close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13084

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 13084
(13) C1
(19)
C 12N 1/20
ШТАММ PASTEURELLA MULTOCIDA СЕРОВАРИАНТ В
КМИЭВ-68 - ШТАММ-АНТИГЕН
(21) Номер заявки: a 20080420
(22) 2008.04.03
(43) 2009.12.30
(71) Заявитель: Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие "Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского" (BY)
(72) Авторы: Бирман Борис Яковлевич;
Полоз Светлана Васильевна; Андрусевич Андрей Сергеевич (BY)
(73) Патентообладатель: Республиканское
научно-исследовательское дочернее
унитарное предприятие "Институт
экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского" (BY)
(56) РУСТАМОВ Ю.М. Антигенные, вирулентные и иммуногенные свойства
Пастерелла мультоцида различных серологических вариантов (типов). Автореферат диссертации. - М., 1983. C. 8-13, 16-24.
СТРЕЛЬЧЕНЯ И.И. Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария. - 2006. - № 2. - C. 32-34.
ЛЯХ Ю.Г. и др. Современные технологии сельскохозяйственного производства. Материалы X международной
научно-практической конференции. Гродно, 2007. - C. 250-251.
BY 13084 C1 2010.04.30
(57)
Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 - штамм-антиген.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к биотехнологии,
и касается штамма, предназначенного для конструирования диагностических и лечебнопрофилактических биопрепаратов.
Известен штамм Pasteurella multocida 656 серовариант В, накопление которого при
культивировании на МПБ (мясо-пептонном бульоне) составляет при стационарном режиме 1,29 млрд. м.т./мл, при постоянном помешивании - 2,96 млрд. м.т./мл; на МПБ с добавлением сыворотки и глюкозы составляет при стационарном режиме 2,8 млрд. м.т./мл при
шуттелировании - 3,48 млрд. м.т./мл, антигенная активность которого составляет 8 log2
[1].
На бульоне данный штамм дает равномерное помутнение среды, на агаре - мелкие
нежные полупрозрачные колонии, на средах Гиса отмечают без образования газа ферментацию глюкозы, сахарозы, сорбита, маннита, галактозы, левулезы и отсутствие ферментации лактозы, раффинозы, арабинозы, мальтозы, ксилозы, дульцита. Штамм образовывает
индол и сероводород [1].
Данный штамм обладает недостаточным накоплением бактериальной массы и низкой
антигенной активностью для изготовления биопрепаратов в больших объемах.
Известен штамм Pasteurella multocida сероварианта В, исходные культуры которого
обладали слабой вирулентностью: значение LD50 которого составляет 0,8 × 109 микробных
BY 13084 C1 2010.04.30
клеток после пассажа на питательные среды с добавлением 10 % сыворотки крови лошади, вирулентность их также не повышалась, увеличения вирулентности достигали путем
пассажа через организм белых мышей и кроликов [2].
Недостатком данного штамма является возможность реверсии к первоначальным
свойствам, то есть к ослаблению вирулентности, что при изготовлении вакцин из такого
штамма может привести к снижению иммуногенной активности, а следовательно, и защитных свойств.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение
штамма, обладающего способностью высокого накопления бактериальной массы, обладающего способностью длительно сохранять высокую вирулентность и более высокой антигенной активностью.
Поставленная задача достигается тем, что штамм Pasteurella multocida серовариант В
КМИЭВ-68 - штамм-антиген.
Выделен из легочной ткани больного пастереллезом песца в 2006 г. ЧУП "Бобруйское
зверохозяйство Белкоопсоюза" Бобруйского района Могилевской области.
Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 - штамм-антиген - депонирован в коллекции микроорганизмов РУП "Институт экспериментальной ветеринарии
им. С.Н.Вышелесского". Коллекционный номер КМИЭВ-68.
Таксономическая принадлежность. Микроорганизм отнесен к виду Pasteurella multocida серовариант В семейства Pasteurellaceae.
Патогенность для животных. Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 штамм-антиген - патогенен для пушных зверей и лабораторных животных, при подкожном введении вызывает гибель белых мышей массой 14-16 г и молодняка песца.
Культурально-морфологические признаки. При микроскопии мазков, приготовленных
из бульонных и агаровых культур, окрашенных по Граму, данный микроорганизм имеет
вид мелких грамотрицательных кокко-овоидов, размером 0,23-1,2 × 0,14-0,2 мкм, имеющих изолированное, парное расположение, иногда цепочное. Культура пастерелл спор не
образует, неподвижна, имеет капсулу. На бульоне рост определяется в виде равномерного
помутнения с образованием пристеночного кольца. На сывороточном МПА образует серовато-белые колонии с ровными краями, диаметром 1-2 мм. На агаровых средах пастереллы имеют вид нежных, мелких росинчатых колоний, дающих радужное свечение в
косопроходящем свете.
Биохимические свойства. Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 штамм-антиген - обладает способностью ферментировать глюкозу, галактозу, сахарозу,
ксилозу, маннит и сорбит с образованием кислоты без газа. Реакция Фогес-Проскауэра
отрицательная, на индол - положительная. Не обладает гемолитическими свойствами.
Антигенный состав. Имеет в своем составе К- и О-антигены.
Другие особенности и маркерные свойства. Штамм Pasteurella multocida серовариант
В КМИЭВ-68 - штамм-антиген - образовывает слабый хлопьевидный флоккулят при взаимодействии с раствором акрифлавина в разведении 1:1000. При встряхивании он разбивается.
Условия хранения. Хранят в ампулах после лиофильного высушивания в сахарозожелатиновой среде при температуре +2+4 °С в течение 5 лет. Сохранность культуры обеспечивается путем пересева на питательные среды - ПЖА, бульон Хоттингера, МПА на основе перевара Хоттингера 1 раз в течение месяца.
Антигенные свойства. Антигенная активность штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 - штамма-антигена - в РНГА составляет 9 log2.
Иммуногенность. Иммуногенность штамма Pasteurella multocida сероварианта В
КМИЭВ-68 - штамма-антигена - составляет 95 %.
Вирулентность. Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 - штаммантиген - обладает высокой вирулентностью, LD50 которого составляет 0,23 × 109 м.к.
2
BY 13084 C1 2010.04.30
Устойчивость к антибиотикам. Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 штамм-антиген - чувствителен к следующим антибактериальным препаратам: норфлоксацину, цефатоксиму, энроксилу, цефалексину, рифампицину, амоксициллину.
1. Пример выделения штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 штамма-антигена.
Штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 - штамм-антиген - выделяли
путем посева кусочков патологически измененных легких пушных зверей, больных пастереллезом, на МПБ с добавлением 10 % дрожжевого экстракта. Пробирки оставляли в термостате при 37 °С на 12-18 ч. Через указанное время отмечали помутнение среды и
появление специфического запаха.
2. Пример культивирования штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 - штамма-антигена.
Выращивание данного штамма осуществляли во флаконах на питательной среде МПБ
и МПБ с добавлением стерильной сыворотки лошади и глюкозы при 37 °С в стационарном режиме и на шуттель-аппарате при 120 колебаниях в минуту в течение 24 ч. Контроль
накопления пастерелл осуществляли фотометрическим методом. Результаты исследований отображены в таблице.
Накопление пастерелл в зависимости от условий культивирования (млрд. м.т./мл)
Режим культивирования
Стационарное
Шуттелирование
Питательная среда
Известный
Известный
КМИЭВ-68
КМИЭВ-68
штамм
штамм
МПБ
1,29
2,14
2,96
4,12
МПБ + сыворотка + глюкоза
2,8
3,32
3,48
4,92
Таким образом, накопление пастерелл на питательной среде МПБ при стационарном режиме культивирования составило 2,14 млрд. м.т./мл, при шуттелировании 4,12 млрд. м.т./мл. На МПБ с добавлением сыворотки и глюкозы при стационарном режиме составило 3,32 млрд. м.т./мл, с шуттелированием - 4,92 млрд. м.т./мл.
3. Пример определения вирулентных свойств штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 - штамма-антигена.
Вирулентные свойства изучали в опытах на белых мышах живой массой 14-16 г, с
этой целью готовили суспензию суточной агаровой культуры данного штамма в физиологическом растворе натрия хлорида. Животных заражали десятикратными разведениями
подкожно в области спины в дозе 0,5 мл. За опытными животными вели наблюдение в течение 10 суток после заражения. На каждую заражающую дозу использовали по животных. Расчет LD50 проводили по методу Кербера в модификации Ашмарина, результаты
исследований показали, что LD50 штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 штамма-антигена составила 0,23 × 109 микробных клеток.
4. Пример определения антигенной активности штамма Pasteurella multocida сероварианта В КМИЭВ-68 - штамма-антигена.
Антигенные свойства изучали в реакции непрямой гемагглютинации в разведении сыворотки до 1024. В качестве антигена использовали бактериальную культуру штамма Pasteurella multocida В КМИЭВ-68 - штамма-антигена. Результаты реакции показали, что
антигенная активность штамма Pasteurella multocida В КМИЭВ-68 - штамма-антигена составляет 9 log2.
Таким образом, штамм Pasteurella multocida серовариант В КМИЭВ-68 - штаммантиген - обладает накоплением бактериальной массы для изготовления вакцины в объеме
4,92 млрд. м.т./мл, что в 1,4 раз больше по сравнению с известным штаммом, и обладает
3
BY 13084 C1 2010.04.30
способностью сохранять длительно высокую вирулентность LD50 0,23 × 109 (у известного
штамма 0,8 × 109) и более высокой антигенной активностью 9 log2 (у известного штамма
8 log2) и может быть использован для конструирования профилактических и диагностических препаратов в качестве штамма-антигена.
Источники информации:
1. Коломнина Г.Ф, Антонова Н.И., Нецепляева Л.И., Семенютина Г.А., Блехерман Б.Е.
Влияние различных условий культивирования на рост Pasteurella multocida // Бюл. ВИЭВ. 1988. - Т. 65.- С. 31-34.
2. Рустамов Ю.М. Антигенные, вирулентные и иммуногенные свойства пастерелла
мультоцида различных серологических вариантов (типов): Автореф. дис… канд. вет. наук. М., 1983. - 25 с. (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
90 Кб
Теги
by13084, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа