close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13476

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.08.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
BY 13476 C1 2010.08.30
(54)
BY (11) 13476
(13) C1
(19)
G 01N 33/48
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
(21) Номер заявки: a 20061306
(22) 2006.12.20
(43) 2008.08.30
(71) Заявители: Государственное научное
учреждение "Институт биофизики и
клеточной инженерии Национальной
академии наук Беларуси"; Государственное
учреждение
"Научноисследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии" Министерства
здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(72) Авторы: Лобанок Елена Станиславовна; Ратникова Татьяна Александровна;
Василевич Ирина Борисовна; Гуревич
Геннадий Львович; Скрягина Елена
Михайловна; Егорова Наталья Викторовна (BY)
(73) Патентообладатели: Государственное
научное учреждение "Институт биофизики и клеточной инженерии Национальной академии наук Беларуси";
Государственное учреждение "Научноисследовательский институт пульмонологии и фтизиатрии" Министерства
здравоохранения Республики Беларусь (BY)
(56) RU 2004130304 A, 2005.
СКРЯГИНА Е.М. и др. // Проблемы
туберкулеза. - 1998. - №4. - С.51-53.
БЕЛОВА И.Б. и др. // Медицинская
визуализация. - 1999. - октябрь-декабрь. C. 7-13.
СМУРОВА Т.Ф. // Медицинская помощь. - 2001. - №3. - С.5-9.
СОКОЛОВ В.А. // Проблемы туберкулеза. - 2001. - №3. - С. 10-14.
Лабораторная диагностика туберкулеза. - Москва, 2001. - С. 14-19, 66-77,
125-131, 144-147, 159-161.
ШЕМЯКИН В.Л. Клинико-лучевая диагностика туберкулеза органов дыхания:
Автореферат диссертации. - Москва,
1997. - С. 7-9, 18.
ЖИВОТОВСКИЙ Б.Г. Дифференциальная диагностика туберкулеза легких. Астрахань, 2000. - С. 6-17.
BY 2783 C1, 1999.
SU 1411618 A1, 1988.
SU 1163263 A, 1985.
RU 2077719 C1, 1997.
UA 56593 A, 2003.
(57)
Способ диагностики туберкулеза легких, отличающийся тем, что получают из стабилизированной антикоагулянтом венозной крови суспензию лимфоцитов (2-4)·106 кл/мл,
добавляют к ней аминолевулиновую кислоту до концентрации 0,8 мМ, инкубируют при
37 °С в течение 1-2 часов, после чего измеряют интенсивность флуоресценции суспензии
лимфоцитов при возбуждении флуоресценции светом в области 390-420 нм и, если получают значение отношения максимума флуоресценции при 636 нм к максимуму флуоресценции в области 680-720 нм меньше, чем 2,8±0,4, диагностируют туберкулез легких.
Изобретение относится к клинической медицине, а именно фтизиатрии, и может быть
использовано для диагностики туберкулеза легких.
Известен способ прижизненной диагностики туберкулеза, включающий выделение
полиморфноядерных лейкоцитов, сохранение их в стабилизирующем растворе, сравни-
BY 13476 C1 2010.08.30
тельную оценку спонтанной и индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции,
в качестве индуктора "дыхательного взрыва" используют опсонизированный зимозан, а в
качестве дополнительного индуктора хемилюминесценции используют специфический
туберкулезный антиген, дезинтеграцию микобактерий проводят ультразвуком низкой частоты и высокой интенсивности [1].
Недостатками известного способа является использование специфического туберкулезного антигена, что не безопасно для медицинского персонала, использование дорогих
реактивов (зимозан) и нескольких приборов (хемилюминометр и ультразвуковой дезинтегратор).
Известен диагностический способ спектроскопической диагностики туберкулеза [2].
Недостатками известного способа является то, что обследуемые пациенты подвергаются болезненной и травмирующей процедуре для получения исследуемого субстрата
(плевральный выпот), необходимость проведения спектрального анализа проб в широком
диапазоне спектра от 230 до 800 нм, требующего использования только кварцевой кюветы
и специальных спектроскопически чистых растворителей (95 % этанол, диоксан, тетрагидрофурана), использование стабилизаторов и дорогостоящего кельвинатора для замораживания исследуемых образцов.
Задачей изобретения является создание безопасного, высокочувствительного, простого, экспрессного способа диагностики туберкулеза легких.
Поставленная задача достигается тем, что в способе диагностики туберкулеза легких,
согласно изобретению, из стабилизированной антикоагулянтом венозной крови получают
суспензию лимфоцитов (2-4)⋅106 кл/мл, добавляют к ней аминолевулиновую кислоту до
концентрации 0,8 мМ и проводят инкубацию при 37 °С в течение 1-2 часов. После этого
измеряют интенсивность флуоресценции суспензии лимфоцитов при возбуждении флуоресценции светом в области 390-420 нм. Если получают значение отношения максимума
флуоресценции при 636 нм к максимуму флуоресценции в области 680-720 нм меньше,
чем 2,8±0,4, диагностируют туберкулез легких.
Аминолевулиновая кислота (АЛК) - ранний предшественник гема, промежуточным
продуктом синтеза которого являются порфириновые пигменты, флуоресцирующие в
красной области спектра (3). Кроме того, известно, что возможно увеличение содержания
эндогенных порфиринов в животных клетках и тканях при добавлении к ним экзогенной
АЛК. Ткани различного гистологического типа существенно различаются по способности
осуществлять АЛК - индуцируемое накопление порфиринов. АЛК - индуцируемое накопление порфириновых пигментов особо выражено при активации клеток, увеличении их
пролиферативной активности и злокачественной трансформации. Образование порфиринов в лимфоидных клетках начинается сразу. Спектр флуоресценции порфириновых пигментов в норме в суспензии лимфоцитов периферической крови (ЛПК) имеет два
выраженных максимума в области 620-645 нм и 690-720 нм. У больных туберкулезом
спектр суспензии ЛПК характеризуется смещением в коротковолновую область спектра и
увеличением интенсивности флуоресценции второго пика в области 680-720 нм, интенсивность которого в ЛПК здоровых людей намного меньше. Причина увеличения второго
порфиринового пика, вероятно, связана с процессами модификации (окисления) порфириновых пигментов и образования окисленных продуктов со спектральным максимумом в
области 680-720 нм в ЛПК больных туберкулезом людей. Подобных спектральных изменений АЛК-индуцируемых порфиринов в ЛПК больных туберкулезом ни при одной из
патологий легких ранее не было выявлено.
На фигуре изображены типичные спектры флуоресценции, проинкубированных с
аминолевулиновой кислотой в течение 1 ч, суспензии лимфоцитов периферической крови
больных (1) и не больных (2) туберкулезом легких людей. Флуоресценцию возбуждали в
области 390-420 нм.
2
BY 13476 C1 2010.08.30
Экспресс-способ осуществляют следующим образом: у обследуемого проводят из вены забор крови в пробирку с антикоагулянтом (например, с гепарином), стандартным методом получают лимфоциты в количестве 2-4⋅106 кл/мл, добавляют к ним АЛК (0,8 мМ),
инкубируют в течение 1-2 часов при 37 °С и проводят спектроскопический анализ полученных проб в диапазоне от 560 до 720 нм. Затем определяют отношение максимума флуоресценции при 636 нм к максимуму флуоресценции в области 680-720 нм.
Статистический анализ, проведенный в группах здоровых и не больных туберкулезом
легких людей, показал, что рассчитанный параметр равен 2,8±0,4.
Способ иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1
Здоровый донор К., 40 лет. Кровь получили в ГУ "Республиканский научнопрактический центр гематологии и трансфузиологии" МЗ РБ г. Минска. Проведен спектроскопический анализ лимфоцитов периферической крови. Затем определяют отношение
интенсивности флуоресценции при 636 нм к интенсивности флуоресценции в области
680-720 нм. Полученное значение оказалось равным 2,75, что находится в интервале значений параметра, характерного для практически здоровых людей (2,8±0,4). Таким образом, обследованный человек не болен туберкулезом легких.
Пример 2
Больной М., 77 лет. С 1996 года неоднократно лечился в ГУ "НИИ пульмонологии и
фтизиатрии" МЗ РБ, г.Минска по поводу бронхиальной астмы. Последнее стационарное
лечение проходил в 2005 году. Ухудшение состояния отмечено с октября 2006 года. Рентгенологически у больного выявлена избыточность деформации легочного рисунка в обоих
легких и сгущение его в нижних отделах легких. Поставлен диагноз: Бронхиальная астма,
смешанная форма, тяжелое течение, фаза обострения заболевания. При спектроскопическом анализе лимфоцитов периферической крови и расчете показателя по предлагаемому
способу было установлено, что он равен 2,5. Таким образом, у данного больного не выявлено туберкулеза легких.
Пример 3
Больной Д., 68 лет, обратился к врачу с жалобами на слабость, кашель с небольшим
количеством слизистой мокроты, потливость, повышенную утомляемость, отдышку при
физической нагрузке и повышение температуры тела до 38 °С. Больной получил противовоспалительное лечение. При рентгенологическом обследовании выявлены инфильтративные
фокусы в язычковых сегментах левого легкого на фоне избыточного деформирующего по
ячеистому типу легочного рисунка, которые частично рассосались. Инфильтративные фокусы выявлялись в верхней доле правого легкого (в проекции 3-го межреберья). Затемнен
левый синус. Установлен диагноз: полисегментарная двусторонняя пневмония в фазе рассасывания. Воспалительные изменения в легких расцениваются как левосторонняя
плевропневмония. Рассчитанный по предлагаемому способу показатель оказался равным
2,5, что свидетельствует об отсутствии туберкулеза легких у данного больного.
Пример 4
Больной В., 50 лет, инвалид 2-й группы. В марте 2006 года установлен диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого. М. tuberculosis (+).
Установлена множественная лекарственная устойчивость М. tuberculosis к противотуберкулезным препаратам (изониазид, рифампицин, стрептомицин, этамбутол, микобутин,
ПАСК). Однако с октября 2006 г. наблюдается положительная динамика: несмотря на сохранение изменений в верхней доле правого легкого, инфильтративный фокус в прикорневой зоне слева рассосался. Сопутствующие заболевания: ревматоидный артрит,
язвенная болезнь желудка. Проведен спектроскопический анализ лимфоцитов периферической крови. Установлено, что величина параметра в 1,7 раз ниже контроля, что свидетельствует о наличии туберкулеза легких у данного больного.
3
BY 13476 C1 2010.08.30
Пример 5
Больной М., 51 год. Впервые туберкулез легких выявлен в 2005 году. С 29.03.2005 г.
по 23.12.2005 г. проходил лечение в ГУ "НИИ пульмонологии и фтизиатрии" МЗ РБ
г.Минска. В июле 2006 года установлено прогрессирование туберкулезного процесса.
Рентгенологичеки определяется интенсивное затемнение с четкими контурами по ходу
междолевой щели правого легкого (осумкование жидкости). В проекции нижней доли
легкого справа - увеличение интенсивности затемнения за счет инфильтративных и плевритических наслоений (возможно жидкость). Правый купол диафрагмы четко не дифференцируется. Процесс расценен как фиброзно-кавернозный туберкулез правого легкого.
М. tuberculosis ( + ). Множественная лекарственная устойчивость М. tuberculosis к противотуберкулезным препаратам (изониазид, рифампицин, стрептомицин, этамбутол, этионамид,
каномицин, микобутин, амикоцин, ломефлоксацин). Больной обследован при поступлении
в стационар, исследованы лимфоциты периферической крови. Спектроскопический анализ клеточной суспензии показал, что параметр равен 0,95 и это в 3 раза ниже значения
контроля (здоровые доноры). Таким образом, мы могли диагностировать туберкулез легких у данного больного.
Использование предлагаемого способа диагностики туберкулеза легких в клинической
практике позволит быстро, информативно и достоверно диагностировать заболевание туберкулезом легких. Предлагаемый способ безопасен для обслуживающего персонала.
Источники информации:
1. Заявка на изобретение РФ 2004124989/15 от 16.08.2004, МПК G01 N 33/569, публ.
2006.
2. Заявка на изобретение РФ 2004130304 от 11.03.2003, МПК G 01 N 33/48, публ. 2005.
3. Лобанок Е.С. Эндогенные порфирины в животных клетках: механизмы образования
и фотодинамическая активность // Биофизика живых систем: от молекулы к организму /
Под. ред. Волотовского И.Д., 2002. - С. 161-173.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
112 Кб
Теги
by13476, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа