close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14062

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 14062
(13) C1
(19)
(46) 2011.02.28
(12)
(51) МПК (2009)
A 61K 38/05
A 61P 25/00
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СИНДРОМА ДЕФИЦИТА
ВНИМАНИЯ/ГИПЕРАКТИВНОСТИ У МЛЕКОПИТАЮЩЕГО
(21) Номер заявки: a 20080712
(73) Патентообладатель: Государственное уч(22) 2008.06.02
реждение "Научно-производственный
(43) 2010.02.28
центр "Институт фармакологии и био(71) Заявитель: Государственное учреждехимии Национальной академии наук
ние "Научно-производственный центр
Беларуси" (BY)
"Институт фармакологии и биохимии (56) RU 2163802 C2, 2001.
Национальной академии наук БелаRU 2321408 C1, 2008.
руси" (BY)
(72) Авторы: Романовский Дмитрий Иосифович; Кравченко Елена Валериевна;
Максимова Лейла Вагиф кызы (BY)
BY 14062 C1 2011.02.28
(57)
Способ лечения синдрома дефицита внимания/гиперактивности у млекопитающего,
заключающийся во введении указанному млекопитающему терапевтически эффективного
количества фармацевтической композиции, содержащей пролил-лейцин и фармацевтически приемлемый носитель.
Изобретение относится к области медицины (фармакологии, психиатрии), ветеринарии и фармацевтической промышленности, касается способа лечения синдрома дефицита
внимания/гиперактивности (СДВГ) у млекопитающего, заключающегося во введении указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической
композиции, содержащей пролил-лейцин и фармацевтически приемлемый носитель. Пролил-лейцин (формула I, Pro-Leu, молекулярная формула - C11H20N2O3) имеет молекулярную массу 228.29, регистрационный номер соединения по CAS - [52899-07-7].
NH O
C
(I)
CH3
NH
CH3CHCH2CH
O
C
OH
"Терапевтически эффективное количество" обозначает количество, которое способно
обеспечить эффективное лечение СДВГ.
Синдромом дефицита внимания/гиперактивности (Attention deficit / hyperactivity disorder,
AD/HD) - патологическое состояние, которое включает в себя избыточную двигательную
активность, импульсивность поведения, дефект концентрации внимания, отвлекаемость,
и, как следствие, проблемы во взаимоотношениях с окружающими и трудности обучения.
Дефицит внимания и гиперактивности описан у млекопитающих, в т.ч. - у человека.
BY 14062 C1 2011.02.28
В последние десятилетия усилия врачей, психологов, педагогов, социальных работников направлены на решение вопроса о помощи лицам, страдающим СДВГ. В синдроме
выделяются 3 подтипа с преобладанием нарушения внимания СДВГ (В), с преобладанием
гиперактивного и импульсивного поведения СДВГ (ГА) и комбинированный подтип
СДВГ (ком) [2]. Распространенность СДВГ среди детей составляет 4-10 %, в том числе
среди младших школьников - до 20 %. Эти дети представляют особые трудности для педагогов и родителей в связи с проблемами поведения и обучения [1,3]. Признаки расстройства проявляются, начиная с 5-7 летнего возраста, и продолжаются весь период
детства [1]. По имеющимся данным, у трети детей СДВГ переходит во взрослую жизнь
[1]; полагают, что это заболевание является наследственным [3].
Анализируя особенности познавательной деятельности у детей и взрослых с СДВГ,
многие исследователи отмечают нарушения рабочей памяти, внутренней речи, эмоционального контроля, мотивации и уровня бодрствования, которые отвечают за регуляцию психической деятельности и поведения [2]. Лица с СДВГ испытывают трудности в личных
взаимоотношениях, у них низкий уровень социальных навыков и самооценки, выше употребление алкоголя и наркотиков, больше суицидальных попыток, соматизирующих расстройств и конфликтов с законом [1]. СДВГ у детей приводит к тяжелым последствиям для
семьи: 99 % родителей испытывают чувство хронической усталости из-за постоянного контроля поведения и обучения ребенка, 37 % - огорчение и 21 % - раздражение, 67 % считают
своих детей с СДВГ источником внутрисемейных ссор и конфликтов [1]. У педагогов,
сверстников, а при переходе ребенка во взрослую жизнь - у коллег по работе лица с СДВГ
являются причиной невротизации, нарушения организации учебного (рабочего) процесса и
поддержания дисциплины, профессиональной деформации [1].
Медицинское решение проблемы является наиболее грамотным и эффективным методом помощи больным с СДВГ. В последние десятилетия для коррекции нарушений психической деятельности используют лекарственные средства пептидной природы [4, 5].
Существенным является то обстоятельство, что зачастую небольшие фрагменты молекул
нейропептидов характеризуются той же биологической активностью, что и их эндогенный
предшественник [4, 5]. В связи с этим, а также с учетом технологических соображений и
вопросов стабильности, внимание исследователей сосредоточено на изучении потенциальных лечебных свойств коротких пептидов [6]. Известны дипептиды, родственные по
химической структуре действующему веществу заявляемой композиции, улучшающие
состояние больных с нарушениями функций головного мозга. К их числу относятся производные пролин-тирозина, обладающие нейролептической и антидепрессантной активностью и положительным мнемотропным действием, как, например, N-капроил-L-пролилL-тирозин [6]. Кроме того, известны N-ацилпролилдипептиды, применяющиеся для лечения нарушений умственных способностей, вызванных мозговой травмой, старением,
старческим слабоумием, для лечения умственно отсталых детей, ожирения, нарушений
центральной нервной системы в результате химической интоксикации, преимущественно
вызванной сатурнизмом, серповидно-клеточной анемии, синдрома отмены бензодиазепина, который проявляется в виде агрессивности, тревожности и припадков, а также лечения алкогольной зависимости [7]. Один из N-ацилпролилдипептидов -этиловый эфир
N-фенилацетил-L-пролилглицина - предложен для применения при вышеназванных расстройствах в виде таблеток [9], это же соединение может назначаться в виде инъекций для
лечения острого инсульта [10]. N-ацилпролилдипептиды, в том числе этиловый эфир
N-фенилацетил-L-пролилглицина, относятся к малотоксичным соединениям [8]. Однако
отсутствуют сведения об эффективности производных пролин-тирозина и N-ацилпролилдипептидов при СДВГ. Не имеется данных об активности этих соединений в опытах на животных с генетически обусловленными нарушениями поведения, включающими
дефицит внимания/гиперактивность (например, на крысах линии SHR [11-13]). Этиловый
эфир N-фенилацетил-L-пролилглицина (ноопепт) мало растворим в воде, поэтому воз2
BY 14062 C1 2011.02.28
можности изготовления его инъекционной формы ограничены выпуском масляного раствора [10].
Имеется ряд психотропных лекарственных средств, которые, как и заявляемая фармацевтическая композиция, предложены для лечения СДВГ у пациентов разных возрастных
групп [2, 3, 14, 15]. Так, в терапии этой патологии используются имипрамин, дезипрамин,
нортриптилин и некоторые другие антидепрессанты [3], однако эти лекарственные средства вызывают ряд серьезных побочных эффектов, преимущественно со стороны сердечно-сосудистой и центральной нервной систем; при их использовании необходимо
постоянное наблюдение за состоянием здоровья пациента; требуется тщательный подбор
доз [3, 16].
В настоящее время для лечения СДВГ наиболее часто применяют метилфенидат [2, 3,
14, 15]. Недостатками метилфенидата являются: ограниченное применение в связи с выраженными побочными эффектами (бессонница, тошнота, возбужденность, тревога,
обострение психопатологической симптоматики) [16]; необходимость специальной санкции в связи с потенциальной возможностью развития лекарственной зависимости [3, 16];
короткая продолжительность действия таблетированных форм метилфенидата (2-4 часа),
вследствие чего возникает необходимость его приема несколько раз в день [15]. Для лечения расстройства дефицита внимания /гиперактивности предложена композиция для
местного применения метилфенидата, с помощью которой доставка активной субстанции
достигается в течение, по меньшей мере, 10 часов [15]. Однако применение этой композиции не позволяет избежать развития побочных эффектов метилфенидата, поскольку, в конечном счете, психостимулятор попадает в системное кровообращение приблизительно в
тех же концентрациях, что и при применении таблетированных форм метилфенидата и
вследствие этого оказывает по существу то же действие на центральную нервную систему,
сердечно-сосудистую и иные жизненно важные системы организма, что и при приеме
внутрь [15]. Известны таблетки замедленного высвобождения для приема внутрь, содержащие 18 мг, 27 мг, 36 мг или 54 мг метилфенидата гидрохлорида - "Concerta" (OROS
MPH), разработанные фирмой ALZA Corporation, USA (прототип) [17], которые, как и заявляемая композиция, предназначены для лечения СДВГ. Как и заявляемая композиция,
прототип может применяться как в терапии детей и подростков, так и взрослых пациентов. Как для заявляемой композиции, так и для прототипа охарактеризовано действующее
вещество, что позволяет обеспечить адекватное качество лекарственных форм, провести
фармакокинетические исследования. Действующие вещества заявляемой композиции и
прототипа оказывают специфический фармакологический эффект на катехоламинергические механизмы, задействованные в патогенезе СДВГ. Известно, что указанное расстройство сопровождается снижением дофаминергической активности в корковых областях
(передние извилины), проявляющимся в виде когнитивного дефицита, и повышением дофаминергической активности в подкорковых областях (хвостатое ядро), отражающимся в виде
чрезмерной подвижности и импульсивности [18]. Метилфенидат стимулирует центральные норадренергические и в большей степени дофаминергические рецепторы, оказывает
ингибирующее влияние на активность моноаминоксидазы и тормозит обратный нейрональный захват дофамина и норадреналина [16], а пролил-лейцин влияет на дофаминергическую нейротрансмиссию в мозге, о чем свидетельствует его способность ингибировать
гипокинезию, вызванную низкими дозами апоморфина и потенцировать гиперактивность,
вызванную амфетамином [19], а также полное предотвращение его фармакологического
действия реагентом 6-OHDA, оказывающим нейротоксическое влияние на катехоламинергические системы мозга [20]. Прототип, как и заявляемая композиция, обеспечивает
более высокое качество жизни и более высокую приверженность пациентов лечению в сравнении с применяемыми средствами терапии СДВГ (что достигается обеспечением 12часовой продолжительности его действия и возможностью однократного приема). Однако
по эффективности прототип не превосходит метилфенидат в оральных формах быстрого
3
BY 14062 C1 2011.02.28
высвобождения [21], для прототипа характерны все те же побочные действия, что и для
метилфенидата в других лекарственных формах: в ходе клинических испытаний прототипа ("Concerta") у пациентов выявлены нарушения сна, судорожные сокращения мышц,
нервозность, эмоциональная лабильность, боли в животе, анорексия; вследствие развития
побочных эффектов лечение прототипом было прервано у 6,7 % пациентов; прототип вызывает лекарственную зависимость, и его назначение подлежит государственному регулированию [17].
Целью настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции, сочетающей эффективность в отношении СДВГ с низкой токсичностью, меньшей выраженностью и частотой побочных эффектов, чем у прототипа (метилфенидата в виде таблеток
замедленного высвобождения для приема внутрь), не вызывающей абстинентного синдрома после прекращения лечения. Такие свойства композиции особенно важны ввиду
необходимости разработки безопасного средства терапии СДВГ у млекопитающих, в т.ч. у человека.
Поставленная задача решается за счет введения в состав композиции высокоактивного
дипептида пролил-лейцина. Примером осуществления изобретения может служить фармацевтическая композиция для лечения СДВГ, содержащая в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в диапазоне доз 0,0005-0,5 г (предпочтительно 0,0050,03 г). Предпочтительно введение пролил-лейцина в виде инъекционной лекарственной
формы, поскольку при этом способе введения обеспечивается наибольшая биодоступность активного вещества и ниже вероятность его энзиматической деградации. Такой инъекционной лекарственной формой, содержащей пролил-лейцин, может быть, например,
раствор для инъекций или раствор для инфузий, или лиофилизированный порошок для
приготовления раствора для инъекций, или лиофилизированный порошок для приготовления раствора для инфузий, или стерильная сухая рассыпка для приготовления раствора
для инъекций, или стерильная сухая рассыпка для приготовления раствора для инфузий.
При этом фармацевтическая композиция может содержать одно или несколько разрешенных к медицинскому применению вспомогательных веществ (целевых добавок), способных
улучшить фармацевтические характеристики заявляемой композиции. К числу предпочтительных вспомогательных веществ относятся вода для инъекций и водные растворы, жирные
масла (наиболее предпочтительно оливковое масло), их простые и сложные эфиры, бензилбензоат, бензиловый спирт, этиловый спирт, этилолеат, диметилсульфоксид, сульфолан,
глицерин, пропиленгликоли (ПЭГ 200, 300, 400, 600), полиэтиленоксид (ПЭО 200, ПЭО
400) и его эфиры, твин-80, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисорбат-80,
полиэтиленгликоль, гликофурол, изопропилмиристат, диоксаны и диоксаланы, амиды,
натрия хлорид, глюкоза, лактоза, сахароза, сорбит, маннит, трилон Б (динатриевая соль
этилендиаминтетрауксусной кислоты), стабилизаторы, водо- и жирорастворимые антиоксиданты, антимикробные консерванты, буферы.
Фармацевтическая композиция на основе пролил-лейцина отличается от прототипа
(метилфенидата в виде таблеток замедленного высвобождения для приема внутрь), имипрамина, дезипрамина, нортриптилина, амитриптилина и кломипрамина тем, что, обеспечивая эффективную коррекцию негативных проявлений СДВГ, она не вызывает существенных побочных эффектов, не требует постоянного контроля за состоянием здоровья
пациента. От прототипа композиция на основе пролил-лейцина отличается также тем, что
при ее использовании низок риск развития острого отравления, нет абстинентного синдрома и не требуется специального разрешения на применение, поскольку отсутствует потенциальная опасность развития лекарственной зависимости. Заявляемая композиция
отличается от лекарств на основе производных пролин-тирозина и N-ацилпролилдипептидов тем, что указанные соединения пептидной природы не обладают доказанным
терапевическим действием при СДВГ, а для пролил-лейцина показаны статистически зна-
4
BY 14062 C1 2011.02.28
чимые фармакологические эффекты в экспериментах на животных, являющихся генетической моделью СДВГ.
Пример 1.
Изучали эффективность пролил-лейцина (здесь и далее использована субстанция производства фирмы Sigma-Aldrich, США, P1130-1G) в условиях моделирования такого компонента СДВГ, как невнимание и сниженная способность к обучению. Опыты проводили
на неполовозрелых крысах-самцах линии SHR в возрасте 5-6 недель.
Одной из элементарных форм обучения является габитуация (привыкание). Привыкание является примером неассоциативного обучения и состоит не в приобретении новых
поведенческих реакций, а в их подавлении, поэтому его называют также "негативным
обучением". Одним из проявлений привыкания является ослабление во времени исследовательско-ориентировочной реакции на новую обстановку вследствие ее оценки как биологически незначимой. Нарушения габитуации характерны для ряда патологических
процессов, особенно - для синдрома дефицита внимания и гиперактивности (AD/HD attention-deficit/hyperactivity disorder) [22]; они отмечаются при шизофрении [23, 24], типичных и атипичных панических расстройствах [25], депрессии [25], тревожных расстройствах
[26] и объясняются дефицитом внимания [22], ухудшением процессинга информации [27],
затрудненным "входом в задачу" [25].
С целью изучения особенностей габитуации при СДВГ и поиска потенциальных корректоров названной патологии проводят эксперименты на линейных животных с генетически обусловленными нарушениями поведения [11-13, 28], например на крысах линии
SHR [11-13].
Неполовозрелых крыс-самцов линии SHR основной и контрольной групп помещали в
камеры актометра "Ugo Basile" (Италия) поодиночке дважды с перерывом 3 суток между
1-й и 2-й высадками. Показатели двигательной активности регистрировали в 1-ю и 2-ю
минуты наблюдения.
Животным основной группы вводили пролил-лейцин в дозе 0,5 мг/кг внутрибрюшинно 5-кратно (1 инъекция в сутки, в т.ч. последние 2 введения - за 30 минут до 1-й и 2-й высадок соответственно). Крысам контрольной группы применяли плацебо (здесь и далее дистиллированная вода) при использовании того же режима введения.
У животных без генетически обусловленных нарушений привыкание к окружающей
обстановке проявляется постепенным снижением двигательной активности в горизонтальной плоскости (горизонтальная двигательная активность, ГДА). При 2-й и последующих высадках животные помнят, что уже находились в камере, и совершают меньше
движений при повторном обследовании установки. Это проявляется уменьшением ГДА и
снижением коэффициента привыкания (К), определяемого здесь и далее для каждого животного по модифицированной формуле [29]:
ДА n
,
K=
(1)
ДА1
где ДА1 - ГДА животных при 1-й высадке; ДАn - тот же показатель при каждой последующей высадке; n - порядковый номер высадки. Чем меньше абсолютное значение коэффициента К, тем глубже процесс привыкания (лучше неассоциативное обучение) [29].
Генетически обусловленный дефицит направленного внимания у неполовозрелых
крыс-самцов линии SHR приводит к ухудшению памяти, и при 2-й высадке активность
этих животных как в 1-ю минуту, так и во 2-ю минуту, а также за 2 минуты наблюдения
практически не изменяется по сравнению с теми же показателями при первом обследовании камеры (табл. 1). Средние значения коэффициента угашения К превышают 1,0 (1,16 в 1-ю минуту, 1,92 - во 2-ю минуту, и 1,27 - за 2 минуты наблюдения), что подтверждает
нарушение процессов привыкания (табл 1).
5
BY 14062 C1 2011.02.28
Напротив, при введении пролил-лейцина уже в 1-ю минуту наблюдения при 2-й высадке имеется отчетливая тенденция к снижению двигательной активности в сравнении с
1-й высадкой. Во 2-ю минуту регистрации при повторном помещении в камеру актометра
активность неполовозрелых крыс-самцов линии SHR основной группы была статистически значимо ниже, чем при первом обследовании камеры в те же сроки. Значения К на
фоне введения пролил-лейцина - ниже 1,0 (0,68 - в 1-ю минуту, 0,73 - во 2-ю минуту, и
0,67 - за 2 минуты наблюдения) - табл. 1. В связи с развитием привыкания у крыс основной группы ГДА статистически достоверно ниже, чем в контроле, за 1-ю минуту и суммарно за 2 минуты наблюдения (табл. 1). Это говорит о существенном улучшении
неассоциативного обучения под действием пролил-лейцина.
Таблица 1
Влияние однократного внутрибрюшинного введения пролил-лейцина
на неассоциативное обучение у неполовозрелых крыс-самцов линии SHR
Группа/ доза (мг/кг)
Плацебо, N = 12
Пролил-лейцин,
0,5, N-12
Плацебо, N = 12
Пролил-лейцин,
0,5, N = 12
Плацебо, N = 12
Пролил-лейцин, 0,5,
N = 12
Высадка 1
Высадка 2
ГДА
ГДА
первая минута наблюдения
79,2±8,61
75,0±7,76
87,5
76,0
44,6±8,06
67,4±6,82
44,5
73,0
P1,1 = 0,001
вторая минута наблюдения
54,9±9,12
52,4±7,14
56,5
58
32,8±5,02
57,3±6,72
35,0
61,5
P1,2<0,05
суммарно за две минуты наблюдения
134,08±15,25
127,4±11,90
140,5
140,5
77,4±10,25
124,8±12,51
81,0
133,0
P1,1<0,05
К
1,16±0,21
0,68±0,12
1,92±0,74
0,73±0,17
1,27±0,29
0,67±0,11
P1,1 - различия между основной и контрольной группами статистически достоверны,
критерий Крускала-Уоллиса с post-hoc анализом по Тьюки.
P1,2 - различия с исходными значениями на фоне введения пролил-лейцина статистически достоверны, критерий Фридмана с post-hoc анализом по Тьюки.
N- число животных, включенных в эксперимент.
К- усредненные значения привыкания.
Здесь и далее данные представлены в виде X±Sx (Standard Error of Mean) или в виде
медианы (курсив).
Пример 2.
Оценивали эффективность пролил-лейцина у взрослых крыс-самцов линии SHR (возраст - 6 месяцев) в условиях моделирования такого компонента СДВГ, как невнимание и
сниженная способность к обучению.
Крыс-самцов линии SHR основной и контрольной групп помещали в камеры актометра "Ugo Basile" (Италия) поодиночке трижды с перерывом 3 суток между 1-й и 2-й высадками; 2-ю и 3-ю высадки осуществляли на протяжении двух последовательных дней.
Регистрировали показатели ГДА за 3 минуты наблюдения.
6
BY 14062 C1 2011.02.28
Животным основной группы вводили пролил-лейцин в дозе 0,5 мг/кг внутрибрюшинно 6-кратно (1 инъекция в сутки, в т.ч. последние 3 введения - за 30 минут до 1-й, 2-й и
3-й высадок соответственно). Крысам контрольной группы применяли плацебо при использовании того же режима введения.
У взрослых крыс-самцов линии SHR неассоциативное обучение протекает несколько
легче, чем у неполовозрелых крыс этой же линии. Вместе с тем снижение двигательной
активности животных контрольной группы в камере актометра от 1-й к 3-й высадке
за 3 минуты наблюдения не является статистически достоверным (табл. 2). При введении
пролил-лейцина двигательная активность животных за 3 минуты регистрации как при 2-й,
так и при 3-й высадках статистически значимо уменьшается по сравнению с исходным
уровнем ГДА (табл. 2). Это указывает на существенное облегчение неассоциативного
обучения под действием пролил-лейцина.
Таблица 2
Влияние однократного внутрибрюшинного введения пролил-лейцина
на неассоциативное обучение у взрослых крыс-самцов линии SHR
Высадка 2
Высадка 3
Группа/ доза Высадка 1
(мг/кг)
ГДА
ГДА
К
ГДА
К
суммарно за три минуты наблюдения
Плацебо,
199,9±22,59
115,9±15,31
130,1±16,90
0,69±0,15
0,66±0,08
N=9
209,0
116,0
129,0
Пролил93,8±14,35
91,9±13,03
160,8±13,38
лейцин,
96,0
0,59±0,09
97,5
0,56±0,07
173,0
0,5, N = 8
P1<0,05
P1<0,05
P1 - различия с исходными значениями на фоне введения пролил-лейцина статистически достоверны, критерий Фридмана с post-hoc анализом по Тьюки.
К - усредненные значения коэффициента привыкания.
Пример 3.
Проводили оценку активности пролил-лейцина в эксперименте на неполовозрелых
крысах-самцах линии SHR при моделировании такого компонента СДВГ, как гиперактивность/импульсивность.
Неполовозрелых крыс-самцов SHR основной и контрольной групп помещали в камеры актометра "Ugo Basile" (Италия) поодиночке. Регистрировали показатели двигательной
активности за 5 минут наблюдения. Животным основной группы вводили пролил-лейцин
в дозе 0,5 мг/кг внутрибрюшинно 4-кратно (1 инъекция в сутки, в т.ч. последнее введение
за 30 минут до высадки). Крысам контрольной группы применяли плацебо при использовании того же режима введения.
Под влиянием пролил-лейцина локомоторная активность животных снижалась и составила 88,5 % от уровня контроля (табл 3).
Пример 4.
Оценивали активность пролил-лейцина в эксперименте на взрослых крысах-самцах
SHR (возраст - 6 месяцев) при моделировании такого компонента СДВГ, как гиперактивность/импульсивность.
Крыс-самцов SHR основной и контрольной групп помещали в камеры актометра "Ugo
Basile" (Италия) поодиночке. Регистрировали показатели двигательной активности за
5 минут наблюдения. Животным основной группы вводили пролил-лейцин в дозе 0,5 мг/кг
внутрибрюшинно 4-кратно (1 инъекция в сутки, в т.ч. последнее введение за 30 минут до
высадки). Крысам контрольной группы применяли плацебо при использовании того же
режима введения.
Под влиянием пролил-лейцина горизонтальная двигательная активность взрослых животных снижалась и составила 80,4 % от уровня контроля (табл. 3).
7
BY 14062 C1 2011.02.28
Таблица 3
Влияние однократного внутрибрюшинного введения пролил-лейцина
на двигательную активность неполовозрелых и взрослых крыс-самцов линии SHR
ГДА за 5 минут
Группа/ доза
Неполовозрелые крысы-самцы
Взрослые крысы-самцы
(мг/кг)
линии SHR
линии SHR
257,3±25,12
269,9±25,11
Плацебо
253
264,5
N = 12
N = 10
Пролил-лейцин,
227,7±20,27
216,9±19,4
0,5
232,0
213,0
N = 12
N=8
Пример 5.
Исследовали влияние пролил-лейцина на двигательную активность животных, которые генетически не предрасположены к гиперактивности/импульсивности. Отличие от
исследований, описанных в примере 4, заключалось в том, что активность пролил-лейцина
изучена при его введении взрослым крысам-самцам линии August (возраст - 12 месяцев).
Крыс-самцов линии August основной и контрольной групп помещали в камеры актометра "Ugo Basile" (Италия) поодиночке. Регистрировали показатели двигательной активности за 5 минут наблюдения. Животным основной группы вводили пролил-лейцин в дозе
0,5 мг/кг внутрибрюшинно 4-кратно (1 инъекция в сутки, в т.ч. последнее введение - за 30
минут до высадки). Крысам контрольной группы применяли плацебо при использовании
того же режима введения.
Уровень ГДА взрослых крыс-самцов линии August контрольной группы значимо ниже, чем у взрослых крыс-самцов линии SHR (на 34,2 %, p = 0,049, t-критерий Стьюдента).
Под влиянием пролил-лейцина ГДА крыс линии August возрастала и составила 147,1 %,
107,9 %, 111,0 % от уровня контроля (крысы August с введением плацебо) за 5 минут, 10
минут и 15 минут регистрации соответственно - табл. 4.
Таблица 4
Влияние однократного внутрибрюшинного введения пролил-лейцина
на двигательную активность взрослых крыс-самцов линии August
ГДА
Группа/ доза
(мг/кг)
5 минут
10 минут
15 минут
Плацебо, N = 10
177,6±35,79
326,6±45,59
399,8±41,10
178
361
416,5
Пролил-лейцин,
261,3±71,14
352,3±117,34
443,7±122,93
0,5, N = 8
230
270
343
Это говорит о том, что снижение двигательной активности у неполовозрелых и взрослых крыс-самцов линии SHR, описанное в примерах 3 и 4, не является следствием седативного действия пролил-лейцина, а его специфическим влиянием на гиперактивность у
животных с генетически обусловленными расстройствами, моделирующими СДВГ.
Пример 6.
Было изучено влияние пролил-лейцина на поведение белых половозрелых нелинейных мышей-самцов и их двигательную активность, а также его острая токсичность. Дипептид вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе (0,5 мг/кг) и в дозах, 10-кратно
(5,0 мг/кг) и 100-кратно (50,0 мг/кг) превышающих терапевтическую.
Накануне введения пролил-лейцина или плацебо проводилась оценка исходного состояния нервной системы животных с использованием батареи тестов оценки нейротропной
активности. Число погибших животных после однократной внутрибрюшинной инъекции
8
BY 14062 C1 2011.02.28
плацебо или пролил-лейцина в дозах 0,5 мг/кг и 5,0 мг/кг регистрировали на протяжении
1 суток, после однократного внутрибрюшинного введения плацебо или пролил-лейцина в
дозе 50,0 мг/кг - в течение 14 суток. Визуальную и инструментальную оценку поведенческих реакций осуществляли в сроки до 24 часов после введения тестируемых образцов.
Отмечали отсутствие/наличие изменений внешнего вида и шерстного покрова животных,
а также диареи, нарушения реакции на тактильные раздражители, одышки, слюнотечения,
гипотермии. Определяли число мышей, у которых введение пролил-лейцина вызывало
один из указанных характерных симптомов, а также отмечали выраженность этих симптомов в баллах по 4-балльной шкале: 0 баллов - отсутствие реакции, 1 - слабо выраженная
реакция, 2 - отчетливая, умеренно выраженная реакция, 3 -сильно выраженная реакция.
Проводили регистрацию отсутствия/наличия экзофтальма, птоза век, стереотипии (упорное повторение какого-либо сложного, но бессмысленного действия, которое каждый раз
выполняется тем же самым способом, что и раньше), тремора и судорог у экспериментальных животных. При наличии судорог указывали, имеют место судороги клонические, тонические или клонико-тонические; определяли время иммобилизации, латентный период
наступления первой клонико-тонической судороги, количество приступов, время гибели.
Интенсивность судорожного припадка оценивали по 5-балльной системе: 0 баллов - отсутствие судорожных реакций, 1 - вздрагивания головы или отдельных мышц тела, 2 - отдельные повторные клонические вздрагивания всего тела, 3 - клонико-тонические
судороги умеренной выраженности; 4 - клонико-тонические судороги с падением животного на бок; 5 - серийные клонико-тонические судороги и смерть. Регистрировали отсутствие/наличие реакции Штрауба (ригидность хвоста у мышей, хвост запрокинут за спину
и изогнут в виде буквы "S"). Оценивали наличие/отсутствие атаксии у экспериментальных
животных: регистрировали расстройства координации движений (непроизвольные движения, неуверенная шатающаяся походка, затруднения при ходьбе). Отмечали отсутствие/наличие релаксации и сна на фоне введения образца; при возникновении бокового
положения у мышей отмечали латентное время наступления и его продолжительность
(время восстановления рефлекса переворачивания у животных), число животных, у которых
вещество в исследуемой дозе вызывает характерный симптом (сон). Кроме того, до введения и спустя 1 сутки после "острого" введения пролил-лейцина (5,0 мг/кг и 50,0 мг/кг) или
плацебо определяли массу тела мышей.
Регистрировали в актометре "Ugo Basile" (Италия) число движений, совершаемых животными в горизонтальной и вертикальной плоскостях - горизонтальную (ГДА) и вертикальную (ВДА) двигательную активность мышей. Исследования проводили через 30 мин
после однократного внутрибрюшинного введения плацебо или пролил-лейцина в дозе
5,0 мг/кг. Возможное влияние пролил-лейцина в вышеуказанных условиях на зоосоциальные взаимодействия оценивали, учитывая данные о двигательной активности мышей, помещаемых группой (по 10 животных одновременно) на 5 минут в камеры аппарата.
В актометре отечественного производства определяли показатели ГДА и ВДА на фоне
внутрибрюшинного введения плацебо или дипептида при высадке поодиночке на 24 часа
(после 4-х кратного введения в дозе 5,0 мг/кг) и при помещении поодиночке в камеру на
5 мин, 60 мин и 24 часа (после 1-кратного введения в дозе 50,0 мг/кг).
Эффекты 4-кратного (1 инъекция в сутки) внутрибрюшинного введения плацебо или
пролил-лейцина в дозе 5,0 мг/кг в отношении психоэмоционального статуса животных
изучали в тесте TST (Tail suspension test). Этот тест основан на оценке поведения животных в неизбегаемой ситуации. Снижение активности и увеличение времени неподвижности
по сравнению с контролем указывает на повышенную склонность к депрессии. Наблюдение за животными основной и контрольной групп продолжали на протяжении 6 минут. В
качестве базисного критерия, характеризующего психофизиологический статус животных,
использовали показатель "суммарная продолжительность активных попыток избавления".
9
BY 14062 C1 2011.02.28
Регистрировали отсутствие/наличие анальгезии после 4-кратного (1 инъекция в сутки)
внутрибрюшинного введения плацебо или пролил-лейцина в дозе 5,0 мг/кг. Болевую чувствительность оценивали в тесте отдергивания хвоста при нанесении теплового стимула
(Tail-flick) с использованием соответствующей аппаратуры фирмы Columbus, США. Животное не жестко фиксировали в прозрачном цилиндре так, чтобы хвост находился снаружи между сфокусированным лучом яркого света и фотодатчиком. Измеряли время до
отдергивания хвоста, используя автоматическую оценку латентного периода (ЛП) отдергивания. Увеличение ЛП отдергивания хвоста является свидетельством уменьшения болевой чувствительности.
Установлено, что разовое введение пролил-лейцина в дозе, 10-кратно превосходящей
терапевтическую, не вызывает гибели белых нелинейных мышей-самцов, не нарушает
общего состояния и не способствует возникновению изменений массы тела, не отражается
на показателях двигательной активности за 5 минут, не влияет на поведенческие реакции
при зоосоциальных взаимодействиях (в условиях групповой актометрии) (табл. 5, 9-12).
"Подострое" 4-кратное введение дипептида в той же дозе не приводит к гибели животных,
не влияет на ГДА и ВДА за 24 часа, не вызывает депрессивно-подобных реакций в Tail
suspension test и не изменяет порога болевой чувствительности у мышей в тесте Tail-flick
(табл. 5, 9-12). Однократное внутрибрюшинное введение пролил-лейцина в дозе, 100кратно превосходящей терапевтическую дозу, не вызывает гибели животных, не влияет на
массу тела, не приводит к существенному изменению двигательной активности за 5 минут, 60 минут и за 24 часа, не влечет за собой патологических изменений в общем состоянии мышей (табл. 6, 9-12). Статистически достоверных различий между группами
сравнения ни по одному из названных критериев не обнаружено, что свидетельствует о
хорошей переносимости пролил-лейцина, вводимого в дозах, 10-кратно и 100-кратно превосходящих терапевтическую.
Таблица 5
Влияние внутрибрюшинного введения пролил-лейцина в дозе,
10-кратно превосходящей терапевтическую (5,0 мг/кг),
на массу тела, двигательную активность, психоэмоциональный статус
и болевую чувствительность половозрелых нелинейных мышей-самцов
Показатель
Плацебо
Пролил-лейцин
Однократное введение
Масса тела
До введения
30,8±0,59
30,6±0,81
Через 1 сутки после
29,3±0,65
29,4±0,63
введения
(N = 20)
(N = 30)
Двигательная активность за 5 минут*
ГДА
1865,8±330,37
1847,3±284,97
ВДА
437,2±107,30
514,3±77,76
(N = 6)
(N = 3)
4-кратное введение
Двигательная активность за 24 часа**
ГДА
23713±2085,8
25658±2187,6
ВДА
3621±773,5
4256,4±774,2
(N = 6)
(N = 5)
Психоэмоциональный статус продол211614,9±17226,97
217601,3±15651,17
жительность активных попыток избав(N = 18)
(N = 9)
ления в Tail Suspension Test (мс)
Болевая реакция в Tail-flick ЛП отдер4,2±0,57
4,2±0,76
гивания хвоста, с
(N = 20)
(N = 10)
Примечания:
1 - * - актометрия у группы мышей
10
BY 14062 C1 2011.02.28
2 - ** - актометрия у одиночных мышей
Таблица 6
Влияние внутрибрюшинного введения пролил-лейцина в дозе,
100-кратно превосходящей терапевтическую (50,0 мг/кг), на массу тела
и двигательную активность половозрелых нелинейных мышей-самцов
Показатель
Масса тела
До введения
Через 1 сутки после введения
Двигательная активность
за 5 минут
ГДА
ВДА
Двигательная активность
за 60 минут
ГДА
ВДА
Двигательная активность
за 24 часа
ГДА
ВДА
Плацебо
Пролил-лейцин
18,4±0,35
20,9±0,39
(N = 4)
18,4±0,23
21,3±0,53
(N = 5)
250,9±58,2
27,5±10,8
(N = 4)
172,0±74,3
23,4±8,6
(N = 5)
1595,3±489,6
200,2±95,9
(N = 4)
1208,3±332,8
186,8±60,5
(N = 5)
22506,2±18496,9
3009,8±1533,2
(N = 4)
18385,8±6097,7 2857,4±947,1
(N = 5)
Необходимо отметить, что системное введение крысам действующего вещества прототипа (dl - метилфенидата) в дозах, которые 64-кратно (оральное введение) [31] и 9 кратно (внутривенное введение) [31] превышают терапевтическую дозу (ED50 - 5,45 мг/кг
[30]), вызывает выраженные побочные эффекты и гибель 50 % особей, включенных в эксперимент (LD50 равна 350 мг/кг при оральном и 50 мг/кг - при внутривенном введении)
[31]. Из приведенных экспериментальных данных следует, что системное применение
пролил-лейцина в дозе, 100-кратно превышающей терапевтическую дозу, не вызывает гибели и проявлений токсического действия у лабораторных мышей. Для метилфенидата во
всех лекарственных формах, обеспечивающих его присутствие в кровотоке (в том числе
для прототипа), характерны такие побочные эффекты, как бессонница или сонливость, неконтролируемые движения, судорожные сокращения мышц, возбужденность, тревога [16,
17, 31]. Введение пролил-лейцина не вызывает подобных реакций. Полученные данные
подтверждают преимущество пролил-лейцина по отношению к прототипу по критерию
токсичности и частоты обнаружения побочных эффектов.
Пример 7.
Изучено влияние субхронического внутрибрюшинного введения пролил-лейцина (19
и 26 инъекций, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю) в терапевтической дозе (0,5 мг/кг)
на поведение неполовозрелых крыс-самцов линии SHR. Оценка потенциального токсического действия дипептида проведена в батарее тестов согласно вышеприведенным критериям оценки на протяжении 1 суток после применения (пример 6).
Установлено, что субхроническое внутрибрюшинное введение пролил-лейцина не вызывает ухудшения общего состояния и гибели животных (табл. 9-12).
11
BY 14062 C1 2011.02.28
Пример 8.
Возможность возникновения абстинентного синдрома на фоне пролил-лейцина оценивали в условиях "острой" отмены после его субхронического введения неполовозрелым
крысам-самцам линии SHR в терапевтической дозе (0,5 мг/кг, 1 инъекция в сутки, 5-7
дней в неделю).
Общепринятым тестом, позволяющим оценить возникновение абстинентного синдрома, является "реакция вздрагивания". Неполовозрелым крысам-самцам линии SHR основной и контрольной групп спустя 1 сутки после 19-го введения пролил-лейцина или
плацебо предъявляли 5 громких звуковых стимулов с интервалом 18 с в момент, когда
животные всеми 4-мя лапами стояли на полу. Параметры звука: частота - 10 кГц, интенсивность 110 децибел, длительность звукового стимула - 200 мс, время нарастания импульса - 50 мс. Реакцию оценивали в баллах: 0 баллов - видимое отсутствие реакции, 1замирание, 2-вздрагивание, 3 - прыжок. Усиление "реакции вздрагивания" является компонентом синдрома отмены, который наиболее выражен в первые - вторые сутки после
прекращения введения испытуемого вещества. Показано, что отмена пролил-лейцина не
вызывает усиления указанной реакции. Средние значения оценки этого критерия статистически значимо не отличаются в группах сравнения, при этом в основной группе она
даже ниже, чем в контроле (1,6±0,14 баллов и 1,73±0,12 баллов соответственно). Ни у одной из 12-ти крыс основной группы и 12-ти особей контрольной группы не отмечено реакции, оцениваемой 3-мя баллами.
Другим общепринятым тестом, с помощью которого определяют возможность развития абстинентного синдрома после отмены тестируемого вещества, является тест Tailflick. Латентный период отдергивания хвоста (см. пример 6) у неполовозрелых крыссамцов линии SHR определяли спустя 2 суток после 16-го введения плацебо или пролиллейцина (0,5 мг/кг, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю). Абстинентный синдром,
наиболее выраженный в первые-вторые сутки лишения применявшегося вещества, характеризуется резко выраженным увеличением болевой чувствительности, которая, как правило, превышает таковую у интактных животных. Отмена пролил-лейцина после 16кратного введения не приводит к снижению латентного периода отдергивания хвоста, что
свидетельствует об отсутствии абстиненции (табл. 7).
Таблица 7
Болевая чувствительность неполовозрелых крыс-самцов линии SHR на фоне отмены пролил-лейцина после его внутрибрюшинного субхронического (16-кратного)
введения в терапевтической дозе (0,5 мг/кг)
Показатель
Болевая реакция в Tail-flick
ЛП отдергивания хвоста, с
Без введения
Плацебо
2-е сутки после 16-го введения
5,4±0,24
(n = 12)
4,6±0,45
(n = 12)
Пролил-лейцин
5,2±0,62
(n = 12)
У неполовозрелых крыс-самцов линии SHR исходно и спустя 1 сутки после 19-го введения пролил-лейцина (0,5 мг/кг, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю) или плацебо
определяли массу тела. Средние значения прироста массы тела в основной группе составили 86,6 г, в контрольной группе - 83,7 г. Статистически достоверных различий между
группами ни на одном из этапов эксперимента не обнаружено, что свидетельствует о хорошей переносимости введения и отмены пролил-лейцина.
Таким образом, в отличие от метилфенидата, пролил-лейцин не вызывает абстинентного синдрома, что является его преимуществом по отношению к прототипу.
12
BY 14062 C1 2011.02.28
Пример 9.
Способ получения инъекционной лекарственной формы в виде раствора для инфузий,
содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
Берут:
пролил-лейцин
0,03 г
D-маннит
5,0 г
вода для инъекций
до 100 мл.
Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха, водоподготовку;
подготовку флаконов или пластиковых пакетов к наполнению. Подготавливают пролиллейцин и наполнитель (маннит); взвешивают основное и вспомогательное вещества. Раствор для инфузий получают путем растворения пролил-лейцина и маннита в воде для инъекций. Полученный раствор фильтруют, проводят розлив во флаконы или пластиковые
пакеты, укупоривают или запаивают, стерилизуют. Готовую продукцию маркируют и
упаковывают.
Пример 10.
Способ получения инъекционной лекарственной формы в виде раствора для инъекций
(с использованием в качестве растворителя воды для инъекций), содержащей в качестве
основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
Берут:
пролил-лейцин
0,005 г
D-маннит
0,05 г
вода для инъекций
до 5 мл.
Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха, водоподготовку;
моют и стерилизуют ампулы. Подготавливают пролил-лейцин и наполнитель (маннит);
взвешивают основное и вспомогательное вещества. Раствор для инъекций получают путем растворения пролил-лейцина и вспомогательного вещества в воде для инъекций. Полученный раствор фильтруют, ампулируют, стерилизуют. Готовую продукцию маркируют
и упаковывают.
Пример 11.
Способ получения инъекционной лекарственной формы в виде раствора для инъекций, содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
Берут:
пролил-лейцин
0,005 г
масло оливковое
до 2 мл.
Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха; подготовку ампул к
наполнению. Растительное масло подвергают стерилизации при 120 °С в течение 120 минут. Подготавливают пролил-лейцин, взвешивают, растворяют его в полуохлажденном
(40-45 °С) масле. Полученный раствор ампулируют, стерилизуют. Готовую продукцию
маркируют и упаковывают.
Пример 12.
Способ получения сублимационно высушенной инъекционной лекарственной формы
(для приготовления раствора для инъекций), содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
13
BY 14062 C1 2011.02.28
Берут:
пролил-лейцин
0,005 г
D-маннит
0,08 г.
Порошок лиофилизированный для приготовления раствора для инъекций готовят
следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха.
Получают воду для инъекций, проводят мойку и стерилизацию ампул или флаконов. Подготавливают пролил-лейцин и наполнитель (маннит); взвешивают основное и вспомогательное вещества. Растворяют пролил-лейцин и маннит в необходимом количестве воды для
инъекций, проводят стерильную фильтрацию. Наполняют ампулы или флаконы полученным раствором, замораживают, проводят сублимацию. Осуществляют запайку ампул или
укупорку флаконов с готовой продукцией, маркировку, упаковку. Раствор для инъекций
готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (5 мл воды для инъекций).
Пример 13.
Способ получения сублимационно высушенной инъекционной лекарственной формы
(для приготовления раствора для инфузий), содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
Берут:
пролил-лейцин
0,03 г
D-маннит
5,0 г.
Порошок лиофилизированный для приготовления раствора для инфузий получают
следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха.
Получают воду для инъекций, проводят мойку и стерилизацию флаконов. Подготавливают пролил-лейцин и наполнитель (маннит); взвешивают основное и вспомогательное вещества. Растворяют пролил-лейцин и маннит в необходимом количестве воды для
инъекций, проводят стерильную фильтрацию. Наполняют ампулы или флаконы полученным раствором, замораживают, проводят сублимацию. Осуществляют запайку ампул или
укупорку флаконов с готовой продукцией, маркировку, упаковку. Раствор для инфузий
готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (100 мл воды для инъекций).
Пример 14.
Способ получения инъекционной лекарственной формы в виде порошка (сухая стерильная рассыпка) для приготовления раствора для инъекций, содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
Берут:
пролил-лейцин
0,005 г
D-маннит
0,05 г.
Порошок для приготовления раствора для инъекций ("стерильная рассыпка") получают следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха; подготовку флаконов к наполнению. Подготавливают пролил-лейцин и наполнитель
(маннит); взвешивают основное и вспомогательное вещества. Помещают во флаконы пролил-лейцин и маннит с соблюдением требований стерильности. Проводят укупорку флаконов с готовой продукцией, маркировку, упаковку. Раствор для инъекций готовят
непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (5 мл воды для инъекций).
Пример 15.
Способ получения инъекционной лекарственной формы в виде порошка (сухая стерильная рассыпка) для приготовления раствора для инфузий, содержащей в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в терапевтически эффективном количестве.
14
BY 14062 C1 2011.02.28
Берут:
пролил-лейцин
0,03 г
D-маннит
5,0 г.
Порошок для приготовления раствора для инфузий ("стерильная рассыпка") получают
следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха;
мойку и стерилизацию флаконов. Подготавливают пролил-лейцин и наполнитель (маннит); взвешивают основное и вспомогательное вещества. Помещают во флаконы пролиллейцин и маннит с соблюдением требований стерильности. Проводят укупорку флаконов
с готовой продукцией, маркировку, упаковку. Раствор для инфузий готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в
упаковке (100 мл воды для инъекций).
В фармацевтической композиции наиболее предпочтительная доза пролил-лейцина
варьирует в пределах 0,005-0,03 г, что соответствует испытанной в экспериментах на животных в дозе 0,5 мг/кг.
Приведенные выше результаты исследований показывают, что применение пролиллейцина успешно корректирует поведенческие реакции как неполовозрелых, так и взрослых крыс-самцов линии SHR (модель СДВГ). С учетом этого пролил-лейцин может быть
эффективен при лечении млекопитающих разных возрастных групп. В опытах на животных дипептид статистически достоверно предотвращает развитие нарушений неассоциативного обучения, обусловленных дефицитом внимания, кроме того снижает уровень
гиперактивности. Исходя из этого, пролил-лейцин может быть рекомендован для применения пациентам всех перечисленных возрастных категорий, у которых преобладает компонент невнимания и сниженной способности к обучению, либо ведущим является
компонент гиперактивности/импульсивности, либо имеет место комбинированный синдром дефицита внимания/гиперактивности.
При введении лабораторным животным в дозах, 10-кратно и 100-кратно превосходящих терапевтическую, а также при субхроническом введении в терапевической дозе у
действующего вещества заявляемой композиции не выявлено побочных эффектов и синдрома отмены, что выгодно отличает его от прототипа (метилфенидата в виде таблеток
замедленного высвобождения для приема внутрь). Исходя из этого, применение фармацевтической композиции, содержащей пролил-лейцин, наряду с эффективностью, обеспечит
большую безопасность, лучшую переносимость и приверженность лечению (комплаентность), а также более высокое качество жизни пациента в период терапии вышеуказанных
заболеваний, по сравнению с прототипом (метилфенидатом в виде таблеток замедленного
высвобождения для приема внутрь) и другими средствами лечения СДВГ (в т.ч. имипрамином, дезипрамином, нортриптилином, амитриптилином, кломипрамином).
Показанием для применения фармацевтической композиции, содержащей пролиллейцин, является синдром дефицита внимания/гиперактивности (любой из трех подтипов)
у млекопитающих (включая человека) разных возрастных групп, проявляющийся избыточной двигательной активностью, импульсивностью поведения, дефектом концентрации
внимания, отвлекаемостью. Инъекционную лекарственную форму, содержащую пролиллейцин в дозах 0,0005-0,05 г, применяют 1-3 раза в сутки в течение одной - трех недель.
Фармацевтическая композиция, содержащая пролил-лейцин, может использоваться в
тех же дозах, при том же режиме введения для лечения иных расстройств, сопровождающихся нарушениями неассоциативного обучения. К таким расстройствам отнесены шизофрения [23, 24], депрессии [25], тревожные и панические состояния [25, 26], а также
последствия снижения направленного внимания [27], вызванного старением, черепномозговой травмой, интоксикациями, стрессорными воздействиями, гипогликемией, ишемией, дыхательной гипоксией.
15
BY 14062 C1 2011.02.28
Известно, что дипептиды характеризуются высокой устойчивостью к действию ферментов, в том числе щеточной каймы энтероцитов кишечника [32]. Исходя из этого, пролил-лейцин может быть эффективен не только при парентеральном введении, но и при
приеме внутрь в виде таблеток (в т.ч. таблеток, покрытых оболочкой, "шипучих" таблеток,
растворимых таблеток, диспергируемых в полости рта таблеток, кишечнорастворимых
таблеток, таблеток для применения в полости рта), капсул (мягких и твердых, кишечнорастворимых, капсул с модифицированным высвобождением, облаток), порошков для
орального применения, в т.ч. "шипучих" порошков, порошков для приготовления раствора
для приема внутрь, оральных растворов, эмульсий и суспензий; порошков для приготовления оральных растворов и суспензий, оральных капель, порошков для приготовления
оральных капель, сиропов, порошков и гранул для приготовления сиропов, гранул для
приготовления оральных растворов (в т.ч. "шипучих" гранул, покрытых оболочкой гранул, кишечнорастворимых гранул и гранул с модифицированным высвобождением, гранул для приготовления сиропа), жевательных лекарственных резинок, капель для приема
внутрь, концентрата для приготовления раствора для приема внутрь, суспензии для приема внутрь и других лекарственных форм, описанных в Государственной Фармакопее Республики Беларусь [33]. При этом фармацевтическая композиция, помимо основного
действующего вещества (пролил-лейцина в количестве 0,0005-0,5 г, предпочтительно
0,005-0,03 г), может включать вспомогательные вещества (поливинилпирролидон, натрия
карбоксиметилцеллюлозу, натрия карбонат, аэросил, крахмал, желатин, целлюлозу микрокристаллическую, метилцеллюлозу, стеариновую кислоту или ее соли, магния карбонат
основной, магния оксид, титана двуокись, тальк, натрия хлорид, глюкозу, лактозу, сахарозу, сорбит, маннит, глицерин, молочную кислоту, лимонную кислоту, ментол, масло вазелиновое, церулезум, шеллак, воск белый, масло гвоздичное, масло мятное, стабилизаторы,
водо- и жирорастворимые антиоксиданты, антимикробные консерванты, нипагин, нипазол, буферы, красители, другие вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому
применению). Способы, которые применяются для получения таких композиций, хорошо
известны квалифицированным специалистам и могут применяться для приготовления
этих лекарственных форм.
Основываясь на имеющихся данных, для лечения вышеназванных расстройств могут
применяться и другие пролилдипептиды, содержащие в своей структуре остаток природной аминокислоты пролина совместно с остатком второй аминокислоты. Учитывая, что
дипептиды на основе D-производных аминокислот обладают биологической активностью,
в том числе улучшают неассоциативное обучение [34], возможно применение для лечения
СДВГ фармацевтической композиции, содержащей в качестве основного вещества пролилдипептиды, состоящие из остатка пролина и второй аминокислоты как в форме L-, так
и D- стереоизомеров. Способ лечения такой композицией, ее состав и способы получения
могут быть аналогичны таковым для композиции на основе пролил-лейцина.
Таблица 8
Изменения массы тела неполовозрелых крыс-самцов линии SHR на фоне отмены
пролил-лейцина после его внутрибрюшинного субхронического (19-кратного) введения в терапевтической дозе (0,5 мг/кг)
Показатель
Масса тела
До введения
1 сутки после отмены
Плацебо
Пролил-лейцин
70,8±2,68
154,5±3,98
(N = 12)
72,2±3,89
158,8±4,66
(N = 12)
16
BY 14062 C1 2011.02.28
Таблица 9
Результаты оценки возможного токсического действия пролил-лейцина
после внутрибрюшинного введения в дозах 0,5 мг/кг, 5,0 мг/кг и 50,0 мг/кг
по показателям "гибель", "изменения состояния шерстного покрова", "диарея",
"нарушение реакции на тактильные раздражители" в эксперименте
на половозрелых нелинейных мышах-самцах
и на неполовозрелых крысах-самцах линии SHR
Диарея
(баллы)
Нарушение
реакции на
тактильные
раздражители (баллы)
Нелинейные мыши-самцы
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/4
0/4
0,0±0,0
Неполовозрелые крысы линии SHR
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
Гибель
Гибель
Группа/сроки
во 2-е - 14-е
в 1-е сутки
оценки, доза (мг/кг)
сутки
наблюдения
наблюдения
Исходно
После 1 введения
пролил-лейцина, 0,5
Исходно
После 1 введения
пролил-лейцина, 5,0
Исходно
После 1 введения
пролил-лейцина,
50,0
Исходно
После 1 введения
плацебо
Исходно
После введения
пролил-лейцина, 0,5
19 введений
26 введений
1 сутки после
отмены пролиллейцина, 0,5,
19 введений
Исходно
После введения
плацебо,
19 введений
26 введений
1 сутки после отмены плацебо,
19 введений
-
0/12
0/12
0/12
0/12
-
0/12
17
Изменения
шерстного
покрова
(баллы)
BY 14062 C1 2011.02.28
Таблица 10
Результаты оценки возможного токсического действия пролил-лейцина после
внутрибрюшинного введения в дозах 0,5 мг/кг, 5,0 мг/кг и 50,0 мг/кг по показателям
"экзофтальм", "птоз век", "стереотипия", "тремор", "реакция Штраубе",
"одышка" в эксперименте на половозрелых нелинейных мышах - самцах
и на неполовозрелых крысах-самцах линии SHR
Стереотипия
Тремор
Одышка
Число
ВыраГруппа/сроки ЭкзоПтоз
Число
Выра- Реакция
особей
женоценки, доза фтальм
век
особей женность Штраусо стеность
(мг/кг)
(баллы) (баллы)
с тре- реакции ба (балреотипи- реакции
мором (баллы)
лы)
ей
(баллы)
Число Выраосоженбей с ность
одыш реакции
кой (баллы)
0,0±0,0 0,0±0,0
Нелинейные мыши-самцы
0/10
0,0±0,0 0/10 0,0±0,0
0/10
0/10 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
0/10 0,0±0,0
0/10 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
0/10 0,0±0,0
0/5 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/4
0,0±0,0
0/4
0,0±0,0
Неполовозрелые крысы линии SHR
0,0±0,0 0,0±0,0 0/12
0,0±0,0 0/12 0,0±0,0
0/4
0/4
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0,0±0,0 0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
1 сутки после
отмены плацебо,
19 введений 0,0±0,0 0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
Исходно
После 1 введения пролиллейцина, 0,5
Исходно
После 1 введения пролил-лейцина,
5,0
Исходно
После 1 введения пролиллейцина, 50,0
Исходно
После 1 введения плацебо
Исходно
После введения пролиллейцина, 0,5,
19 введений
26 введений
1 сутки после
отмены пролил-лейцина,
0,5
19 введений
Исходно
После введения плацебо,
19 введений
26 введений
18
BY 14062 C1 2011.02.28
Таблица 11
Результаты оценки возможного токсического действия пролил-лейцина
после внутрибрюшинного введения в дозах 0,5 мг/кг, 5,0 мг/кг и 50,0 мг/кг
по показателям "слюнотечение", "гипотермия", "судороги" в эксперименте
на половозрелых нелинейных мышах - самцах
и на неполовозрелых крысах линии SHR
Слюнотечение
Гипотермия
Судороги
Число ВыраВыраЛП иммобилизаГруппа/сроки
Число
Число
особей женженции, ЛП первой
оценки, доза
особей с
особей
Интенсивность
со слю- ность
ность
судорожной реак(мг/кг)
гипос судосудорог
нотече- реакции
реакции
ции, число судотермией
рогами
нием (баллы)
(баллы)
рог, ЛП гибели
Исходно
0/10
Нелинейные мыши-самцы
0,0±0,0 0/10 0,0±0,0 0/10
После 1 введения пролиллейцина, 0,5
Исходно
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
После 1 введения пролиллейцина, 5,0
Исходно
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
После 1 введения пролиллейцина, 50,0
Исходно
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
После 1 введения плацебо
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
не определены
ввиду отсутствия судорог
Исходно
0/12
После введения пролиллейцина, 0,5,
19 введений
26 введений
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0,0±0,0
0/4
0,0±0,0
0/4
Неполовозрелые крысы линии SHR
0,0±0,0 0/12 0,0±0,0 0/12
0/12
0/12
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
1 сутки после
отмены пролиллейцина, 0,5,
19 введений
Исходно
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
После введения плацебо,
19 введений
26 введений
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
1 сутки после
отмены плацебо,
19 введений
0/12
0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
19
не определены
ввиду отсутствия судорог
0,0±0,0
0,0±0,0
BY 14062 C1 2011.02.28
Таблица 12
Результаты оценки возможного токсического действия пролил-лейцина
после внутрибрюшинного введения в дозах 0,5 мг/кг, 5,0 мг/кг и 50,0 мг/кг
по показателям "атаксия", "релаксация", "сон" в эксперименте на половозрелых
нелинейных мышах - самцах и на неполовозрелых крысах линии SHR
Группа/сроки
оценки, доза
(мг/кг)
Атаксия
Релаксация
Сон
ВыраЧисло
ЛП
Число
ВыраженЧисло
Продолжиженность особей с
наступособей с
ность реак- уснувших
тельность
реакции релаксаления
атаксией
ции (баллы) особей
сна (сек)
(баллы)
цией
сна (сек)
0/10
Нелинейные мыши-самцы
0,0±0,0
0/10
0,0±0,0
Исходно
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/10
0,0±0,0
0,0±0,0
После 1 введения пролиллейцина, 5,0
Исходно
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
0/10
0/5
0,0±0,0
0,0±0,0
После 1 введения пролиллейцина, 50,0
Исходно
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
0/5
0/4
0,0±0,0
0,0±0,0
После 1 введения плацебо
0/4
Исходно
0/12
0,0±0,0
0/4
0,0±0,0
Неполовозрелые крысы линии SHR
0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
После введения
пролил-лейцина,
0,5,
19 введений
26 введений
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
1 сутки после
отмены пролиллейцина, 0,5,
19 введений
Исходно
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
После введения
плацебо,
19 введений
26 введений
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
0/12
0/12
0,0±0,0
0,0±0,0
1 сутки после
отмены плацебо,
19 введений
0/12
0,0±0,0
0/12
0,0±0,0
Исходно
После 1 введения
пролил-лейцина,
0,5
20
не определены
ввиду отсутствия сна
не определены
ввиду отсутствия сна
BY 14062 C1 2011.02.28
Источники информации:
1. Пятницкая И.В. Социально-семейный аспект гиперкинетического расстройства с
дефицитом внимания (СДВГ): Сб. мат. YI международн. конф. "Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы". - Минск, 2008. - С. 75-77.
2. Крупская Е.В., Мачинская Р.И. Высшая нервная деятельность. - 2006. - Т. 56. - № 6.
- С. 731-741.
3. Патент RU 2163802 С2, МПК7 A 61K 31/135, 1996.
4. Клуша В.Е. Пептиды - регуляторы функций мозга. - Рига: Зинатне, 1984. - С. 129-141.
5. Папсуевич О.С. и др. Нейрогипофизарные гормоны. - Рига: Зинатне, 1986. - С. 91-108.
6. Ostrovskaya, R.U. et al. GVS-111 an acyl-prolyl-conraining dipeptide with nootropic
properties. Gold Ring Conference. II Int. conf. Biological Basis of Individual sensitivity to
Psychotropic drugs Graffham Press Ltd. 6, York Place-Edinbourgh, UK. - 1993. - P. 79-91.
7. Островская, Р.У. и др. Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2005. Т. 68. - № 1. - С. 3-6.
8. Патент RU 2119496 С1, МПК6 C 07K 5/078, С 07 D 207/16, A 61K 38/05.
9. Патент RU 2 289 422 С2, МПК A 61K 38/05, A 61K 31/401, А61K 9/20, A 61P 21/28,
2006.
10. Заявка на изобретение RU 2005 138 344 А, МПК A 61K 31/00, 2007.
11. Sagvolden Т. Neurosci. Biobehav. Rev. - 2000. - V. 24. - P. 31-39.
12. Hendley, E. et al. Physiology and Behavior. - 1985. - V. 34. - P. 379-383.
13. Wei J.W. et al. / Int. J. Biochem. - 1987. - V. 19. - P. 1225-1228.
14. Konrad K. et al. J. Am. Acad. Child Adolesc. Psychiatry. - 2004. - V. 43. - No. 2. P. 191-198.
15. Патент RU 2233156 C2, МПК7 A61K 9/70, 31/435, A 61P 25/00, 1998.
16. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х томах. T. 1. - 10-е изд.стер. М.: Медицина, 1986. - С. 92, 110-112.
17. Concerta. Extended-release tablets / Methylphenidate HCl ADHD Medication - Detailed
Information.
18. Чутко Л.С. и др. / Под ред. А.А.Скоромца, М.М.Дьяконова. - Спб.: Наука, 2006. С. 43-49.
19. Kovacs G.L. et al. Neuropharmacology, 1985. - V. 24. - No. 5. - P. 413-419.
20. Kovacs G.L. et al. Pharmacol. Biochem. Behav, 1984. - V. 21. - No. 3. - P. 345-348.
21. WolraichM.L. et al. Pediatrics.-2001. - Vol. 108. - No. 4. - P. 883-892.
22. Fedorova I. et al. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. - 2006. - V. 75. No. 4-5. - P. 271-289.
23. Bespalov A. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2007. - V. 320. - No. 2. - P. 944-950.
24. Ludewig K. et al. Biol. Psychiatry. - 2003. - V. 54. - P. 121-128.
25. Гордеев C.A. Журнал высшей нервной деятельности. - 2007. - Т. 57. - № 2. С. 161-168.
26. Савостьянов А.Н., Савостьянова Д.А. ЖВНД. - 2003. - Т. 53. - № 3. - С. 351-360.
27. Klamer D. et al. Psychopharmacology (Berl). - 2004. - V. 176. - P. 440-450.
28. Vōikar V. et al. Genes, Brain and Behavior. - 2005. - V. 4. - P. 240-252.
29. Кравченко Е.В. и др. Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1996. - Т. 122. - № 7. - С. 48-50.
30. Davids E. et al. Psychopharmacologia. - 2002. - Vol. 160. - No. 1. - P. 92-98.
21
BY 14062 C1 2011.02.28
31. Национальный Интернет-портал Республики Беларусь [Электронный ресурс] /
Нац. центр правовой информ. Респ. Беларусь. - Минск, 2008. Sigma-Aldrich. Material Safety
Data Sheet. Methylphenidate Hydrochloride. Date updated 04.10.2004. Version 1.4. - Режим доступа:
http://www.conncoll.edu/offices/envhealth/MSDS/neuroscience/Methylphenidate-HydrochlorideDEA-Schedule-II-rtem.pdf: - Дата доступа: 17.04.2008.
32. Fricker G., Drewe J. J. Pept. Sci. 1996. - Vol. 2. - No. 4. - P. 195-211.
33. Государственная Фармакопея Республики Беларусь (1 издание) / Под ред.
Г.В.Годовальников, А.А.Шеряков. - Минск, 2006.
34. Островская Р.У., Гудашева Т.А. Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1991.-№ 5. С. 498-500.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
22
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
272 Кб
Теги
by14062, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа