close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14028

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.02.28
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/108
A 61K 39/112
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИММУНОКОРРЕКЦИИ
(21) Номер заявки: a 20090306
(22) 2009.03.04
(43) 2009.08.30
(71) Заявители: Зайцева Алеся Владимировна; Зайцева Виктория Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович;
Зайцева Людмила Петровна (BY)
(72) Авторы: Зайцева Алеся Владимировна; Зайцева Виктория Владимировна;
Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Людмила Петровна (BY)
(73) Патентообладатели: Зайцева Алеся Владимировна; Зайцева Виктория Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович; Зайцева Людмила Петровна (BY)
BY 14028 C1 2011.02.28
BY (11) 14028
(13) C1
(19)
(56) BY 7787 C1, 2006.
BY 11671 C1, 2009.
ЗАЙЦЕВА А.В. и др. Сельское хозяйство - проблемы и перспективы. Тезисы
международной научно-практической
студенческой конференции. - Гродно,
2005. - C. 191-192.
JP 57-14533 A, 1982.
UA 63201 A, 2004.
RU 2051969 C1, 1996.
RU 2112531 C1, 1998.
US 4076807, 1978.
ДРЕМАЧ Г.Э. и др. Известия Национальной академии наук Беларуси. Серия
аграрных наук. - 2005. - № 2. - С. 92-94.
SU 594173, 1978.
(57)
Способ получения препарата для иммунокоррекции, включающий обработку бактериальной массы, ее отделение, выделение липополисахаридпептидной фракции соматического антигена путем экстракции бактериальной массы 0,5-1,0 %-ным раствором аммиака
в течение 60-100 минут, отделение экстракта и консервацию, отличающийся тем, что используют бактериальную массу сальмонелл или эшерихий, которую предварительно
инактивируют в присутствии 0,1-0,3 % формалина, затем обрабатывают 0,5-1,0 %-ным
раствором аммиака при температуре 50-75 °С, а экстракцию осуществляют при температуре 90-120 °С.
Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии, а именно к способу получения
иммуностимулятора из соматических антигенов сальмонелл или эшерихий.
Широко известны способы получения иммуностимулирующих препаратов из экстрактов бактериальных клеток [1-8]:
детоксицированный липополисахарид из нейсерий [3];
липополисахарид из биомассы авирулентного штамма S. shigella sonnei выделяют
водно-фенольной экстракцией при температуре 65 °С по способу O.Westphal, K.Janrr [8] и
очищают гельфильтрацией на сефадексе G 200 [4];
липополисахарид получают путем экстракции бактерий трихлоруксусной кислотой [5];
липополисахарид из биомассы B. pertussis штамма 475 выделяют по методу
O. Westphal et all [7] и очищают путем трехкратного пересаждения и дальнейшего
центрифугирования при 15000 д в течение двух часов [6];
BY 14028 C1 2011.02.28
липополисахарид из биомассы пуллорных бактерий Salmonellum pullorum gallinarum
штамма 24 КСТ выделяют путем экстракции биомассы бактерий 0,5 %-ным раствором
аммиака при температуре 80 °С в течение 60 мин и последующей обработки экстракта
формалинизированными эритроцитами в соотношении 1:1 [1];
полисахарид антиген из биомассы сальмонелл, обработанных ацетоном в течение 2460 ч при температуре 4-20 °С и массовом соотношении 1:3, экстрагируют 0,5-1,0 %-ным
раствором аммиака в течение 60-100 мин при температуре 90-105 °С, центрифугируют и в
центрифугат добавляют до 0,5-1,0 % тиосульфата натрия [2];
и другие.
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
способ получения биологически активного препарата из сальмонелла тифи [3].
Этот препарат представляет собой полисахаридную фракцию соматического O-антигена бактерий брюшного тифа, который получают путем депротеинизации фенольного
антигена с последующим удалением липида A при гидролизе в ацетоне.
Однако препарат, полученный из биомассы сальмонелла тифи, обладает высокой токсичностью и низкой биологической активностью.
Задача изобретения - увеличение биологической активности целевого продукта и снижение его токсичности.
Поставленная цель достигается тем, что биомассу сальмонелл или эшерихий инактивируют формалином, балластные компоненты элюируют с поверхности бактериальных клеток
0,5-1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 50-75 °С, а липополисахаридпептидную фракцию соматических антигенов экстрагируют 0,5-1,0 %-ным раствором аммиака.
Сущность изобретения. Способ получения препарата для иммунокоррекции, включающий обработку бактериальной массы, ее отделение, выделение липополисахаридпептидной фракции соматического антигена путем экстракции бактериальной массы 0,51,0 %-ным раствором аммиака в течение 60-100 мин, отделение экстракта и консервацию,
отличающийся тем, что используют бактериальную массу сальмонелл или эшерихий, которую предварительно инактивируют в присутствии 0,1-0,3 % формалина, обрабатывают
0,5-1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 50-75 °С, а экстракцию осуществляют
при температуре 90-120 °С.
Пример 1.
Сальмонеллезные бактерии выращивали на питательной среде, инактивировали путем
добавления до 0,3 % формалина и обрабатывали 1,0 %-ным раствором аммиака при температуре 75 °С, биомассу бактерий отделяли от культуральной жидкости путем центрифугирования. Биомассу ресуспендировали в 1,0 %-ном растворе аммиака и инкубировали
при температуре 120 °С в течение 100 мин.
Полученный экстракт отделяли от бакмассы центрифугированием и консервировали
добавлением до 0,1 % формалина.
Белым мышам вводили препарат подкожно двукратно в дозе 0,06 см3/гол. и инфицировали в дозе 2 LD50 рожистыми бактериями штамма матрикса Конева. Контрольным животным препарат не вводили.
Через 7 суток в контрольной группе погибли все животные, а в опытной сохранность
составила 100 %.
Пример 2.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но использовали эшерихиозные бактерии, а экстракт консервировали добавлением до 0,3 % формалина.
Введение препарата обеспечивало сохранность 90,0 % животных, инфицированных
рожистыми бактериями.
Пример 3.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но сальмонеллезные бактерии инактивировали путем добавления до 0,1 % формалина и обрабатывали 0,5 %-ным раствором ам2
BY 14028 C1 2011.02.28
миака при температуре 50 °С, биомассу бактерий отделяли от культуральной жидкости
путем центрифугирования. Биомассу ресуспендировали в 0,05 %-ном растворе аммиака и
инкубировали при температуре 90 °С в течение 100 мин.
Приготовленный препарат защищал от гибели 100 % инфицированных мышей.
Пример 4.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инактивировали путем добавления формалина до 0,05 %.
Препарат защищал от гибели 70 % инфицированных мышей.
Пример 5.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но биомассу сальмонелл инактивировали путем добавления формалина до 0,4 %.
Препарат защищал от гибели 60 % инфицированных мышей.
Пример 6.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инактивированную бакмассу обрабатывали 0,4 %-ным раствором аммиака при температуре 45 °С.
Приготовленный препарат защищал от гибели 70 % инфицированных животных.
Пример 7.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инактивированную бакмассу обрабатывали 1,1 %-ным раствором аммиака при температуре 80 °С.
Препарат защищал от гибели только 40 % инфицированных животных.
Пример 8.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инактивированную бакмассу экстрагировали 0,4 %-ным раствором аммиака при температуре 85 °С в течение 55 мин.
Полученный препарат защищал от гибели 40 % инфицированных животных.
Пример 9.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но инактивированную бакмассу экстрагировали 1,1 %-ным раствором аммиака при температуре 123 °С в течение 105 мин.
Полученный препарат защищал от гибели 60 % инфицированных животных.
Пример 10.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но экстракт не отделяли от бакмассы
центрифугированием и не консервировали формалином.
Полученный препарат был токсичным и вызывал гибель 100 % белых мышей опытной
и контрольной групп.
Из представленных данных следует, что предварительная инактивация бакмассы формалином в концентрации ниже 0,1 % и выше 0,3 % приводит к снижению активности целевого продукта.
Предварительная обработка инактивированной бакмассы аммиаком при температуре
ниже 50 °С и выше 75 °С при концентрациях аммиака 0,4 и 1,1 % способствовала снижению биологической активности целевого продукта.
При инкубации бакмассы в 1,1 %-ном растворе и при температуре выше 120 °С отмечается разрушение (деградация) антигенного комплекса бактерий и соответственно снижается активность целевого продукта.
Экстракция соматических антигенов в присутствии 0,4 %-ного раствора аммиака и
при температуре 85 °С в течение 55 мин не обеспечивает полной элюции указанных антигенов с поверхности бактериальных клеток и, как следствие этого, наблюдается снижение
активности целевого продукта.
Препарат, изготовленный при оптимальных параметрах, обеспечивает защиту от гибели 90-100 % инфицированных животных.
3
BY 14028 C1 2011.02.28
Источники информации:
1. Патент РБ 4371.
2. BY 7787 C1, 2006.
3. Дельвич А.А. и др. Протективная активность детоксицированного липополисахарида
Neiseria meningitidis серогруппы A в опытах in vivo // Микробиология. - 1989. - № 5. - С. 70.
4. Татаренко Т.М., Дальвадяну С.М., Бахрах Е.Э. Проблемы особоопасных инфекций. Саратов, 1972. Вып. 3 (25). - С. 93-98.
5. Boivin A., Vesrobcani L. // C.R. Sos. Biol. - 1993. - Vol. 144. - P. 307-310.
6. Dalla Venezia N., Minka S., Brunetean M. Et all. // Europ. J. Biochem. 1985. - Vol. 151. P. 399-404.
7. Staub A.M. // Meth. Carbohydr. Chem. - 1965. - Vol. 5. - P. 92-95.
8. Westphal O., Jann K. // Meth. Carbohydr. Chem. - 1965. - Vol. 5. - P. 83-91.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
77 Кб
Теги
by14028, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа