close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13131

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12P 23/00
C 12P 1/02
A 61K 36/06
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАРОТИНОИДСОДЕРЖАЩЕЙ
БИОМАССЫ, ОБЛАДАЮЩЕЙ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИМ
И АНТИОКСИДАНТНЫМ ДЕЙСТВИЕМ
(21) Номер заявки: a 20080925
(22) 2008.07.15
(43) 2010.02.28
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт микробиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Щерба Виктор Васильевич;
Бабицкая Валентина Григорьевна;
Бирман Борис Яковлевич; Гвоздкова
Татьяна Семеновна; Буйко Наталья
Вячеславовна; Черноок Татьяна Владимировна; Юдасин Аркадий Моисеевич; Зинина Наталья Владимировна; Иконникова Наталья Валерьевна
(BY)
BY 13131 C1 2010.04.30
BY (11) 13131
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт микробиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) BY 4914 С1, 2003.
BY 5021 С1, 2003.
RU 2257222 С1, 2005.
ГВОЗДКОВА Т.С. и др. Успехи медицинской микологии. Материалы третьего Всероссийского конгресса по медицинской микологии. Т.V. - М., 2005. С. 257-259.
КАПИЧ А.Н. и др. Проблемы микологии и биотехнологии. Материалы международной конференции. - Минск,
1998. - С. 52-53.
(57)
1. Способ получения каротиноидсодержащей биомассы, обладающей иммуностимулирующим и антиоксидантным действием, из гриба-продуцента Laetiporus sulphureus,
включающий глубинное культивирование гриба на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим получением биомассы путем ее отделения от культурального фильтрата, отличающийся тем, что в качестве продуцента
используют штамм гриба Laetiporus sulphureus БИМ F-361 Д, а глубинное культивирование ведут при pH среды 3,0-3,5.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что каротиноидсодержащую биомассу дополнительно обрабатывают 15 %-ной аскорбиновой кислотой и сушат при температуре не
выше 60 °С.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробиологическим способам
получения биомассы микроорганизмов, содержащей комплекс биологически активных
веществ, в том числе каротиноиды, которая может быть использована в качестве лечебнопрофилактического средства в животноводстве, птицеводстве, в пищевой промышленности, медицине.
Каротиноиды (кетокаротиноиды, содержащие одну или несколько кетогрупп в молекуле) являются природными соединениями, биосинтез которых осуществляется лишь растениями и микроорганизмами. Человек и животные не способны синтезировать их и
BY 13131 C1 2010.04.30
должны регулярно получать с пищей в виду того, что они выполняют в организме целый
ряд жизненноважных функций. Разнообразие функциональных свойств каротиноидных
пигментов обусловливает и их биологическую ценность, связанную с антиканцерогенным,
гиполипидемическим, радиозащитным и др. действиями.
Принимая во внимание способность каротиноидов связывать активный кислород и
защищать клеточные структуры от разрушения свободными радикалами, образующимися
под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды, применение каротиноидсодержащих препаратов, в т.ч. биомасс, в перечисленных областях весьма перспективно [1-3].
Известны многочисленные примеры использования β-каротина, других каротиноидов (зеаксантин, астаксантин и др.), а также различных их композиций и других пигментов желтой или оранжевой окраски (например, хинонов, убихинона G10), полученных на основе
микробного синтеза, в качестве пищевых и кормовых добавок, лечебно-профилактических
и косметических средств, красителей и др. [4, 5].
Недостатком данных способов является использование для получения пигментсодержащей биомассы низшего гриба Fusarium sambucinum ВКПМ F867 в смеси с пробиотиком
Авилак-1К. Гриб синтезирует не каротиноидный пигмент, обладающий широким спектром действия, а незначительные количества пигмента убихинона G 10. Использование
для получения кормовой добавки комплекса соединений гриба и пробиотиков удорожает
стоимость препарата.
Известен способ получения и использования кетокаротиноидов, в частности астаксантина и астаксантинсодержащей биомассы на основе мутантных штаммов дрожжей Phaffia
rhodozyma, в качестве добавки в различные пищевые продукты, в корм домашней птице и
в аквакультуру как фармацевтическое средство, в косметической промышленности и др.
Недостатком данного способа является низкая продуктивность штамма дрожжей: выход
биомассы - 8-10 г/л и каротиноидов 3000-8000 мкг/г сухой биомассы, высокое содержание
в биомассе вредных для организма нуклеиновых кислот (свыше 8 %), а также то, что с целью получения биомассы культивирование дрожжей проводят на сложных дорогостоящих
питательных средах, в состав которых входят дрожжевой экстракт, витамины, ростактивирующие вещества. Культивирование дрожжей ведется в строго стерильных условиях [6].
Известен способ получения средства, обладающего радиозащитным действием путем
культивирования мицелия гриба на питательной среде, экстракции его этиловым спиртом,
при этом в качестве продуцирующего кетокаротиноиды (каротиноиды) гриба используют
Laetiporus sulphureus (Bull.; Fr.) Murr, экстракцию проводят при соотношении мицелия и
этилового спирта 1:20, а разведение экстракта осуществляют до содержания каротиноидов
2,0-2,5 мкг/мл [7]. Недостатками указанного способа являются:
длительный (до 46 сут.) процесс получения каротиноидсодержащего мицелия:
10-14 сут. - выделение мицелиальной культуры из плодового тела гриба на твердой
питательной среде;
14 сут. - выращивание мицелиальной культуры в пробирках на скошенном суслоагаре;
12-14 сут. - выращивание гриба в жидкой питательной среде с целью получения инокулюма;
6 сут. - получение мицелия.
использование для глубинного культивирования гриба дорогостоящей питательной
среды (глюкоза - 20 г/л, пептон - 5 г/л, кукурузный экстракт - 3 г/л).
Наиболее близкими по технической сущности и достигаемому результату является
"Способ получения кетокаротиноидов" [8]. Каротиноиды (кетокаротиноиды) получают
путем глубинного культивирования штамма Laetiporus sulphureus M 131 в колбах на качалке
на глюкозо-пептонной среде следующего состава, г/л: глюкоза - 15,0; пептон - 3,0; КН2РО4 0,6; К2НРО4 ⋅ 2Н2О - 0,4; MgSO4 ⋅ 7Н2О - 0,5; кукурузный экстракт - 3,0 мл/л. Культивирование гриба осуществляют при рН среды 2,0-3,0, температуре 26-28 в течение 7 сут.
2
BY 13131 C1 2010.04.30
Содержание кетокаротиноидов (каротиноидов) в биомассе составляет: 5950 мкг/г при извлечении этиловым спиртом и 11640 мкг/ г - при извлечении ацетоном. Однако
штамм и получаемый на его основе мицелий характеризуются недостаточно высоким содержанием основного вещества - кетокаротиноидов.
Недостатками данного способа получения кетокаротиноидов являются:
низкий выход биомассы (8-10 г/л) при глубинном культивировании гриба;
сравнительно низкое содержание в биомассе кетокаротиноидов (5950 мкг/г, особенно
при использовании нетоксичного экстрагента этилового спирта, поскольку использование
ацетоновых экстрактов недопустимо в кормовой, пищевой и фармацевтической промышленностях);
отсутствие в экстракте полноценного комплекса физиологически активных соединений (ФАС), присущих мицелию гриба (липидов, белков, углеводов, минеральных элементов фенольных соединений);
использование для культивирования гриба при получении кетокаротиноидов дорогого
сырья: глюкоза, пептон, кукурузный экстракт;
длительность культивирования используемого штамма-продуцента - 7 сут. Задачей
данного изобретения является разработка более экономичного способа получения каротиноидсодержащей биомассы гриба путем использования нового штамма, более технологичного и продуктивного, способного расти на дешевых субстратах и образовывать
каротиноидсодержащую биомассу в более короткие сроки, а также стабилизация каротиноидсодержащей биомассы.
Поставленная задача достигается путем использования для получения каротиноидсодержащей биомассы иммуностимулирующего и антиоксидантного действия более эффективного нового штамма - L. sulphureus БИМ F - 361 Д, синтезирующего:
более чем в 1,7 раза большее количество биомассы (14-16 г/л против 8-10 г/л);
повышенное содержание в биомассе каротиноидов (до 13000-15000 мкг/г при экстрагировании этиловым спиртом и 16000-18000 мкг/г при экстрагировании ацетоном против
5950 мкг/г и 11640 мкг/г соответственно у прототипа);
естественный для человека и животных комплекс ФАС: каротиноиды, липиды, полиеновые жирные кислоты, фосфолипиды, эргостерин, белок, углеводы, фенольные соединения;
использующего для роста и продукции каротиноидов дешевое сырье (ржаную или
пшеничную, или ячменную муку и картофельный крахмал без добавления солей и факторов роста;
отличающегося более высокой скоростью роста (4-5 сут против 7 сут);
в предлагаемом способе с целью повышения стабильности и сохранности липокаротиноидного комплекса биомассу перед сушкой предлагается обрабатывать 15 %-м раствором аскорбиновой кислоты в соотношении 1:10.
Предлагаемый штамм L. sulphureus БИМ F- 361 Д выделен из плодовых тел гриба трутовика серно-желтого, росшего на пне дуба, Беларусь, Минский район, дер. Глебковичи.
Штамм депонирован в коллекции непатогенных микроорганизмов ГНУ "Институт микробиологии НАН Беларуси". Культура также поддерживается в коллекции мицелиальных
грибов лаборатории экспериментальной микологии ГНУ "Институт микробиологии НАН
Беларуси". Штамм хранится при 4-6 °С на сусло-агаре.
Культурально-морфологическая характеристика. На сусло-агаре колонии мучнистые,
хлопьевидно-опушенные, оранжево-красноватые или розоватые, медленно растущие, реверзум не изменяет окраски. Генеративные гифы септированные, широкие с окрашенными включениями оранжево-красного цвета, без пряжек, нормально ветвящиеся, имеют
терминальные и интеркалярные хламидоспоры. Глубинный мицелий в виде пеллет от ярко
3
BY 13131 C1 2010.04.30
оранжевого до красного цвета, достигающих в диаметре 0,2-0,5 мм и более, в зависимости
от условий культивирования. Запах глубинного мицелия медовый.
Физиолого-биохимическая характеристика. Оптимальные значения рН среды -3,0-3,5
(т.е. его можно отнести к ацидофильным), температурный оптимум - 26-28 °С, видимый
свет стимулирует образование кетокаротиноидов.
Культура утилизирует в качестве единственного источника углерода моно-, ди- и полисахариды, сахароспирты. Лучшими источниками углерода, как для роста, так и для синтеза каротиноидов являются глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза и крахмал. Из
минеральных источников азотного питания для гриба наиболее доступными являются аммонийные формы азота, а из органических - пептон, дрожжевой автолизат, кукурузный
или дрожжевой экстракты.
Штамм не является зоо- и фитопатогенным. Токсикологические исследования проводились на лабораторных животных: крысы, беспородные белые мыши, морские свинки,
кролики, цыплята-бройлеры. Установлено, что сам штамм, экстракты и каротиноидсодержащая биомасса не обладают кумулятивными свойствами, раздражающим и общерезорбтивным действием, на основании чего сделан вывод об их безвредности.
Сведения, подтверждающие получение каротиноидсодержащей биомассы и возможность осуществления предлагаемого изобретения:
Пример 1.
Культуру гриба L. sulphureus БИМ F - 361 Д выращивают в пробирках на скошенном
сусло-агаре при 25-27 °С в течение 8-10 сут. Посевной материал выращивают на пивном
неохмеленном сусле (7-8 °Б), которое разливают по 200 мл в конические колбы объемом
0,5 л или по 400 мл в колбы объемом 1,0 л, или по 750 мл в колбы объемом 2,0 л и засевают смывом - 1-3 косяка на колбу. Инокулюм выращивают на круговой качалке (160-180
об/мин) при 25-27 °С и используют для засева ферментера объемом 30 л с 25 л питательной среды следующего состава: ржаная мука - 30,0 г/л, картофельный крахмал -10,0 г/л.
Количество посевного материала 10 %.
Условия культивирования:
интенсивность аэрации - 0,5-1,0 л/л среды/мин.;
скорость перемешивания - 50 об/мин;
рН среды - 3,0-3,5;
температура- 25-27 °С;
длительность культивирования - 96-120 ч.
Полученный мицелий отфильтровывают, промывают дистиллированной водой, отжимают, обрабатывают 15 %-й аскорбиновой кислотой при соотношении 1:10 с целью стабилизации липокаротиноидного комплекса и сушат при температуре не выше 60 °С. Без
обработки количество каротиноидов в биомассе составляет 10000-13000 мкг/г, с обработкой - 13000-15000 и 16000-18000 мкг/г при экстрагировании этанолом и ацетоном. Дальнейшее увеличение концентрации аскорбиновой кислоты незначительно (на 0,5-1,0 %)
повышает стабильность и содержание каротиноидов, однако это экономически не выгодно.
Экономически не выгодно и увеличение соотношения свыше 1:10 (аскорбиновая кислота биомасса). Сушка при более низких температурах удлиняет процесс получения каротиноидсодержащей биомассы, при более высоких - приводит к окислению липокаротиноидного комплекса.
Биомасса гриба имеет следующий состав:
выход биомассы
14,0 г/л
каротиноиды
14000 мкг/г (экстракция этанолом)
18000 мкг/г (экстракция ацетоном)
липиды
24,0 %
линолевая кислота
70,0 % (от суммы жирных кислот)
4
BY 13131 C1 2010.04.30
фосфолипиды
1,5 %
эргостерин
1,6 %
белки
22,0 %
углеводы
46,0 %
нуклеиновые кислоты
2,0 %
минеральные вещества
3,5 %
фенольные соединения
2000 мг %.
Пример 2.
Выращивание гриба осуществляют аналогично изложенному в примере 1. В качестве
питательной среды используется пшеничная мука в количестве 30,0 г/л и картофельный
крахмал - 10,0 г/л.
Биомасса гриба имеет следующий состав:
выход биомассы
16,0 г/л
каротиноиды
15000 мкг/г (экстракция этанолом)
16000 мкг/г (экстракция ацетоном)
липиды
26,0 %
линолевая кислота
75,0 % (от суммы жирных кислот)
фосфолипиды
1,7 %
эргостерин
1,5 %
белки
24,0 %
углеводы
45,0 %
нуклеиновые кислоты
1,5 %
минеральные вещества
3,0 %
фенольные соединения
2500 мг %.
Пример 3.
Выращивание гриба осуществляют аналогично изложенному в примерах 1, 2. В качестве питательной среды используется пшеничная мука в количестве 15,0 г/л, ячменная
мука 15,0 г/л и картофельный крахмал - 10,0 г/л.
Биомасса гриба имеет следующий состав:
выход биомассы
15,0 г/л
каротиноиды
13000 мкг/г (экстракция этанолом)
17000 мкг/г (экстракция ацетоном)
липиды
28,0 %
линолевая кислота
65,0 % (от суммы жирных кислот)
фосфолипиды
1,5 %
эргостерин
1,2 %
белки
22,0 %
углеводы
43,0 %
нуклеиновые кислоты
1,5 %
минеральные вещества
3,5 %
фенольные соединения
2100мг %.
Антиоксидантная активность спиртовых экстрактов биомассы гриба, обусловленная
повышенным уровнем полиеновых липидных компонентов - каротиноидов, фосфолипидов, линолевой кислоты, а также фенольных соединений составляет 80-90 % по отношению к ионолу.
Полученная предлагаемым способом грибная биомасса обладает приятным вкусом и
грибным ароматом, содержит естественные для животных и человека белки (22-24,0 %),
все незаменимые аминокислоты, в т. ч. лизин - 5,8-6,5 %, цистин + метионин - 4,1-5,0 %,
лейцин - 5,3-6,0 %, фенилаланин - 5,2-6,0 % и др., значительный набор макро- и микроэлементов (мг/100 г): К (366-410), Na (370-390), Са (670-690), Mg (27-40), Zn (1-3), фенольные соединения (2000-2500 мг %).
5
BY 13131 C1 2010.04.30
Таким образом, использование предлагаемого способа получения каротиноидсодержащей биомассы иммуностимулирующего и антиоксидантного действия путем глубинного культивирования нового штамма гриба L. sulphureus БИМ F - 361 Д на дешевых средах
позволяет повысить выход биомассы, содержание в ней каротиноидов, полноценных
ФАС, использовать дешевое сырье без добавления солей и факторов роста и сократить
сроки культивирования.
Таблица 1
Сравнительная характеристика предлагаемого способа
получения каротиноидсодержащей биомассы и прототипа
Предлагаемый способ получения
Прототип Патент РБ № 4914
Биомасса - 14-16 г/л
Биомасса - 8-10 г/л
Каротиноиды - 13000-15000 мкг/r при
Каротиноиды - 5950 мкг/г при
экстрагировании
экстрагировании
этиловым спиртом;
этиловым спиртом;
-16000-18000 мкг/г
-11640 мкг/г
(экстракция ацетоном)
(экстракция ацетоном)
ФАС: каротиноиды, липиды, белки,
ФАС нет
углеводы, фенольные соединения
Сырье: ржаная, пшеничная, ячменная мука, Сырье: глюкозо-пептонная среда - глюкоза,
картофельный крахмал, без добавления
пептон, кукурузный экстракт, минеральные
солей
соли
Время культивирования - 4-5 сут
Время культивирования - 7 сут
Существенно и то, что у штамма L. sulphureus БИМ F - 361 Д обнаружены новые неизвестные ранее для грибов L. sulphureus свойства: способность синтезировать значительное
количество фенольных соединений (до 2500 мг %) - натуральных антиоксидантов, образовывать большое количество (до 28 %) липидов, а у каротиноидсодержащей биомассы высокий иммуностимулирующий эффект, высокая антиоксидантная активность.
Иммуностимулирующее действие каротиноидсодержащей биомассы изучали, используя фагоцитарный тест, основанный на определении поглотительной способности нейтрофилов крови человека по отношению к микробной тест-культуре (Staphylococcus
aureus) после их совместной инкубации. В опытах in vitro установлено, что каротиноидсодержащая биомасса, полученная путем глубинного культивирования L. sulphureus БИМ F361 Д, оказывает стимулирующий эффект на фагоцитарную активность нейтрофилов в
концентрации 100-150 мкг/мл.
Исследовано иммуностимулирующее действие каротиноидсодержащей биомассы и в
опытах in vivo. В эксперименте были использованы беспородные мыши, получавшие ежедневно в течение 10 сут. per os биомассу из расчета 50,0 мг/кг. Индукция иммунного ответа производилась суспензией эритроцитов барана (0,1 мл суспензии в концентрации
1 × 108 клеток/мл на мышь) по стандартной схеме иммунизации. Мицелий при введении
per os не оказывал влияния на массу тела, уровень лейкоцитов, лейкоцитарную формулу,
фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов и состояние системы комплимента. Иммунотропный эффект грибной биомассы направлен в основном на усиление клеточного иммунного ответа, что проявляется достоверным увеличением индекса ГЗТ
(реакция гиперчувствительности замедленного типа), селезеночного индекса. Прослеживалась тенденция к увеличению гемагглютининов класса М и G. Подтверждением иммуностимулирующего действия каротиноидсодержащей биомассы является изучение
влияния ее на напряженность поствакцинального иммунитета цыплят (табл. 2).
6
BY 13131 C1 2010.04.30
Таблица 2
Влияние каротиноидсодержащей биомассы
на напряженность поствакцинального иммунитета цыплят
Титр поствакциналь% к контролю
ных антител к БН,
log2
1 -я опытная
0,72
5,43±1,1
114,5
2-я опытная
1,43
6,85±1,3
144,5
3-я опытная
2,15
6,79±0,35
143,2
Контрольная
4,74±0,71
100
На цыплятах-бройлерах установлено антиоксидантное, ростстимулирующее и адаптогенное действие каротиноидсодержащей биомассы. Прирост цыплят составил 12-40 %
(табл. 3).
Группа
Доза препарата,
мг/кг
Таблица 3
Динамика прироста массы тела цыплят-бройлеров
Масса цыплят
Среднесуточный
На 15-й день
На 30-й день
привес, г
В начале опыта
опыта
опыта
Опытная 1
277,7±16
666,9±47,7
711,57±52,73
433,87
Опытная 2
268,2±11,43
519±31,1
703,4±39,2
435,2
Контрольная
258±9,6
560±24,1
651,67±39,1
393,67
Гематологические и биохимические показатели крови цыплят-бройлеров подопытных
групп находились в пределах физиологической нормы. Но отмечена общая тенденция
увеличения количества эритроцитов, гемоглобина, липидов и белка. У цыплят опытной
группы активность фермента аланинаминотрансферазы (АлАТО) была на уровне цыплят
контрольной группы, что является косвенным показателем гепатопротекторного, антиоксидантного и адаптогенного действия каротиноидсодержащей биомассы гриба (табл. 4).
Группа
Таблица 4
Гематологические и биохимические показатели цыплят-бройлеров
Группа цыплят
Показатель
контроль
2 опыт
3 опыт
4 опыт
Эритроциты, млн
2,85±0,19
2,97±0,34
3,34±0,3
3,64±0,48
Гемоглобин, г/л
87±5,85
91,5±3,84
113,25±3,33
98,25±5,72
Общие липиды, г/л
7,95±1,01
10,33±1,3
8,7±0,59
11,34±1,13
Холестерин, моль/л
5,29±0,18
5,37±0,16
6,04±0,36
6,03±0,45
АлАТ, мккат/л
0,10±0,01
0,11±0,01
0,097±0,01
0,113±0,003
АсАТ, мккат/л
0,765±0,08
0,72±0,005
0,719±0,02
0,71±0,004
Белок, г/л
36,8±3,07
41,4±1,33
38,2±0,49
41,4±0,40
Альбумин, г/л
14,15±0,99
16,47±1,15
16,06±1,03
15,28±0,24
У цыплят-бройлеров отмечено снижение продукта липопероксидации - малонового диальдегида (МДА), что подтверждает антиоксидантное действие каротиноидсодержащей
биомассы (табл. 5).
7
BY 13131 C1 2010.04.30
Таблица 5
Группа
1-я опытная
2-я опытная
3-я опытная
Контрольная
Малоновый диальдегид (МДА) в сыворотке крови
и в ткани печени цыплят-бройлеров
МДА в сыворотке
МДА в сыворотке
МДА в печени
(15-й день опыта)
(30-й день опыта)
(30-й день опыта)
4,73±0,17
3,825±0,72
15,69±1,25
3,995±0,32
4,53±0,25
15,88±1,56
4,165±0,29
3,825±0,34
13,23±1,34
5,27±0,255
4,87±1,1
17,5±3,09
Таким образом, предлагаемый способ получения каротиноидсодержащей биомассы
иммуностимулирующего и антиоксидантного действия позволяет по сравнению с прототипом:
1) получать на 50-60 % большее количество биомассы;
2) на 40-46 % большее количество в биомассе каротиноидов;
3) получать в каротиноидсодержащей биомассе уникальный комплекс ФАС;
4) использовать дешевое растительное сырье без применения минеральных солей и
ростстимулирующих веществ;
5) использовать новый высокоэффективный штамм, скорость роста которого в 1,7 раза
больше скорости прототипа;
6) стабилизировать на 23-50 % каротиноидсодержащую биомассу.
Полученный эффект обусловлен использованием нового штамма гриба L. sulphurеus
БИМ F - 361 Д, применением для его выращивания дешевого и доступного сырья - ржаной,
пшеничной, ячменной муки, полученных из фуражного зерна, и картофельного крахмала
без применения минеральных солей, использованием для стабилизации каротиноидсодержащей биомассы 15 %-ной аскорбиновой кислоты и преимуществами заявляемого
способа.
Источники информации:
1. Mathews-Roth M.M. Recent progress in the medical application of carotenoids // Pure appled chemistry. - 1991. - Vol. 63. - № 3. - P. 147-156.
2. Woodall A.A., Britton G., Malcolm J. Jackson Carotenoids and protection of phospholipids in
solution or in liposomes against oxidation by peroxyl radicals. Relationship between carotenoid
structure and protective ability // Biochimica et Biophysica Acta. - 1997. - Vol. 1336. - P. 575-586.
3. Виленчик М.М. и др. Радиозащитное действие природных каротинсодержащих препаратов: исследование каротина на белых крысах // Радиобиология. - 1998. - Т. 28. - № 4. С. 542-544.
4. RU Патент 2004112505, МПК7 А 23K 1/16.
5. RU Патент 2286066, МПК7 А 23K 1/16, А 23K 1/165.
6. US Патент 5356810, МПК7 С 12Р 23/00, С 12N 1/16, 1992.
7. РБ Патент 5021, МПК7 А 61K 35/84, А 61Р 43/00, 1998.
8. РБ Патент 4914, МПК7 С 12Р 23/00, С 12Р 1/02, 1998 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
8
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
130 Кб
Теги
by13131, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа