
6,08 - 8,76
8,31 *
5,89 - 11,15
7,16 *
6,38 - 7,47
5,18
3,58 - 5,91
7,99
6,25 - 9,25
10,10 *
6,93 - 12,38
6,76 *
5,77 - 8,32
5,81
4,8 - 6,77
* - разница показателей по сравнению с контрольной группой достоверна (р < 0,05).
При точке разделения 7,91 мкмоль/л чувствительность метода составляет 27,5 %, а
специфичность 96,1 %.
Таким образом, заявляемый способ прогнозирования возникновения врожденных пороков развития у плода позволяет сформировать группы риска среди беременных женщин
для проведения дополнительных диагностических мероприятий с целью подтверждения
или исключения врожденных аномалий у плода.
Данный способ может быть применен в работе медико-генетических консультаций и
перинатальных центров для прогнозирования высокой вероятности возникновения врожденных пороков развития у плода.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
84 Кб
Теги
by12891, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа