close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13667

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.10.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/18
C 12Q 1/02
СПОСОБ ОЦЕНКИ МОДУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ОБРАЗЦА
ПОВЕРХНОСТНЫХ, ПОДЗЕМНЫХ ИЛИ СТОЧНЫХ ВОД НА РОСТ
ПОПУЛЯЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА PSEUDOMONAS
(21) Номер заявки: a 20090367
(22) 2009.03.13
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Дудчик Наталья Владимировна; Трешкова Татьяна Сергеевна; Филонов Валерий Петрович;
Застенская Ирина Алексеевна; Ильюкова Ирина Ивановна; Дроздова
Елена Валентиновна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение "Республиканский
научно-практический центр гигиены" (BY)
BY 13667 C1 2010.10.30
BY (11) 13667
(13) C1
(19)
(56) ФОМИН Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной
безопасности по международным стандартам. - М., 2000. - С. 595-596.
BY a 20070865, 2009.
Методика экспрессного определения
токсичности воды с помощью люминесцентного бактериального теста. М., 2000,
[http://www.biotox.ru/met_water].
BY 11481 C1, 2008.
RU 2175352 C1, 2001.
SU 1165989 A, 1985.
RU 2258676 C2, 2005.
SU 1474545 A1, 1989.
(57)
Способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или
сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas, заключающийся в том, что
готовят питательную среду с pH 6,7-6,9, содержащую 3,0 г глюкозы, 1,0 г хлористого аммония, 3,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного двухводного, 2,7 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 1,0 г пептона ферментативного, 1,0 г кислотного гидролизата
казеина и 1000 мл воды дистиллированной, в которую вносят тест-культуру бактерий рода
Pseudomonas, в питательные среды с тест-культурой параллельно вносят исследуемый образец и равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют
культивирование тест-культуры с рабочей концентрацией 104-106 КОЕ/мл в термостате
при температуре 30-37 °С, периодически с интервалом 1 час измеряют оптическую плотность суспензий бактерий при длине волны λ = 540 нм, по максимальному значению оптической плотности определяют наступление стационарной фазы роста тест-культуры,
после чего рассчитывают показатель модулирующего действия образца M по формуле:
T
M= 2,
T1
где T1 - время наступления стационарной фазы роста в контрольном опыте, час,
T2 - время наступления стационарной фазы роста в опыте с исследуемым образцом, час,
и при значении M > 1 действие образца на тест-культуру оценивают как стимулирующее,
при значении M < 1 действие образца на тест-культуру оценивают как ингибирующее, а
при значении M = 1 образец не обладает стимулирующим или ингибирующим действием
на тест-культуру.
BY 13667 C1 2010.10.30
Изобретение относится к разделу гигиены окружающей среды, экотоксикологии и санитарной микробиологии.
Известен способ оценки качества поверхностных, подземных или сточных вод, заключающийся в определении скорости роста бактерий штамм Pseudomonas putida штамм
Migula, Berlin 33/2 или штамм NCIB 9434, при воздействии различных разбавлений пробы
воды по сравнению со скоростью роста бактерий в аналогичных условиях, но без испытуемой пробы, для чего измеряют оптическую плотность клеточной суспензии тест-штамма
микроорганизма через 16 ± 1 час культивирования, рассчитывают процент замедления роста для каждого разбавления и определяют EC10 и EC50 [1].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Однако прототип обладает низкой чувствительностью, что приводит к необходимости длительного, до
16 часов, времени проведения испытаний. Кроме того, прототип не дает возможность
оценить стимулирующее воздействие пробы поверхностных, подземных или сточных вод
на микроорганизмы.
Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является то, что осуществляют параллельное внесение образцов в питательную среду, содержащую ранее определенную концентрацию тест-культуры, и проводят их совместное культивирование с
последующей обработкой полученных данных.
Задачей заявленного изобретения является разработка качественного способа оценки
модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост
популяции бактерий рода Pseudomonas.
Поставленная задача достигается следующим образом:
Предложен способ оценки модулирующего действия образца поверхностных, подземных или сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas путем подготовки
питательной среды с pH 6,7-6,9, содержащей 3,0 г глюкозы, 1,0 г хлористого аммония,
3,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного двухводного, 2,7 г калия фосфорнокислого
двузамещенного, 1,0 г пептона ферментативного, 1,0 г кислотного гидролизата казеина и
1000 мл воды дистиллированной, в которую вносят тест-культуру бактерий рода Pseudomonas, в питательные среды с тест-культурой параллельно вносят исследуемый образец и
равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют культивирование тест-культуры с рабочей концентрацией 104-106 КОЕ/мл в термостате при температуре 30-37 °С, периодически с интервалом 1 час измеряют оптическую плотность
суспензий бактерий при длине волны λ = 540 нм, по максимальному значению оптической
плотности определяют наступление стационарной фазы роста тест-культуры, после чего
рассчитывают показатель модулирующего действия образца M по формуле:
T
M= 2,
T1
где Т1 - время наступления стационарной фазы роста в контрольном опыте, час,
Т2 - время наступления стационарной фазы роста в опыте с исследуемым образцом, час,
и при значении M > 1 действие образца на тест-культуру оценивают как стимулирующее,
при М < 1 действие образца на тест-культуру оценивают как ингибирующее, а при значении М = 1 образец не обладает стимулирующим или ингибирующим действием на тесткультуру.
Из раздела микробиологии, посвященной кинетике микроорганизмов, известно, что
рост микроорганизмов в периодической системе имеет, как правило, несколько фаз: лагфазу, выраженную фазу быстрого роста культуры (логарифмическую фазу), стационарную фазу и фазу отмирания или фазу автолиза [2]. Критерием оценки модулирующего
действия образцов целесообразно выбрать время наступления стационарной фазы роста
популяции микроорганизмов, для чего необходимо проводить измерение оптической
плотности суспензии тест-штамма в жидкой питательной среде каждые 1-2 часа, отображая зависимость оптической плотности суспензии от времени роста культуры в виде гра2
BY 13667 C1 2010.10.30
фика. Критическим моментом для проведения оптической детекции роста биомассы культуры является состав среды культивирования. Он должен обеспечить нормальное развитие тест-микроорганизма и быстрое наступление стационарной фазы роста, но при этом не
маскировать как ингибирующее, так и стимулирующее действие образца. Кроме того,
среда должна быть прозрачна, бесцветна (или слегка окрашена). Согласно нашим исследованиям, таким требованиям соответствуют синтетические или полусинтетические питательные среды.
Такой прием позволяет повысить точность и воспроизводимость способа, а также сократить время выполнения исследования за счет того, что критерием для оценки модулирующего действия образца предложено считать время наступления стационарной фазы
развития популяции бактерий рода Pseudomonas, для чего осуществляют регистрацию оптической плотности суспензии микроорганизмов в питательной среде предложенного состава.
Пример выполнения
Требуется определить модулирующее действие трех водных образцов на рост тесткультуры бактерий рода Pseudomonas, для чего необходимо рассчитать показатель M образцов:
1 - образец поверхностных вод,
2 - образец подземных вод;
3 - образец сточных вод.
В качестве питательной среды при проведении исследования используют среду следующего состава: г/л, глюкоза - 3,0, хлористый аммоний - 1,0, натрий фосфорнокислый
двузамещенный двухводый - 3,5, калий фосфорнокислый двузамещенный - 2,7, пептон
ферментативный - 1,0, кислотный гидролизат казеина - 1,0, вода дистиллированная - 1000 мл,
pH среды 6,7-6,9.
Стерилизация 121 °С в течение 15 мин.
В качестве тест-штамма используют штамм Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 из
Американской коллекции типовых культур.
Для приготовления рабочей культуры тест-штамм Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
отсеивают на мясопептонный бульон и инкубируют в термостате при 30-37 °С в течение
10 часов. Содержание клеток тест-штамма доводят до 107 КОЕ/мл, что является оптимальным для данного исследования. Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на питательные агаризованные среды.
В конические колбы объемом 50 см3 с 10 см3 среды культивирования указанного состава вносят рабочую культуру. Для оценки действия образцов в колбы с питательной
средой добавляют по 3 мл анализируемых образцов. Контролем служит питательная среда
с внесенной суспензией микроорганизмов с равным объемом дистиллированной воды
вместо образца. Культивируют колбы при температуре 30 °С до достижения стационарной
фазы роста, для чего проводят измерения оптической плотности культуры. Пробы отбирают в количестве 2 см3 в начале опыта и через каждый час, соблюдая правила асептики.
Измерения проводят не менее чем в двух повторностях для каждого образца на спектрофотометре при длине волны λ = 540 нм, длина оптического пути составляет 1 см. Находят
зависимость оптической плотности суспензии от времени роста культуры в виде графика,
пользуясь программой Exel (фигура 1, где по оси абсцисс отмечен показатель T в часах, а
по оси ординат - концентрация образца в процентах).
Получены следующие результаты (таблица).
3
BY 13667 C1 2010.10.30
Результаты оценки модулирующего действия образцов на тест-штамм
Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442
Действие
Образец 1
Ингибирующее
Не обладает ингибирующим или
Образец 2
4,25
4,25
1,0
стимулирующим действием
Образец 3
4,25
3,21
1,32
Стимулирующее
*T1 - время достижения стационарной фазы в контроле.
**T2(i) - время достижения стационарной фазы в опыте 1-3.
T1*
4,25
T2i**
5,13
M
0,83
Таким образом, достигаемый технический результат заявленного способа заключается
в качественной оценке модулирующего действия образца поверхностных, подземных или
сточных вод на рост популяции бактерий рода Pseudomonas, а также в расширении арсенала чувствительных тест-объектов для проведения испытания.
Источники информации:
1. Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам: Энциклопедический справочник. 3-е издание, переработанное и дополненное. - Москва, 2000. - С. 595-596 (прототип).
2. Методы общей бактериологии / Под. ред. Ф. Герхарда и др. Т. 1. - С. 376-377.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
145 Кб
Теги
by13667, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа