close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13020

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61B 8/08
G 01N 33/50
СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ
ОСТЕОПОРОЗА И КОСТНЫХ МЕТАСТАЗОВ
У БОЛЬНОЙ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
(21) Номер заявки: a 20071049
(22) 2007.08.21
(43) 2008.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр онкологии и
медицинской радиологии имени
Н.Н.Александрова" (BY)
(72) Авторы: Жаврид Эдвард Антонович;
Антоненкова Нина Николаевна;
Державец Лилия Александровна (BY)
BY 13020 C1 2010.04.30
BY (11) 13020
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии имени Н.Н.Александрова" (BY)
(56) RU 2210776 C1, 2003.
EA 004634 B1, 2004.
Биохимия. Учебник для ВУЗов. - М.:
ГЕОТАР-Медиа, 2006. - C. 751, 755.
RU 2157519 C1, 2000.
PERTYNSKI T. et al. Experimental Oncology. - 2002. - No. 24. - P. 265-269.
(57)
Способ дифференциальной диагностики остеопороза и костных метастазов у больной
раком молочной железы, включающий определение уровней биохимических маркеров в
сыворотке крови, отличающийся тем, что в качестве биохимических маркеров определяют тетрат-резистентную кислую фосфатазу в спектральной линии 5 (TRAP), щелочную
фосфатазу и ионизированный кальций, причем при активности TRAP от 7,7 до 20 Е/л, активности щелочной фосфатазы менее 118 Е/л и уровне ионизированного кальция от 0,98 до
1,3 ммоль/л диагностируют остеопороз, а при активности TRAP более 20 Е/л, активности
щелочной фосфатазы более 118 Е/л и уровне ионизированного кальция более 1,4 ммоль/л
диагностируют костные метастазы.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкомаммологии, и может
быть использовано для дифференциальной диагностики остеопороза и костных метастазов у больной раком молочной железы.
В состав комплексного лечения при раке молочной железы входят антиэстрогенные
препараты и ингибиторы ароматазы. Считается, что антиэстрогены, проявляя слабые
свойства агонистов эстрогенов, увеличивают минеральную плотность костей, а ароматазные ингибиторы, напротив, усиливают процессы резорбции кости. В результате этого развивается остеопороз - системное заболевание скелета, характеризующееся снижением
массы кости в единице объема и нарушением микроархитектоники костной ткани, приводящим к увеличению хрупкости костей и высокому риску их переломов. Остеопороз приводит к инвалидизации и снижению качества жизни больных [1].
В ряде случаев, у больных с высокой категорией риска возврата болезни могут развиваться метастазы в костях, которые не определяются по данным остеосцинтиграфии и при
рентгенологическом исследовании костей. В таких случаях чрезвычайно важна оценка
BY 13020 C1 2010.04.30
биохимических показателей, свидетельствующих о патологической трансформации костной ткани.
В результате злокачественной трансформации костной ткани происходит резорбция
костного матрикса остеокластами, продуцирующими целый ряд факторов роста. Костные
метастазы при раке молочной железы характеризуются повышенным синтезом костной
ткани, сопряжены с резко выраженной активизацией остеолизиса. В результате нарушения
взаимодействия между остеокластами и остеобластами и соответственно нарушения баланса
между процессами синтеза и лизиса нарушается нормальный процесс обновления костной
ткани. Это приводит к формированию участков патологической ткани значительно меньшей
плотности. Вследствие этого возрастает риск возникновения патологических переломов.
Использование комплекса диагностических мероприятий позволяет предупредить развитие остеопороза и связанных с ним осложнений, а также своевременно диагностировать
прогрессирование опухолевого процесса.
Известен способ определения минеральной плотности костной ткани:
1. Биэнергетическая рентгеновская абсорбциометрия (денситометрия), с помощью которой можно определять минеральную плотность кости в наиболее важных с точки зрения
риска остеопоретических переломов участках скелета - позвоночнике и бедренной кости.
При использовании данного способа для диагностических целей предложены два пороговых
значения минеральной плотности костной ткани. Значение - на 2,5 стандартных отклонений ниже средней величины свидетельствуют об остеопорозе (высокий риск остеопоретических переломов); на 1 стандартное отклонение - об остеопении [2].
Однако данный способ имеет ряд недостатков:
при выполнении методики происходит нежелательное рентгеновское облучение пациентки, которое может привести к развитию неблагоприятных побочных действий;
поскольку корреляция между значениями минеральной плотности различных участков
скелета недостаточно высока, выявление остеопороза с помощью данной методики в одном участке скелета не обязательно указывает на развитие остеопороза в других участках;
2. Способ исследования костной ткани для диагностики внутрикостно растущих опухолей. Данная методика предполагает помещение опухоли на предметное стекло, окрашивание и микроскопирование ее. Способ осуществляется следующим образом: удаленные
участки кости, пораженные опухолью, помещают между двумя металлическим пластинами под пресс; из них выжимают мягкотканное содержимое, наносят на предметное стекло,
окрашивают азур-эозином, производят микроскопическое исследование [3].
Недостатками способа являются:
травматичность,
невозможность оценить процессы перестройки кости во всех участках скелета.
Таким образом, информативных, эффективных способов дифференциальной диагностики остеопороза и костных метастазов у больной раком молочной железы в настоящее
время нет.
Наиболее близким по диагностической значимости к предлагаемому изобретению является способ диагностики резорбции костной ткани [4]. Для выполнения данной методики
определяют биохимические показатели (содержание креатинина и активность кислой
фосфатазы) в сыворотке крови, затем вычисляют коэффициент их соотношения, по которому
судят о процессах резорбции кости. В данном способе соотношение креатинин/кислая
фосфатаза отражает взаимообусловленность патологических процессов в системе мышца/кость.
Однако прототип имеет следующие недостатки:
обладает диагностической специфичностью, информативностью, чувствительностью у
здоровых лиц, а не у больных раком молочной железы;
информативность метода не изучена при раке молочной железы.
Задача: разработать высокоинформативный способ дифференциальной диагностики
остеопороза и костных метастазов у больной раком молочной железы.
2
BY 13020 C1 2010.04.30
Поставленную задачу достигают тем, что у больной раком молочной железы определяют уровни биохимических маркеров (тетрат-резистентной кислой фосфатазы TRAP,
щелочной фосфатазы и ионный состав кальция) в сыворотке крови.
TRAP - тетрат-резистентная кислая фосфатаза в спектральной линии 5 сыворотки крови. Этот биохимический маркер представляет собой гликопротеин с массой 35-37 килодальтон. TRAP принадлежит к наиболее распространенным ферментам в остеокластах. Он
экспрессируется в некоторых дифференцированных клетках мононуклеарной фагоцитарной системы, особенно в остеокластах и альвеолярных макрофагах, где принимает активное участие в процессе резорбции кости.
Высокие уровни TRAP в крови обычно ассоциируются с активной реконструкцией
кости. Повышенные уровни в сыворотке наблюдаются при нормальном росте костей у детей.
Повышенные уровни TRAP в сыворотке крови выявляются при заболеваниях, характеризующихся повышенной костной резорбцией (болезнь Педжета, первичный гиперпаратиреоз, состояние после гемодиализа по поводу почечной недостаточности; метастатическое
поражение костей при злокачественных новообразованиях, связанное с костной резорбцией, множественная миелома); а также у женщин, которым выполнена двусторонняя овариэктомия. У женщин в менопаузе, не получающих эстроген-заместительную терапию,
уровни TRAP в сыворотке выше, чем у тех, кому проводят лечение эстрогенами [5].
Специальное определение активности TRAP имеет существенное значение для клинической оценки костного метаболизма.
Проведенное нами исследование дает основание заключить, что высокие показатели
уровня TRAP являются признаками не только остеопоретических изменений, но и метастатического поражения костей при раке молочной железы.
Способ осуществляют следующим образом.
У больной раком молочной железы определяют в сыворотке крови уровни биохимических маркеров: TRAP, ионизированного кальция, щелочной фосфатазы. Исследование
проводят с помощью тест-системы "Human TRAP-5 Assay" производства Bio Vendor.
Стандартные образцы, образцы для контроля качества и образцы сывороток или плазмы
инкубируют в микротитрационных ячейках, сенсибилизированных моноклональными антителами, специфичными к TRAP. После тщательной промывки опухолевый маркер
TRAP, связанный с антителами, вступает в реакцию с субстратом pNPP в слабокислой
среде. Реакцию останавливают добавлением раствора гидроокиси. Оптическую плотность
полученного продукта измеряют спектрофотометрическим методом. Оптическая плотность пропорциональна ферментативной активности TRAP. С помощью спектрофотометра производят автоматические расчеты концентрации исследуемого вещества. Строят
калибровочную кривую зависимости величин оптической плотности стандартных образцов
от известной ферментативной активности тех же образцов, с использованием линейной
регрессионной функции. Результаты представляют собой ферментативную активность TRAP
в исследуемых образцах.
Нормальные пределы концентраций опухолевого маркера TRAP были получены в результате анализа 177 случайных образцов с помощью тест-системы "Human TRAP-5
Assay" производства Bio Vendor (таблица).
Пол
Мужчины
Женщины
Стандартные показатели опухолевого маркера TRAP
Количество
Стандартное
Возраст
Среднее
Мин.
образцов
отклонение
8-14
5
16,18
3,29
12,25
18-48
16
4,54
0,58
3,70
51-84
30
4,47
1,90
1,56
4-14
8
15,58
4,28
9,40
16-50
63
3,79
0,85
2,12
52-90
55
4,68
1,49
2,38
3
Макс.
20,38
5,61
12,50
22,26
6,32
11,68
BY 13020 C1 2010.04.30
В соответствии с рекомендациями компании-производителя каждая лаборатория
должна устанавливать свои собственные референтные значения исследуемых показателей.
В лаборатории ГУ "РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н.Александрова" для группы здоровых лиц: женщин в возрасте 30-50 лет референтными значениями
являются показатели от 2,09 до 5,49 Е/л; для женщин старше 50 лет - 1,7-7,66 Е/л.
Референтные значения ионизированного кальция - 0,98-1,3 ммоль/л, щелочной фосфатазы - от 42 до 104 Е/л.
В результате проведенного нами исследования установлено, что значение уровня
TRAP от 7,7 до 20 Е/л свидетельствует об остеопоретических изменениях в костях; уровни
ионизированного кальция и щелочной фосфатазы могут быть при этом в норме, либо также повышены. При метастатическом поражении костей концентрация TRAP превышает
20 Е/л, уровни ионизированного кальция и щелочной фосфатазы повышены.
Основными отличительными признаками заявляемого способа являются:
для дифференциальной диагностики остеопороза и костных метастазов при раке молочной железы используют комплекс биохимических субстанций, в том числе опухолеассоциированный антиген TRAP;
простота методики позволяет использовать ее в амбулаторных условиях.
Преимущества заявляемого способа:
новый способ позволяет диагностировать наличие метастазов в костях на доклинической стадии;
комплексная оценка уровней биохимических маркеров, определяемых в сыворотке
крови, позволяет оценить процессы преобразования не в отдельных участках скелета, а во
всей костной системе;
способ не приводит к развитию нежелательных побочных эффектов, которые могут
наблюдаться при использовании других способов (рентгеновская абсорбциометрия);
способ информативен при применении у онкологических больных. Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Больная К.Г.Я., 1937 года рождения, амбулаторная карта № 3542/02. Госпитализирована в отделение онкомаммологии 17.07.2006 г. При поступлении больную беспокоили
боли в области коленных, голеностопных суставов, в области пояснично-кресцового отдела
позвоночника. В результате обследования пациентки установлен диагноз: рак левой молочной железы, верхне-наружный квадрант, метастазы в подмышечных лимфатических узлах
(верифицирован цитологически). 17.07.2006 г. выполнена остеосцинтиграфия: очагов патологически повышенного накопления радиофармпрепарата в костях скелета не отмечено.
По данным рентгенологического исследования диагностированы признаки остеопороза
пояснично-крестцового отдела позвоночника. В соответствии с утвержденными стандартами лечения больной выполнена мастэктомия по Madden слева; гистологическое исследование № 111201-205 и № 111905-16 от 02.08.06 - инфильтративный протоковый рак, G2,
метастаз в 1 лимфатическом узле первого уровня; рецепторы к эстрадиолу - 95 %; к прогестерону - 30 %; Her-2-neu - 0.
Больной проведен курс послеоперационной лучевой терапии.
10.08.06 в биохимическом анализе сыворотки крови определены концентрации: опухолевого маркера TRAP - > 16 Е/л; ионизированного кальция - 1,1 ммоль/л; щелочной
фосфатазы - 110 Е/л.
Учитывая положительный гормонорецепторный статус опухоли, больной назначена
адъювантная гормонотерапия тамоксифеном. Данное лекарственное средство пациентка
получала в течение 12 месяцев. При опросе больной выяснилось, что в течение данного
периода времени боли в костях несколько уменьшились. Эстрогенозаместительное лечение не проводилось.
20.07.07 снова определены уровни биохимических показателей крови. Значения их:
опухолевого маркера TRAP - > 2,29 Е/л; ионизированного кальция - 0,99 ммоль/л; щелочной
фосфатазы - 113 Е/л. По данным рентгенологического исследования пояснично-крестцо4
BY 13020 C1 2010.04.30
вого отдела позвоночника признаков остеопороза не зарегистрировано. В настоящее время антиэстрогенотерапия продолжается.
Пример 2.
Больная К.Г.А., 1949 года рождения, амбулаторная карта № 2354/06. Пациентка находилась на стационарном лечении в онкомаммологическом отделении с 29.03.2006 года по
поводу рака левой молочной железы, верхне-наружный квадрант, метастазы в подмышечных лимфатических узлах. При поступлении предъявляла жалобы на периодически возникающие боли в области пояснично-грудного отдела позвоночника, костях таза, суставах. В
результате остеосцинтиграфии, выполненной до поступления больной в стационар 22.03.06,
патологического накопления радиофармпрепарата не выявлено. По данным рентгенологического исследования диагностированы признаки остеопороза пояснично-крестцового отдела позвоночника. На основании данных гистологического исследования № 69631-43 инфильтративный дольковый рак, G2, метастазы в 1 лимфатическом узле первого уровня;
гормонорецепторный статус ER + 98 %; PR + 80 %; Her-2-neu - 0, больной проведено 4
курса полихимиотерапии по схеме АС, курс послеоперационной лучевой терапии; в качестве адъювантной гормонотерапии назначен тамоксифен в стандартной дозе - 20 мг.
Уровни биохимических маркеров до начала и после 12 месяцев лечения (адъювантная
гормонотерапия) следующие: TRAP - > 16 Е/л до начала гормонотерапии и 4,62 Е/л через
12 месяцев лечения; уровень ионизированного кальция 1,2 ммоль/л до гормонотерапии и
0,98 ммоль/л через 12 месяцев лечения; уровень щелочной фосфотазы снизился от 115 Е/л
до 80 Е/л. По данным рентгенологического исследования пояснично-крестцового отдела
позвоночника признаков остеопороза не зарегистрировано.
Диагностика костных метастазов при раке молочной железы характеризуется следующим примером.
Больная Г.В.Н. 1953 года рождения, амбулаторная карта № 6326/07 находилась на лечении в отделении онкомаммологии с диагнозом: рак правой молочной железы, метастазы
в подмышечных лимфатических узлах, метастазы в грудных, поясничных позвонках. Метастатическое поражение костей диагностировано по данным компьютерной томографии.
Биохимические показатели: ионизированный кальций - 2,0 ммоль/л, щелочная фосфатаза 196,0 Е/л, опухолеассоциированный антиген TRAP - более 20 Е/л.
Таким образом, с помощью заявляемого способа представляется возможным проводить дифференциальную диагностику остеопороза и костных метастазов у больной раком
молочной железы.
Источники информации:
1. Остеопороз в практике терапевта / Рош - Швейцарская фармацевтическая компания
// Ф. Хоффманн-Ля Рош [Электронный ресурс]. - 2006. - Режим доступа:
http://www.roche.ru/content/ru/publication container- 2006-04-21 -12-46-26/publication.html. Дата доступа: 17.07.2007.
2. Баранов А.А. Особенности изменений биохимических маркеров костного ремоделирования у детей в возрастном аспекте / А.А. Баранов [и др.] // Научный центр здоровья
детей РАМН, Москва [Электронный ресурс]. - 2007. - Режим доступа: http://www.medic21vek.ru/archive/6/rubriki/2/l.html. - Дата доступа: 17.07.2007.
3. Патент Российской Федерации 2157519, МПК7 G 01N 1/28, G 01N 1/30, 2000.
4. Патент Российской Федерации 2210776, МПК7 G 01N 33/70, G 01N 33/52, 2003
(прототип).
5. Human TRAP 5 Assay BioVendor Laboratory Medicine, Inc. / Инструкция по применению // [Электронный ресурс]. - http://www.biovendor.com.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
109 Кб
Теги
by13020, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа