close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY13850

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.12.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/53
СПОСОБ ИММУНОХИМИЧЕСКОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИРОГОРМОНА, ВЫБРАННОГО
ИЗ СВОБОДНОГО Т3 И СВОБОДНОГО Т4
(21) Номер заявки: a 20081415
(22) 2008.11.11
(43) 2010.06.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Новаковский Максим Евгеньевич; Вашкевич Ирина Игнатьевна; Свиридов Олег Васильевич;
Жоров Олег Васильевич; Кузуб
Наталья Владимировна (BY)
BY 13850 C1 2010.12.30
BY (11) 13850
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт биоорганической химии Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(56) WO 93/22675 А1.
US 4046870, 1977.
US 4410633, 1983.
EP 246152 A1, 1987.
Теория и практика иммуноферментного анализа. - Москва: Высшая школа,
1991. - С. 105-107, 191-192.
(57)
Способ иммунохимического количественного определения тирогормона, выбранного
из свободного T3 и свободного T4, заключающийся в том, что смешивают биотинсвязывающий белок, иммобилизованный на твердом носителе, с пробой анализируемого образца, а
также с калибровочными пробами, содержащими различные концентрации тирогормона,
во все пробы вносят меченые антитела к тирогормону, инкубируют в течение 30-60 минут,
вносят конъюгат соответствующего тирогормона с биотином, инкубируют в течение
10-15 минут, проводят разделение свободной и иммобилизованной форм меченых антител
к тирогормону, измеряют интенсивность сигнала иммобилизованной формы меченых антител и по графику зависимости интенсивности сигнала от концентрации тирогормона,
построенному с использованием калибровочных проб, определяют количество тирогормона в анализируемом образце.
Изобретение относится к областям медицины, биохимии и фармацевтической химии, а
именно к иммунохимическому анализу свободных гормонов щитовидной железы (тирогормонов) - 3,3',5-трийод-L-тиронина (трийодтиронин, T3) и 3,3',5,5'-тетрайод-L-тиронина
(тироксин, T4) в сыворотке крови человека, фармацевтических субстанциях и готовых лекарственных препаратах.
Известны различные способы иммунохимического анализа содержания тирогормонов
в сыворотке крови и других физиологических жидкостях, биологических и фармацевтических образцах с использованием изотопных, ферментных или люминесцентных меток.
Однако они не отличаются разнообразием. Как правило, используются твердая фаза (пробирки, планшеты, шарики и т.п.), покрытая специфичными антителами к T3 (анти-T3) или
специфичными антителами к T4 (анти-T4), и модифицированный радиоактивной или не-
BY 13850 C1 2010.12.30
изотопной меткой тирогормон или его аналог, который конкурирует с определяемым T3
или T4 в составе анализируемого образца за связывание с антителами, иммобилизованными
на твердой фазе [1-5]. Недостатки таких тест-систем: повышенный расход дорогостоящих
подобранных антител для покрытия твердого носителя; вероятность систематической
ошибки при использовании для иммуноанализа свободных тирогормонов в сыворотке
крови человека [6].
Известен другой распространенный способ определения тирогормонов. Твердая фаза
покрыта высокомолекулярным производным T3 или T4 (например, конъюгат тирогормона
с инертным белком), которое конкурирует с T3 или T4 анализируемого образца за связывание
с анти-T3 или анти-T4, модифицированными радиоактивной или неизотопной меткой
[7, 8]. Недостаток: требуется получение высокомолекулярных конъюгатов тирогормонов,
которые, как правило, отличаются сильной вариацией свойств, нестабильностью и сложностью в применении.
Запатентованы другие способы определения содержания тирогормонов в биологических образцах [9-11]. Среди них наиболее близким к заявляемому является способ определения количества тирогормонов, в том числе свободных T3 и T4, в присутствии
тирогормон-связывающих белков, в котором используются твердая фаза, покрытая антителами против иммуноглобулинов класса G (IgG) (компонент 1), конъюгат тирогормона с
IgG (компонент 2), обладающий сродством к антителам на твердой фазе посредством своей белковой части, и меченые флуоресцентным соединением или радиоактивным изотопом антитела против тирогормона, не имеющие сродства к иммобилизованным антителам
(компонент 3) [10] (прототип). На первой стадии компонент 2, компонент 3 и анализируемый образец сыворотки крови, содержащий свободный тирогормон, одновременно вносят
в формованное изделие (пробирка, микропланшет), внутренняя поверхность которого покрыта компонентом 1. В процессе инкубации происходит конкурентное связывание компонента 3 с компонентом 2 и свободным тирогормоном, а также специфическая
иммобилизация компонента 2 или комплекса, образованного компонентом 2 и компонентом 3. На второй стадии происходят отмывка компонентов, не связавшихся с твердой фазой,
и детектирование специфического сигнала, значение которого обратно пропорционально
содержанию несвязанной фракции определяемого тирогормона в исследованном образце.
Недостаток: такой способ отличается громоздкостью, требует получения высокомолекулярных конъюгатов тирогормонов с IgG, подготовки иммуноспецифического сорбента, а
также эмпирического подбора четверки антител для твердой фазы, для конъюгата, меченых антител и иммуноглобулинов сыворотки крови, поскольку высока вероятность перекрестной реакции между ними, а также матрикс-эффекта, т.е. "помех", привносимых в
анализ различными компонентами биологического материала, присутствующими в анализируемых образцах [12].
Задача настоящего изобретения - способ иммунохимического количественного определения тирогормона, выбранного из свободного T3 и свободного T4, в сыворотке крови
человека, фармацевтических субстанциях и готовых лекарственных препаратах. Заявляемый способ не требует применения конъюгатов тирогормонов с высокомолекулярными
белками, подготовки иммуноспецифичной твердой фазы и длительного эмпирического
подбора высокомолекулярных компонентов.
Поставленная задача решается заявляемым способом, включающим в себя одновременное смешивание твердой фазы, покрытой биотинсвязывающим белком (компонент 4),
с анализируемым образцом или калибровочной пробой, содержащими свободные тирогормоны (компонент 5), и с мечеными антителами, проявляющими высокое избирательное сродство к выявляемому тирогормону (компонент 6), их инкубацию в течение 30-60
мин (инкубация 1); внесение в реакционную смесь низкомолекулярного конъюгата выявляяемого тирогормона с биотином (компонент 7) и инкубацию реакционной смеси в течение
10-15 мин (инкубация 2); разделение свободной и биоспецифически иммобилизованной
2
BY 13850 C1 2010.12.30
форм меченого антитела; измерение интенсивности сигнала связанной формы меченых
антител. Количественное определение содержания свободных T3 или T4 в анализируемых
образцах осуществляется по калибровочному графику, построенному по значениям сигнала в калибровочных пробах с известными концентрациями свободных тирогормонов,
имеющих матричный состав, аналогичный матриксу образца.
В процессе инкубации 1 происходит связывание компонента 6 с компонентом 5. Затем,
после добавления в реакционную смесь компонента 7, в процессе инкубации 2 происходит
его связывание или связывание образующегося комплекса (компонент 7 / компонент 6) с
компонентом 4 на твердой фазе. Активность метки в составе иммобилизованного компонента 6 обратно пропорциональна концентрации определяемого свободного тирогормона
в пробах.
В качестве твердой фазы могут служить коммерчески доступные формованные полимерные изделия (лунки микропланшетов, пробирки) производства Greiner bio-one (Германия),
Nunc (Дания) и др., наноструктурированные или наноразмерные магнитные или центрифугируемые частицы производства Invitrogen (США), Chemicell GmbH (Германия) и др.
В качестве биотинсвязывающего белка (компонент 4) могут быть использованы авидин
(Sigma, кат. № A9275), стрептавидин (Sigma, кат. № S4762), NeutrAvidinTM (Pierce Biotech.,
кат. № 31000), NeutraLite AvidinTM (Southern Biothecnology Associates, Inc., кат. № 7200-01),
ExtrAvidin® (Sigma, кат. № E2511), антитела против биотина и (или) остатка биотина в
составе макромолекул (Sigma, кат. № B7653).
Низкомолекулярные конъюгаты выявляемых тирогормонов с биотином (компонент 7)
представляют собой соединения, содержащие один фрагмент T4 или T3, за который конъюгаты способны связываться с одним паратопом антител против T4 или T3, соответственно, и
один остаток биотина, которым конъюгаты могут взаимодействовать с одним связывающим центром биотинсвязывающих белков. Примерами таких соединений могут служить
N-[2-(2-ацетамидо-3-(4-(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3,5-дийодофенил)пропанамидо)пропил]5-(2-оксо-гексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамид и N-[2-(2-ацетамидо-3-(4(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3-йодофенил)пропанамидо)пропил]-5-(2-оксо-гексагидро-1Hтиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамид. Способы получения приведены в примерах 1 и 2.
В качестве метки для антител, проявляющих высокое избирательное сродство к выявляемым тирогормонам (компонент 6), может служить радиоактивный изотоп (например,
125
I), фермент (например, пероксидаза из корней хрена) или соединение, способное к люминесценции (например, флуоресцеин). Соответствующие меченые антитела могут быть
получены из антител к T3 (Sigma, кат. № T2777) и антител к T4 (Sigma, кат. № T2652) по
типовым методикам с использованием коммерчески доступных наборов IODO-GEN® Iodination Reagent (Peirce Biotech., Inc., США кат. № 28600), FluoroTagTM FITC Conjugation
Kit (Sigma, кат. № FITC1), Peroxidase Maleimide Activated from Horesradish (Sigma, кат.
№ P1709).
Сущность изобретения подтверждается примерами конкретного выполнения.
Пример 1
Получение N-[2-(2-ацетамидо-3-(4-(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3,5-дийодофенил)пропанамидо)пропил]-5-(2-оксо-гексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамида
(конъюгат T4 с биотином)
1 г (1,12 ммоль) пентагидрата натриевой соли L-тироксина растворяют в 300 мл этилового спирта и добавляют 220 мг (1,7 ммоль) ацетоксисукцинимида. Перемешивают 20 ч
при комнатной температуре, рН 8,5. Этанол упаривают в вакууме, остаток растворяют в
этилацетате и промывают 0,1 н. HCl, затем водой, высушивают Na2SO4, упаривают в вакууме. Получают 0,86 г (1,05 ммоль, выход 94 %) N-ацетилтироксина. Разлагается до достижения температуры плавления. Rf 0,28 (EtAc-MeOH, 2:1).
0,165 г (0,2 ммоль) N-ацетилтироксина растворяют в 30 мл абс. диоксана и вносят
0,032 г (0,28 ммоль) N-оксисукцинимида. Раствор охлаждают до 0 °С и по каплям добавляют
3
BY 13850 C1 2010.12.30
0,045 мг (0,22 ммоль) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2 мл диоксана. Перемешивают 1 ч
при 0 °С и 20 ч при комнатной температуре. Выпавший осадок дициклогексилмочевины
отфильтровывают, к фильтрату добавляют 0,29 г (0,24 ммоль) трифторацетата N-(3аминопропил)биотинамида в 2 мл 0,1 M NaHCO3 и перемешивают 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь отфильтровывают, промывают последовательно водой, содой,
водой, 0,1 M HCl, водой и высушивают безводным Na2SO4. Получают 0,15 г (0,13 ммоль,
выход 66 %) N-[2-(2-ацетамидо-3-(4-(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3,5-дийодофенил)пропанамидо)пропил]-5-(2-оксо-гексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамида. Разлагается до достижения температуры плавления. Rf 0,43 (EtAc-MeOH, 2:1). 1H - ЯМР (500 МГц,
d6 - ДМСО), δ, м. д.: 1,30 (м, 4H, -CH2-), 1,48 (м, 6H, -CH2-), 1,79 (с, 3H, -CH3), 2,06 (т, 2H,
J 7,2, -NH-C(O)-CH2-), 2,82 (дд, 1H, J1 5,03, J2 12,46, >CH-CHaHb-S-), 2,91 (дд, 1H, J1 5,01, J2
13,31, >CH-CHaHb-S-), 3,05 (м, 5H, >CH2-CH(CH<)-S- + -NH-CH2-CH2-CH2-), 4,13 (м, 1H, NH-CH(CH<)-CH(S-)-), 4,31 (м, 1H, -NH-CH(CH<)-CH2-S-), 4,42 (м, 1H, -CH2-CH(NH-)C(O)-), 6,39 (с, 1H, -NH-CH(CH<)-CH(S-)-), 6,47 (с, 1H, -NH-CH(CH<)-CH2), 7,05 (с, 2H,
HO-ArI2H2-), 7,77 (уш. т, 1H, J 4,8, >CH-C(O)-NH-CH2-), 7,79 (с, 2H, -ArI2H2-CH2-), 8,06
(уш. т, 1H, J 4,8, -(CH2)3-NH-C(O)-), 8,20 (д, 1H, J 8,39, CH3C(O)-NH-).
Пример 2
Получение N-[2-(2-ацетамидо-3-(4-(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3'-йодофенил)пропанамидо)пропил]-5-(2-оксо-гексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамида
(конъюгат T3 с биотином)
0,75 г (1,12 ммоль) натриевой соли 3,3',5-трийод-L-тиронина растворяют в 300 мл этилового спирта и добавляют 220 мг (1,7 ммоль) ацетоксисукцинимида. Перемешивают 20 ч
при комнатной температуре, pH 8,5. Этанол упаривают в вакууме, остаток растворяют в
этилацетате и промывают 0,1 н. HCl, затем водой, высушивают Na2SO4, упаривают в вакууме. Получают 0,7 г (1,01 ммоль, выход 92 %) N-ацетилтрийодтиронина. Разлагается до
достижения температуры плавления. Rf 0,23 (EtAc-MeOH, 2:1).
0,14 г (0,2 ммоль) N-ацетилтрийодтиронина растворяют в 30 мл абс. диоксана и вносят
0,032 г (0,28 ммоль) N-оксисукцинимида. Раствор охлаждают до 0 °С и по каплям добавляют
0,045 мг (0,22 ммоль) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 2 мл диоксана. Перемешивают 1 ч
при 0 °С и 20 ч при комнатной температуре. Выпавший осадок дициклогексилмочевины
отфильтровывают, к фильтрату добавляют 0,29 г (0,24 ммоль) трифторацетата N-(3аминопропил)биотинамида в 2 мл 0,1 M NaHCO3 и перемешивают 2 ч при комнатной
температуре. Реакционную смесь отфильтровывают, промывают последовательно водой, содой, водой, 0,1 M HCl, водой и высушивают безводным Na2SO4. Получают 0,13
г (0,13 ммоль, выход 65 %) N-[2-(2-ацетамидо-3-(4-(4-окси-3,5-дийодофенокси)-3'-йодофенил)пропанамидо)пропил]-5-(2-оксо-гексагидро-1H-тиено[3,4-d]имидазол-4-ил)пентанамида. Разлагается до достижения температуры плавления. Rf 0,35 (EtAc-MeOH, 2:1).
1
H - ЯМР (500 МГц, d6 - ДМСО), δ, м. д.: 1,30 (м, 4H, -CH2-), 1,48 (м, 6H, -CH2-), 1,79 (с,
3H, -CH3), 2,06 (т, 2H, J 7.2, -NH-C(O)-CH2-), 2,82 (дд, 1H, J1 5,03, J2 12,46, >CH-CHaHb-S-),
2,91 (дд, 1H, J1 5,01, J2 13,31, >CH-CHaHb-S-), 3,05 (м, 5H, >CH2-CH(CH<)-S- + -NH-CH2CH2-CH2-), 4,13 (м, 1H, -NH-CH(CH<)-CH(S-)-), 4,31 (м, 1H, -NH-CH(CH<)-CH2-S-), 4,42 (м, 1H,
-CH2-CH(NH-)-С(О)-), 6,39 (с, 1H, -NH-CH(CH<)-CH(S-)-), 6,47 (с, 1H, -NH-CH(CH<)-CH2),
), 6,74 (d, 1H,
CH
CH
C(OH) CH CH ), 7,06 (с,
C(OH)
6,56 (d, 1H,
), 7,77 (уш. т, 1H, J 4,8, >CH-C(O)-NH-CH2-), 7,79 (с, 2H,
CH
CI
C(OH)
1H,
-ArI2H2-CH2-), 8,06 (уш. т, 1H, J 4,8, -(CH2)3-NH-C(O)-), 8,20 (д, 1H, J 8,39, CH3C(O)-NH-).
Пример 3
Проведение иммуноферментного анализа свободного T3 в сыворотке крови человека в лунках микропланшета
В лунки полистирольного планшета с иммобилизованным биотинсвязывающим белком авидином (BioCat GmbH, кат. № 6521-5) вносят по 50 мкл калибровочных проб (0,
4
BY 13850 C1 2010.12.30
0,75, 1,5, 3, 6, 12 и 24 пМ), приготовленных внесением рассчитанных количеств натриевой
соли 3,3',5-трийод-L-тиронина (Sigma, кат. № T2752) в сыворотки крови, подвергнутые
обработке углем [6], контрольных сывороток или исследуемых образцов сыворотки в дубликатах. Добавляют во все лунки по 25 мкл 4 нМ антител к T3, меченых пероксидазой из
корней хрена, в фосфатном буфере. Планшеты инкубируют в течение 45 мин при комнатной температуре со встряхиванием, затем вносят во все лунки по 25 мкл 10 нМ конъюгата
биотин-T3 и продолжают встряхивание в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем удаляют жидкость из лунок и промывают их трижды фосфатным буфером, содержащим 0,9 % NaCl и 0,02 % Tween-20. Во все промытые лунки добавляют по 100 мкл
хромоген-субстратной смеси (раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в буфере с перекисью
водорода) и инкубируют при комнатной температуре без встряхивания в течение 10 минут. Останавливают реакцию добавлением во все лунки по 100 мкл раствора стопреагента (4,8 % раствор H2SO4). Измеряют в многоканальном планшетном спектрофотометре оптическую плотность растворов во всех лунках при длине волны 450 нм.
В прямых координатах строят график зависимости оптического сигнала от концентрации свободного T3 в калибровочных пробах (пмоль/л). Типичная для этой системы калибровочная кривая имеет линейную зависимость и максимальное значение сигнала в
диапазоне 1,6 - 2,2 о.е., который падает на 80 % в последней точке калибровочного диапазона. Значения концентраций свободного T3, определенные в контрольных сыворотках,
попадают в предписанные интервалы (табл. 1).
Таблица 1
Определение T3 в контрольных сыворотках различных диапазонов концентраций
Контрольная сыворотка 1
Контрольная сыворотка 2
Контрольная сыворотка 3
Предписанные значения
[свободн. T3], пМ
2,8-4,0
8,9-12,7
13,9-24,2
Открытые значения
[свободн. T3], пМ
3,7
10,3
23
Пример 4
Проведение иммунорадиометрического анализа свободного T3 в сыворотке крови
человека в пробирках
В полистирольные пробирки с иммобилизованным стрептавидином (Biomat, кат.
№ TS 127501-HB8) вносят по 0,05 мл калибровочных проб (0, 0,75, 1,5, 3, 6, 12 и 24 пМ),
приготовленных внесением рассчитанных количеств натриевой соли 3,3',5-трийод-Lтиронина (Sigma, кат. № T2752) в сыворотки крови, подвергнутые обработке углем [6],
контрольных сывороток или исследуемых образцов сыворотки в дубликатах. Добавляют
во все пробирки, включая пробирки для измерения общей активности метки (T), по 0,4 мл
раствора [125I]анти-T3. Пробирки инкубируют в течение 60 мин при комнатной температуре со встряхиванием, затем вносят во все лунки по 0,05 мл конъюгата биотин-T3 и продолжают встряхивание в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем удаляют
жидкость из всех пробирок, кроме T, и измеряют в них скорость счета в течение 1 мин в
сцинтилляционном счетчике колодезного типа.
Рассчитывают величину Bx/B0⋅100 % для каждой калибровочной, контрольной и исследуемой пробы, где B0 - среднее значение скорости счета в пробирках, содержавших калибровочную пробу "0 пмоль/л", a Bx - средние значения скорости счета в других
пробирках, содержавших анализируемые образцы. Рассчитанное значение B0/T используют как одну из оценок качества анализа.
В координатах "logit-log" строят график зависимости Bx/B0⋅100 % от концентрации
свободного T3 в калибровочных пробах (пмоль/л). По калибровочному графику определяют содержание T3 в контрольных сыворотках и исследуемых образцах. Значения кон5
BY 13850 C1 2010.12.30
центраций свободного T3, определенные в контрольных сыворотках, попадают в предписанные интервалы (табл. 2).
Таблица 2
Определение T3 в контрольных сыворотках различных диапазонов концентраций
Предписанные значения
Открытые значения
[свободн. T3], пм
[свободн. T3], пм
Контрольная сыворотка 1
2,8-4,0
3,1
Контрольная сыворотка 2
8,9- 12,7
9,7
Контрольная сыворотка 3
13,9-24,2
22
Пример 5
Определение количественного содержания T4 в фармсубстанциях и лекарственных препаратах методом иммуноферментного анализа с использованием магнитных
частиц, покрытых стрептавидином
В лунки микропланшета с низкой связывающей способностью (Sigma, кат.
№ CLS3474) вносят по 25 мкл суспензии магнитных частиц с иммобилизованным биотинсвязывающим белком стрептавидином (Dynabeads® MyOneTM Streptavidin C1, кат.
№ 650.01, Invitrogen, США), по 50 мкл калибровочных проб (0, 0,37, 0,75, 1,5, 3, 6 и 12
мкМ), приготовленных на основе последовательных разведений контрольного T4 (Sigma,
кат. № T2501) в 0,01 M NaOH, или исследуемых образцов T4, полученных путем экстракции 0,01 M NaOH из таблеток или фармсубстанций и разведенных тем же раствором в
1000 раз, в дубликатах и по 25 мкл раствора анти-T4, меченых пероксидазой из корней
хрена. Планшеты инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре со встряхиванием, затем вносят в каждую лунку по 25 мкл конъюгата биотин-T4 и инкубируют, продолжают инкубацию в течение 10 мин. Затем магнитные частицы промывают трижды,
переносят в лунки с хемилюминесцентно-субстратной смесью (раствор люминола в буфере с перекисью водорода) и инкубируют при комнатной температуре без встряхивания в
течение 5 мин в темноте. Измеряют в многоканальном планшетном спектрофлуориметре
относительный выход флуоресценции в каждой лунке. Строят график зависимости оптического сигнала от концентрации T4 в калибровочных пробах. Типичная для этой системы
калибровочная кривая имеет линейную зависимость и падение относительного сигнала
флуоресценции на 95 % в последней точке калибровочного диапазона. По калибровочному графику определяют содержание свободного T4 в исследуемых образцах, учитывая
коэффициент разведения. Значения концентраций свободного T4, определенные в контрольных образцах препаратов, попадают в предписанные интервалы (табл. 3).
Таблица 3
Определение T4 в лекарственных препаратах различных производителей
Предписанные значения
Открытые значения
содержания T4, мг/табл. содержания T4, мг/табл.
"L-THYROXIN 100 BERLIN-CHEMIE",
Berlin-Chemie/Menarini group (Герма100
98
ния)
"Левотироксин натрия таблетки,
0,0001 г в блистере" (РУП "Белмед100
98
препараты")
"ЭУТИРОКС (EUTHYROX) EM 100",
100
101
Merck KGaA for Nycomed (Германия)
Приведенные примеры показывают, что заявляемый способ позволяет определять
свободные тирогормоны в сыворотке крови человека в диапазоне 0 - 25 пМ, в фармсубстанциях и лекарственных тирогормонсодержащих препаратах - в диапазоне 0 - 12 мкМ.
6
BY 13850 C1 2010.12.30
Источники информации:
1. US 4410633. Method for the measurement of free thyroxine or 3,5,3'-triiodothyronine in a
liquid sample: заявл. 22.09.80; опубл. 18.10.83.
2. EP 0089806. Assay for the free portion of substances in biological fluids: приоритет
22.03.82; опубл. 28.09.83.
3. US 4292296. Diagnostic method: заявл. 12.09.78; опубл. 29.09.81.
4. US 4046870. Assay for free thyroid hormones: заявл. 30.06.76; опубл. 06.09.77.
5. US 3646346. Antibody-coated tube system for radioimmunoassay: заявл. 26.12.68;
опубл. 29.12.72.
6. Fritz, K.S. A direct free thyroxine (T4) immunoassay with the characteristics of a total T4
immunoassay / Fritz, K.S. A [et al.] // Clin Chem. - 2007. - V. 53. P. 911-915.
7. EP 0303284. Immunological method for the determination of free haptenic substances:
приоритет 14.08.87; опубл. 15.02.89.
8. US 6331441. Multiplexed molecular analysis apparatus and method: заявл. 21.12.98;
опубл. 18.12.01.
9. EP 0246152. Immunoassay method for thyroid hormones T3 and/or T4 using thyroglobulin: приоритет 12.05.86; опубл. 19.11.87.
10. WO 9322675. Method for determination of the amount of a ligand in a biological fluid
and kit for carring out such a method: приоритет 06.05.92; опубл. 11.09.93 (прототип).
11. WO 8906363. A method for measuring the free fraction of ligands in biological fluids:
приоритет 08.01.88; опубл. 13.07.89.
12. Урусова М.Е. Сравнительный анализ определения концентрации ряда аналитов в
сыворотке крови с использованием коммерчески доступных наборов реагентов четырех
фирм-производителей (Алкор Био, Roche, DPC и Bayer Corporation) / Урусова, М.Е. [и др.]
// Коммерческая биотехнология [Электронный ресурс]. - 2008. - Режим доступа:
http://www.cbio.ru/modules/news/article.php?storyid = 1837. - Дата доступа: 19.09.2008.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
20034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
7
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
127 Кб
Теги
by13850, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа