close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13453

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.08.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 1/20
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПЕРЕСЕВА ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ
БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: a 20081200
(22) 2008.09.22
(43) 2009.04.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебская ордена "Знак Почета"
государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(72) Авторы: Зайцев Владимир Владимирович; Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович;
Кондратенко Мария Юльяновна
(BY)
BY 13453 C1 2010.08.30
BY (11) 13453
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебская ордена "Знак Почета" государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(56) BY 7321 C1, 2005.
ЗАЙЦЕВ В.В. и др. // Ученые записки
УО ВГАВМ. - 2007. - Т. 43. - Вып. 2. С. 45-48.
UA 26116 U, 2007.
RU 2202608 C2, 2003.
RU 2088258 C1, 1997.
US 4133717, 1979.
ЗАЙЦЕВ В.В. // Ветеринарная медицина Беларуси. - 2004. - № 3. - С. 8-9.
BY 3092 C1, 1999.
SU 1207140 A1, 2000.
AU 199860837 B2, 1998.
(57)
1. Питательная среда для пересева лептоспирозных бактерий, содержащая сыворотку
крови овец или кроликов и фосфатный буфер с pH 7,0-7,4, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фактор биосинтеза специфических антигенов при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5,0-10,0
фактор биосинтеза специфических антигенов
5,0
фосфатный буфер с pH 7,0-7,4
остальное,
при этом массовое соотношение сыворотки крови, фактора биосинтеза специфических антигенов и фосфатного буфера составляет 1:1:18 или 2:1:17, а фактор биосинтеза специфических антигенов имеет следующий состав, мас. %:
витамин B1
0,06
витамин B12
0,007
глицерин
0,4
трилон Б
0,02
1,0 %-ный раствор липополисахаридпептидной фракции
О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella
остальное.
2. Способ получения среды по п. 1, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор биосинтеза специфических антигенов путем суспендирования навесок витамина B1, витамина B12, глицерина и трилона Б в 1,0 %-ном растворе липополисахаридпептидной фракции О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella и
BY 13453 C1 2010.08.30
фильтрации через мембрану с размером пор 0,22 мкм, полученный фактор биосинтеза
специфических антигенов смешивают с сывороткой крови овец или кроликов и фосфатным буфером с pH 7,0-7,4.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству биологических
препаратов против лептоспироза.
Лептоспиры были выделены в чистой культуре значительно позже (1917), чем многие
другие патогенные микроорганизмы. Это связано с их повышенной требовательностью к
составу питательной среды. Первые культуры были выращены на сыворотке крови кролика, в последующих работах использовали разведенную сыворотку.
Простейшая сывороточная среда представляет собой смесь простерилизованной воды
с асептически полученной сывороткой крови кролика или овцы в разных количествах.
Известно значительное количество сывороточных сред различного состава [2]. Это
среды Уленгута, Любашенко, Терских, Кортгофа, а также полужидкая среда Флетчера.
Вторая группа сред - это полусинтетические и синтетические белковые и безбелковые
питательные среды [3].
Наиболее широкое распространение имеют следующие среды: синтетическая безбелковая среда Шенберга (1967), синтетическая безбелковая среда Торнея (1974), твинальбуминовая среда Элленгаузена в модификации Джонсона (1967), твин-альбуминовая
среда Рассела (1986), среда Элленгаузена (1967), альбуминовые среды [2].
Полусинтетические среды имеют сходный состав. Они содержат фосфатный буфер,
растворы неорганических солей, витамины B1 и B12, жирные кислоты и бычий альбумин.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
среда, приготовленная Зайцевой А.В. и Дремач Г.Э [1].
Известная среда для культивирования лептоспирозных бактерий содержит сыворотку
крови овец или кроликов и дополнительно фосфатный буфер с pH 7,0-7,4 и 0,15 %-ный
раствор липополисахаридпептидной фракции O-антигена бактерий рода Escherichia или
Salmonella при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5-10
0,15 %-ный раствор липополисахаридпептидной фракции
O-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella
1-5
фосфатный буфер, pH 7,0-7,4
остальное.
Среда такого состава обеспечивает высокое накопление лептоспирозных бактерий, но
при многократных пересевах они утрачивают биосинтез специфического антигена и отмечается снижение их иммуногенности.
Задача изобретения - повышение биологической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы, буферного раствора
добавляется фактор биосинтеза специфических антигенов. Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда для пересева лептоспирозных бактерий
содержит сыворотку крови овец или кроликов и фосфатный буфер с pH 7,0-7,4, отличается тем, что дополнительно содержит фактор биосинтеза специфических антигенов при
следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5,0-10,0
фактор биосинтеза специфических антигенов
5,0
фосфатный буфер, pH 7,0-7,4
остальное,
при этом массовое соотношение сыворотки крови, фактора биосинтеза специфических антигенов и фосфатного буфера составляет 1:1:18 или 2:1:17, а фактор биосинтеза специфических антигенов имеет следующий состав, мас. %:
0,06
витамин B1
витамин B12
0,007
2
BY 13453 C1 2010.08.30
глицерин
0,4
трилон Б
0,02
1,0 %-ный раствор липополисахаридпептидной фракции
O-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella
остальное.
Способ получения среды для пересева лептоспирозных бактерий, заключающийся в
том, что предварительно готовят фактор биосинтеза специфических антигенов путем суспендирования навесок витамина B1 витамина B12, глицерина и трилона Б в 1,0 %-ном растворе липополисахаридпептидной фракции O-антигена бактерий рода Escherichia или
Salmonella и фильтрации через мембрану с размером пор 0,22 мкм, полученный фактор
биосинтеза специфических антигенов смешивают с сывороткой крови овец или кроликов
и фосфатным буфером с pH 7,0-7,4.
Пример 1
Из яремной вены овец производили забор крови. После образования сгустка форменных элементов и фибрина отделяли сыворотку, прогревали при температуре 56-58 °С в
течение 30-60 минут. Инактивированную сыворотку фильтровали последовательно через
фильтры с величиной пор 1,0, 0,45 и 0,22 мкм.
Фактор биосинтеза готовили путем ресуспендирования навесок витаминов B1 B12,
глицерина и трилона Б в 1,0 %-ном растворе липополисахаридпептидной фракции Oантигена бактерий рода Escherichia или Salmonella при следующем соотношении компонентов, мас. %:
0,06
витамин B1
витамин B12
0,007
глицерин
0,4
трилон Б
0,02
1,0 %-ный раствор липополисахаридпептидной фракции
О-антигена бактерий рода Escherichia или Salmonella
остальное.
Среду готовили путем смешивания сыворотки крови овец, фактора биосинтеза и фосфатно-буферного раствора в соотношении 1:1:18.
Для оценки антигенной активности лептоспиры пересевали 10-кратно с интервалом
5 суток на приготовленной питательной среде и вводили внутривенно кроликам по
15 млн. микробных клеток. Через 24 суток у иммунизированных животных производили
забор крови и учет титров специфических антител в РМА.
Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно 1:1600,
1:800, 1:1600, 1:800, 1:800 и 1:1600.
Пример 2
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но для приготовления среды использовали сыворотку крови кролика.
Сыворотку крови кролика, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:18.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:1600.
Пример 3
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 2:1:17.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:1600.
Пример 4
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор
биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 2:1:17.
3
BY 13453 C1 2010.08.30
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:1600, 1:1600, 1:800 и 1:1600.
Пример 5
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:23.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:400, 1:400, 1:800, 1:400, 1:400 и 1:800.
Пример 6
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор
биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:23.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:400, 1:400, 1:800, 1:800, 1:400 и 1:400.
Пример 7
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 6:3:41.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:400, 1:400, 1:400, 1:800, 1:400 и 1:400.
Пример 8
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кролика, фактор
биосинтеза и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 6:3:41.
Титр антител в сыворотке крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona,
Tarassovi, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola и Sejroe составил соответственно
1:400, 1:400, 1:800, 1:400, 1:400 и 1:400.
Из представленных данных видно, что лептоспиры всех серогрупп при выращивании
на питательной среде, приготовленной путем смешивания сыворотки крови овец и кроликов, фактора биосинтеза и фосфатно-буферного раствора в соотношении 1:1:18 и 2:1:17 не
утрачивали антигенной активности (титр 1:800 и выше).
Смешивание компонентов среды при других соотношениях напротив способствует
снижению антигенной активности выращенных лептоспир (титр 1:400).
Источники информации:
1. BY 7321 С1, 2005.
2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и
применения вакцин: Дисс. д-ра вет. наук. - М., 1997. - С. 29.
3. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др.Справочник ветеринарного лаборанта /
Под ред. В.Я. Антонова. - М.: Колос, 1981. - С. 37.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
82 Кб
Теги
by13453, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа