close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13762

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.10.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 1/20
СРЕДА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
ЛЕПТОСПИРОЗНЫХ БАКТЕРИЙ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ
(21) Номер заявки: a 20081175
(22) 2008.09.15
(43) 2009.04.30
(71) Заявители: Зайцев Владимир Владимирович; Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
(72) Авторы: Зайцев Владимир Владимирович; Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
BY 13762 C1 2010.10.30
BY (11) 13762
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатели: Зайцев Владимир
Владимирович; Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович (BY)
(56) Справочник ветеринарного лаборанта.М.: Колос, 1981. - C. 37.
RU 2096042 C1, 1997.
BY 7321 C1, 2005.
ВОЛИНА Е.Г. и др. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2001. - № 1. - C. 3-5.
ЗАЙЦЕВ В.В. Ветеринарная медицина
Беларуси. - 2005. - № 1. - C. 14-15.
UA 26116 U, 2007.
RU 2088258 C1, 1997.
RU 2202608 C2, 2003.
US 4133717, 1979.
SU 1081207 A, 1984.
RU 2192472 C2, 2002.
(57)
1. Среда для производственного культивирования лептоспирозных бактерий, содержащая сыворотку крови овец или кроликов, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фактор роста и фосфатно-буферный раствор с pH 7,0-7,4 при следующем
соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5-10
фактор роста
5-10
фосфатно-буферный раствор с pH 7,0-7,4 остальное,
при этом массовое соотношение компонентов составляет 1:1:8 или 1:1:18 соответственно,
а фактор роста имеет следующий состав, мас. %:
глицерин
0,2
трилон Б
0,01
витамин B1
0,03
витамин B12
0,00036
0,5 %-ный раствор биологически активных
компонентов торфа
остальное.
2. Способ получения среды по п. 1, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор роста путем суспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов B1 и
B12 в 0,5 %-ном растворе биологически активных компонентов торфа и фильтрации через
мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм, затем смешивают сыворотку крови овец
BY 13762 C1 2010.10.30
или кроликов, полученный фактор роста и фосфатно-буферный раствор с pH 7,0-7,4 в
массовом соотношении 1:1:18 или 1:1:8 соответственно.
Изобретение относится к бактериологии, в частности к производственному культивированию лептоспирозных бактерий, используемых для изготовления диагностических и
профилактических препаратов.
Для культивирования лептоспирозных бактерий используют следующие питательные
среды: водно-сывороточная среда Ферваорт-Вольфа (1928), Кортгофа (1972), Тарасова
(1937), синтетические безбелковые среды: Шенберга (1967) и Торнея (1974), Элленгаузена
(1967), Элленгаузена для ветеринарных целей (1976), Рассела (1986), твин-альбуминсывороточная среда Эллиса, альбуминовая среда ГНКИ (М.А.Бабич, Ю.М.Дигальцев,
1965) и др. [1, 2, 3, 5, 6, 7].
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
среда Любашенко [4].
Среду Любашенко готовят путем фильтрации через бумагу и стерилизации при 1 атм
в течение 30 минут нехлорированной водопроводной, колодезной или речной воды. После
охлаждения pH воды устанавливают 7,3-7,4 и добавляют 5 % сыворотки крови кролика
или барана, прогретой при 56 °С в течение 1 часа. Среду фильтруют через пластинки
"СФ" в приборе Зейтца при небольшом вакууме (660 мм ртутного столба) и асептически
разливают в пробирки. Для проверки на стерильность пробирки выдерживают при 37 °С
48 часов.
При соблюдении всех необходимых условий производственные штаммы лептоспирозных бактерий вырастают в этой среде через 5-7 суток, накопление их не превышает 8100 млн./см3 микробных клеток.
Задача изобретения - повышение выхода биомассы лептоспирозных бактерий.
Поставленная цель достигается тем, что к смеси белковой основы и буферного раствора добавляют фактор роста. В качестве фактора роста лептоспирозных бактерий используют 0,5 %-ный раствор биологически активных компонентов торфа, содержащий трилон
Б, глицерин и витамины B1 и B12.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что среда для производственного культивирования лептоспирозных бактерий содержит сыворотку крови овец
или кроликов и дополнительно фактор роста и фосфатно-буферный раствор с pH 7,0-7,4
при следующем соотношении компонентов, мас. %:
сыворотка крови овец или кроликов
5-10
фактор роста
5-10
фосфатно-буферный раствор, pH 7,0-7,4
остальное,
при этом массовое соотношение компонентов составляет 1:1:8 или 1:1:18 соответственно,
а фактор роста имеет следующий состав, мас. %:
глицерин
0,2
трилон Б
0,01
витамин B1
0,03
витамин B12
0,00036
0,5 %-ный раствор биологически активных компонентов
торфа
остальное.
Способ получения среды для производственного культивирования лептоспирозных
бактерий, заключающийся в том, что предварительно готовят фактор роста путем суспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов В1 и B12 в 0,5 %-ном растворе биологически активных компонентов торфа и фильтрации через мембранный фильтр с
размером пор 0,22 мкм, затем смешивают сыворотку крови овец или кроликов, получен2
BY 13762 C1 2010.10.30
ный фактор роста и фосфатно-буферный раствор с pH 7,0-7,4 в массовом соотношении
1:1:18 или 1:1:8 соответственно.
Пример 1.
Кровь овец дефибринировали, отделяли сыворотку и прогревали при температуре 5658 °С в течение 30-60 минут. Инактивированную сыворотку фильтровали через фильтр с
величиной пор 0,22 мкм.
Фактор роста готовили путем ресуспендирования навесок глицерина, трилона Б, витаминов B1 и В12 в 0,5 %-ном растворе биологически активных компонентов торфа при следующем соотношении компонентов, мас. %:
глицерин
0,2
трилон Б
0,01
витамин B1
0,03
витамин В12
0,00036
0,5 %-ный раствор биологически активных компонентов из
торфа
остальное.
Среду готовили путем смешивания сыворотки крови овец, фактора роста и фосфатнобуферного раствора в соотношении 1:1:18.
Среда обеспечивала накопление лептоспирозных бактерий 624±32 млн./см3 микробных клеток.
Для оценки антигенной активности лептоспиры каждой серогруппы вводили внутривенно кроликам по 15 млн. микробных клеток.
Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippothyphosa, Sejroe, Conicola и Icteroharmorrhagiae составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:800.
Пример 2.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но для приготовления среды сыворотку
крови кроликов, фактор роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении
1:1:18.
Среда обеспечивала накопление 715±35 млн./см3 микробных клеток лептоспир разных
серогрупп.
Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippothyphosa, Sejroe, Conicola и Icteroharmorrhagiae составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:800.
Пример 3.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста
и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:8.
Среда обеспечивала накопление 685±40 млн./см3 микробных клеток лептоспир разных
серогрупп.
Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippothyphosa, Sejroe, Conicola и Icteroharmorrhagiae составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:800.
Пример 4.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови кроликов, фактор
роста и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:8.
Среда обеспечивала накопление 738±45 млн./см3 микробных клеток лептоспир разных
серогрупп.
Титр антител в сыворотках крови кроликов к лептоспирам серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippothyphosa, Sejroe, Conicola и Icteroharmorrhagiae составил соответственно
1:1600, 1:800, 1:3200, 1:1600, 1:800 и 1:800.
3
BY 13762 C1 2010.10.30
Пример 5.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста
и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 12:12:76.
Среда обеспечивала накопление 296±36 млн./см3 микробных клеток лептоспир разных
серогрупп.
Пример 6.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сыворотку крови овец, фактор роста
и фосфатно-буферный раствор смешивали в соотношении 1:1:23.
Среда обеспечивала накопление 328±24 млн./см3 микробных клеток лептоспир разных
серогрупп.
В ходе экспериментальной работы нами установлено, что при содержании сыворотки
животных и фактора роста менее 4 % и более 10 % существенно снижается интенсивность
роста и деления лептоспирозных бактерий.
Из представленных экспериментальных данных видно, что для производственного
культивирования лептоспирозных бактерий разных серогрупп, используемых для изготовления биопрепаратов против лептоспироза, целесообразно применять питательную
среду, содержащую 5-10 % сыворотки крови овец или кроликов, 5-10 % фактора роста и
80-90 % фосфатно-буферного раствора.
Питательная среда вышеуказанного состава обеспечивает накопление лептоспир разных серогрупп 592-783 млн./см3 микробных клеток.
Источники информации:
1. Волина Е.Г. и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. - № 1. - С. 3-5.
2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и
применение вакцин: Дисс. … д-ра вет. наук. - М., 1997. - С. 58.
3. Зайцев В.В. Ветеринарная медицина Беларуси.- 2005. - № 1. - С. 14-15.
4. Андросов Ф.З., Беляев И.Я., Клочко Р.Т. и др. Справочник ветеринарного
лаборанта / Под ред. В.Я. Антонова.- М.: Колос, 1981. - С. 37.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
1
Размер файла
80 Кб
Теги
by13762, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа