close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13119

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/487
СПОСОБ ОЦЕНКИ АНТИГРИБКОВОЙ АКТИВНОСТИ
РАСТИТЕЛЬНОГО ЭКСТРАКТА
(21) Номер заявки: a 20080729
(22) 2008.06.04
(43) 2010.02.28
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Дудчик Наталья Владимировна; Филонов Валерий Петрович;
Колядич Елена Сергеевна; Мельникова Людмила Александровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научно-практический центр гигиены"
(BY)
BY 13119 C1 2010.04.30
BY (11) 13119
(13) C1
(19)
(56) ДУДЧИК Н.В. и др. Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии. Материалы Международной конференции. Минск, 2004. - С. 199-201.
RU 2240556 C2, 2004.
UA 26942 U, 2007.
БАРОНЕЦ Н.Г. и др. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2001. - № 5. - С. 71-73.
RU 2189040 C2, 2002.
RU 2289132 C1, 2006.
(57)
Способ оценки антигрибковой активности растительного экстракта, заключающийся в
том, что готовят питательную среду с pH 6,6-7,0, содержащую 2,0 г пептона, 1,0 г глюкозы, 3,0 г мальтозы и воду дистиллированную до 100 мл, которую инокулируют тесткультурой, выбранной из штаммов дрожжеподобных, плесневых или мицелиальных грибов до конечной концентрации 1⋅104-1⋅105 клеток/мл, инокулят разливают в измерительные ячейки микробиологического анализатора, в часть ячеек вносят растительный
экстракт в последовательно увеличивающихся концентрациях, тест-культуру культивируют
при температуре 22-28 °С с одновременной параллельной импедиметрической регистрацией показателей для определения времени детекции DT роста грибковой тест-культуры,
при увеличении значения DT роста тест-культуры в питательной среде с растительным
экстрактом по сравнению с DT роста тест-культуры в питательной среде без экстракта в
1,5 раза определяют показатель I50, соответствующий концентрации растительного экстракта, при которой ингибируется рост грибковой тест-культуры на 50 %, и при значении I50,
находящемся в диапазоне от 1 % до 20 %, антигрибковую активность растительного экстракта оценивают как выраженную, при I50, находящемся в диапазоне от 20 % до 50 %, как среднюю, а при I50, находящемся в диапазоне от 50 % до 100 %, - как слабую.
Изобретение относится к разделу гигиены питания, санитарной микробиологии и фармакологии.
Задачей заявленного изобретения является увеличение области применения способа в
отношении дрожжеподобных и плесневых грибов, повышение чувствительности способа,
сокращение времени тестирования, а также разработка количественных характеристик
оценки степени антигрибковой активности.
BY 13119 C1 2010.04.30
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ оценки антигрибковой активности растительного экстракта, заключающийся в том, что готовят питательную среду с pH 6,6-7,0, содержащую 2,0 г пептона,
1,0 г глюкозы, 3,0 г мальтозы и воду дистиллированную до 100 мл, которую инокулируют
тест-культурой, выбранной из штаммов дрожжеподобных, плесневых или мицелиальных
грибов до конечной концентрации 1⋅104-1⋅105 клеток/мл, инокулят разливают в измерительные ячейки микробиологического анализатора, в часть ячеек вносят растительный
экстракт в последовательно увеличивающихся концентрациях, тест-культуру культивируют при температуре 22-28 °С с одновременной импедиметрической регистрацией показателей для определения времени детекции DT роста грибковой тест-культуры, при
увеличении значения DT роста тест-культуры в питательной среде с растительным экстрактом по сравнению с DT роста тест-культуры в питательной среде без экстракта в 1,5
раза определяют показатель I50, соответствующий концентрации растительного экстракта,
при которой ингибируется рост грибковой тест-культуры на 50 %, и при значении I50, находящемся в диапазоне от 1 % до 20 %, антигрибковую активность растительного экстракта оценивают как выраженную, при I50, находящемся в диапазоне от 20 % до 50 %, как среднюю, а при I50, находящемся в диапазоне от 50 % до 100 %, - как слабую.
Для оценки степени антигрибковой активности предложен показатель I50 - такая концентрация растительных экстрактов, которая ингибирует рост грибковых тест-культур на 50 %.
Предложены также количественные параметры показателя I50 для оценки степени
(класса) антигрибковой активности растительных экстрактов.
Штаммы могут быть получены из государственных музеев и коллекций, а также быть
выделены в виде изолятов в ходе микробиологических исследований.
Оценка роста тест-культур грибов по изменению электрохимических показателей среды указанного состава позволяет повысить чувствительность способа за счет того, что
осуществляется импедиметрическая регистрация электрохимических изменений питательной среды, а это позволяет провести детекцию роста грибковой тест-культуры в течение 4-10 ч, а также увеличить число грибковых тест-культур при проведении анализа.
Пример выполнения.
Пример 1.
Требуется определить I50 для растительного экстракта 1.
В качестве тест-культур используют дрожжеподобный гриб Candida albicans ATCC
10231, полученный из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ),
и Candida albicans изолят 5, полученный в ходе санитарно-гигиенического исследования
пищевого производства.
Штаммы являются типичными по культурально-морфологическим и биохимическим
свойствам. Тест-штаммы хранят при температуре (5 ± 1) °С под слоем стерильного вазелинового масла на среде Сабуро.
Для приготовления рабочей культуры тест-штамм культивируют в термостате на среде указанного состава, в которую добавляют агар до 2 %. Режим культивирования: при
(22 + 2) °С для Candida albicans в течение 48-72 ч. Смывы проводят фосфатным буферным
раствором, используя стандарт мутности на 10 единиц мутности. Содержание клеток тестштамма в инокуляте доводят до 106 КОЕ/мл.
Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на среду приведенного состава, в которую добавляют агар до 2 %.
В качестве питательной среды при проведении исследования используют среду следующего состава (на 100,0 мл дистиллированной воды):
1 Пептон
5,0 г
2 Глюкоза
1,0 г
3 Мальтоза
3,0 г
4 Вода дистиллированная 100мл
pH 6,6-7,0. Стерилизация 121 °С в течение 15 мин.
2
BY 13119 C1 2010.04.30
Приготовленную среду инокулируют параллельно тест-штаммом Candida albicans
ATCC 10231 и Candida albicans изолят 5 до конечной концентрации 1x104-1x105 клеток/мл,
разливают в измерительные ячейки анализатора, вносят исследуемый растительный экстракт в последовательно увеличивающихся концентрациях и инкубируют в термоинкубаторе в течение 10-12 ч при (22 ± 2) °С.
Получены следующие результаты.
Время детекции роста тест-культуры DT (без исследуемого экстракта) составляет: для
Candida albicans ATCC 10231 - 6,2 часа, для Candida albicans изолят - 5-5,8 ч.
Для экстракта 1 в последовательно увеличивающихся концентрациях время детекции
составляет:
Таблица 1
Candida albicans ATCC 10231
Candida albicans изолят 5
Концентрация 5 % - 6,3 часа
Концентрация 5 % - 5,9 часа
Концентрация 10 % - 6,9 часа
Концентрация 10 % - 6,4 часа
Концентрация 20 % - 7,8 часа
Концентрация 20 % - 7,9 часа
Концентрация 40 % - 9,3 часа.
Концентрация 40 % - 8,7 часа.
Таким образом, при внесении в среду экстракта 1 в концентрации 40 % время детекции роста тест-культуры Candida albicans ATCC 10231 возросло с 6,2 до 9,3 ч, а тесткультуры Candida albicans изолят 5 возросло с 5,8 до 8,7 ч, т.е. увеличилось на 50 %.
Поэтому I50 для экстракта 1 составляет 40 % для обеих тест-культур.
Согласно предложенным критериям оценки, растительный экстракт 1 проявляет среднюю антигрибковую активность в отношении Candida albicans ATCC 10231 и Candida albicans изолят 5, т.к. к 50 % ингибированию роста культур привела концентрация 40 %.
Пример 2.
Требуется определить I50 для растительного экстракта 2.
В качестве тест-культур используют мицелиальный гриб Penicillium italicum БИМ F19 и дрожжеподобный гриб Candida albicans ATCC 10231. Тест-штамм Candida albicans
ATCC 10231 получен из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов
(ВКПМ). Тест-штамм Penicillium italicum БИМ F-19 получен из Национальной коллекции
непатогенных микроорганизмов (научая коллекция типовых и промышленно-ценных
микроорганизмов) Института микробиологии НАН Беларуси.
Штаммы являются типичными по культурально-морфологическим и биохимическим
свойствам. Тест-штаммы хранят при температуре (5 ± 1) °С под слоем стерильного вазелинового масла на среде Сабуро.
Пробоподготовку и проведение анализа проводят по методике, описанной в п. 1 раздела "Примеры выполнения".
Получены следующие результаты.
Время детекции роста тест-культуры DT (без исследуемой композиции) составляет:
для Penicillium italicum БИМ F-19 - 7,5 ч, для Candida albicans ATCC 10231 - 6,2 ч.
Для экстракта 2 в последовательно увеличивающихся концентрациях время детекции
составляет:
Таблица 2
Penicillium italicum БИМ F-19
Candida albicans ATCC 10231
Концентрация 15 % - 7,9 часа
Концентрация 15 % - 6,9 часа
Концентрация 30 % - 10,8 часа
Концентрация 30 % - 7,7 часа
Концентрация 60 % - 11,3 часа
Концентрация 60 % - 9,3 часа
Таким образом, при внесении в среду экстракта 2 в указанных концентрациях время
детекции роста тест-культуры Penicillium italicum БИМ F-19 возросло с 7,5 до 11,3 ч при
внесении концентрации 60 %.
3
BY 13119 C1 2010.04.30
Время детекции роста тест-культуры Candida albicans ATCC 10231 возросло с 6,2 до
9,3 ч для концентрации 60 %, т.е. увеличилось на 50 %.
Поэтому I50 для экстракта 2 составляет I50 = 60 % в отношении двух протестированных
грибных штаммов.
Согласно предложенным критериям оценки, растительный экстракт 2 проявляет слабую антигрибковую активность в отношении Penicillium italicum БИМ F-19 и Candida albicans ATCC 10231, т.к. только 60 % этой композиции привели к 50 % ингибированию роста
культур.
Таким образом, достигаемый технический результат заявленного способа заключается
в увеличении чувствительности, уменьшении времени тестирования до 2,2-9,0 ч, что дает
основание рекомендовать его в качестве экспресс-метода, а также увеличении числа тесткультур при проведении определения показателя антигрибковой активности I50, а также
дает возможность оценить степень антигрибковой активности растительных экстрактов.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
80 Кб
Теги
by13119, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа