close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13111

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 13111
(13) C1
(19)
A 61B 5/00
G 01N 33/50
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВРОЖДЕННОГО ПОРОКА
СЕРДЦА У ПЛОДА
(21) Номер заявки: a 20080191
(22) 2008.02.21
(43) 2009.10.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Плоцкий Андрей Романович; Егорова Татьяна Юрьевна;
Наумов Александр Васильевич;
Дорошенко Евгений Михайлович
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Гродненский государственный медицинский университет" (BY)
(56) RU 2308034 C1, 2007.
RU 2168179 С2, 2001.
УЛЬФАН Т.Н. Роль системы плацентарного глутатиона в патогенезе осложнений беременности (клиническое
исследование): Автореф. дис.- Иркутск,
2003.- С. 22-24.
BY 13111 C1 2010.04.30
(57)
Способ прогнозирования врожденного порока сердца у плода, отличающийся тем,
что определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флюоресцентной детекцией уровни общего глутатиона и общего гомоцистеина в отмытых эритроцитах крови беременной женщины, рассчитывают коэффициент, равный отношению
уровней глутатион/гомоцистеин, и, если уровень глутатиона составляет 500-700 мкмоль/л
и/или коэффициент равен 300-500, прогнозируют вероятность врожденного порока сердца
у плода.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, гинекологии и
пренатальной диагностике, и может использоваться для прогнозирования риска развития
врожденного порока сердца у плода.
Проведя патентный поиск, нами не выявлено близкого к предлагаемому способа прогнозирования и диагностики врожденных аномалий развития у плода.
Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования вероятности формирования врожденного порока сердца у плода в целях проведения качественной и своевременной диагностики этих состояний.
Указанная задача решается путем определения уровня общего глутатиона и общего
гомоцистеина в отмытых эритроцитах крови беременной женщины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC - high-performance liquid chromatography) с
флюоресцентной детекцией и расчета коэффициента глутатион/гомоцистеин. Если уровень глутатиона составляет 500-700 мкмоль/л и/или коэффициент равен 300-500, прогнозируют высокую вероятность врожденного порока сердца у плода.
Способ осуществляют следующим образом.
BY 13111 C1 2010.04.30
У всех пациенток утром натощак забирают кровь из локтевой вены, помещают в пробирки с гепарином и сразу же центрифугируют в течение 5 минут с частотой оборотов
2000 в минуту. Полученную плазму удаляют, а в пробирку добавляют физиологический
раствор хлорида натрия, предварительно подогретый до 37 °С, в соотношении 1:3. Полученную смесь центрифугируют при 2000 оборотах в минуту в течение 5 минут, надосадочную жидкость удаляют и снова добавляют физиологический раствор хлорида натрия в
той же пропорции и при той же температуре. Описанную процедуру осуществляют 3 раза
[Камышников B.C. Методы клинических лабораторных исследований. Лабораторная диагностика: учебник по специальности.- Минск: Бел. наука, 2002]. Затем отмытые эритроциты отбирают автоматической пипеткой в количестве 1 мл, помещают в пробирку,
замораживают при температуре -18 °С. В дальнейшем образцы отмытых эритроцитов
хранят при температуре -78 °С до момента проведения анализа. Уровень общего глутатиона и общего гомоцистеина отмытых эритроцитов определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC - high-performance liquid chromatography) с
флуоресцентной детекцией с использованием высокореагентного восстановителя SBD-F
(ammonium 7-fluorobenzo-2-oxa-1,3-diazole-4-sulfonate) фирмы "Fluca" (Германия) на аппарате "Agilent 1100".
В день проведения анализа образцы замороженных отмытых эритроцитов размораживали при комнатной температуре и добавляли к ним равный объем воды, после чего гомогенизировали. 50 мкл полученного гомогената смешивали с 5 мкл раствора ТСЕР (tris(2carboxylethyl)phosphine) (100 мг/мл), после чего оставляли при комнатной температуре на
30 минут. Затем осаждали белки добавлением 50 мкл 10 % раствора ТХУ (трихлоруксусная кислота) и центрифугировали при 4 °С в течение 15 мин при 16000 g. В микропробирку объемом 200 мкл, содержащую 2 мкл 1,55 М NaOH, 12,5 мкл 0,125 М Na-боратного
буфера с 200 мг/л ЭДТА, рН 9,5, и 5 мкл раствора SBD-F (ammonium 7-fluorobenzo-2-oxa1,3-diazole-4-sulfonate) (1 мг/мл) в аналогичном буфере, вносили 10 мкл супернатанта и
инкубировали 1 ч при 60 °С. После охлаждения при комнатной температуре в систему
вводили 10 мкл реакционной смеси [Gilfix B.M., Blank D.W., Rosenblatt D.S. Novel reductant for determination of total plasma homocysteine. Clin. Chem., 1997. Vol. 43(4).- P. 687-688].
Разделение осуществляли на колонке Диасорб 130 С16Т, 3×250 мм, 7 мкм. Подвижная
фаза: 0,1 М NaH2PO4, 17 мМ СН3СООН, рН 3,65, 40 мг/л ЭДТА, 3 % ацетонитрила. Скорость потока 0,6 мл/мин, температура колонки 30 °С. Детектирование осуществлялось по
флуоресценции, 379/510 нм. Определения проводили на хроматографической системе
Agilent 1100, содержащей 4-канальный градиентный насос, термостат колонок, автосамплер и детектор флуоресценции. Регистрация хроматограмм и их количественная обработка осуществлялись с помощью Agilent ChemStation A10.01.
Если уровень глутатиона в отмытых эритроцитах составляет 500-700 мкмоль/л и/или
коэффициент глутатион/гомоцистеин равен 300-500, прогнозируют высокую вероятность
врожденного порока сердца у плода.
Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ "STATISTICA 6.0", "Microsoft Excel". Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (Me, 25 %, 75 %). Сравнение
групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни. При помощи метода четырехпольных таблиц рассчитывались основные операционные характеристики теста определения уровня общего глутатиона и коэффициента глутатион/гомоцистеин в отмытых
эритроцитах: чувствительность, специфичность, прогностическая ценность положительного результата.
Для доказательства заявляемого способа проведено исследование уровней общего глутатиона и общего гомоцистеина в отмытых эритроцитах у 69 беременных женщин, которые были разделены на 2 группы. Основную группу составили 17 пациенток, у которых
имелись различные виды врожденных пороков сердца у плода (табл. 1), подтвержденные
2
BY 13111 C1 2010.04.30
при патологоанатомическом исследовании абортусов либо при обследовании новорожденных детей.
Таблица 1
Характеристика выявленных врожденных пороков сердца
Количество наВид врожденных пороков сердца
блюдений
Дефекты межпредсердной или межжелудочковой перегородки
3
Сочетание дефекта перегородки и общего артериального ствола
4
Коарктация аорты
2
Транспозиция магистральных сосудов
2
Синдром гипоплазии левых отделов сердца
3
Аномальный дренаж легочных вен
1
Полная форма атриовентрикулярной коммуникации
1
Тетрада Фалло
1
Всего:
17
Группу сравнения составили 52 пациентки, которые родили детей без врожденных
аномалий. Уровни общего глутатиона, общего гомоцистеина и значения коэффициента
глутатион/гомоцистеин в отмытых эритроцитах у пациенток основной группы и группы
сравнения представлены в табл. 2.
Таблица 2
Значения уровней общего глутатиона (мкмоль/л), общего гомоцистеина (мкмоль/л) и
коэффициента глутатион/гомоцистеин в отмытых эритроцитах у пациенток
основной группы и группы сравнения
Глутатион Me
Гомоцистеин Me
Глутатион/гомоцистеин
Исследуемые группы
(25 % - 75 %)
(25 % - 75 %)
Me (25 % - 75 %)
Основная группа
704,12
1,65
445,03
(n = 17)
(623,49-787,81)*
(1,22-1,88)
(352,55-569,26)*
Группа сравнения
919,03
1,39
684,82
(n = 52)
(661,05-1246,82)
(1,08-2,06)
(485,283-800,39)
* - различия с группой сравнения достоверны (р < 0,05).
При уровне общего глутатиона в отмытых эритроцитах 500-700 мкмоль/л диагностическая чувствительность теста составляет 41,6 %, диагностическая специфичность 70,7 %, прогностическая ценность положительного результата теста - 22,6 %. При значениях коэффициента глутатион/гомоцистеин в отмытых эритроцитах в интервале 300-500
диагностическая чувствительность теста составляет 41,6 %, диагностическая специфичность - 80,48 %, прогностическая ценность положительного результата теста - 22,6 %.
Таким образом, заявляемый способ прогнозирования врожденного порока сердца у
плода позволяет сформировать группы риска среди беременных женщин для проведения
дополнительных диагностических мероприятий с целью подтверждения или исключения
подобного вида врожденных аномалий.
Данный способ может быть применен в работе медико-генетических консультаций и
перинатальных центров для прогнозирования высокой вероятности возникновения врожденных пороков сердца у плода.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
86 Кб
Теги
патент, by13111
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа