close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14267

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.04.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12Q 1/02
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЯ
ТОКСИЧНОСТИ LD50 ХИМИЧЕСКОГО ВЕЩЕСТВА
(21) Номер заявки: a 20070864
(22) 2007.07.10
(43) 2009.02.28
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Дудчик Наталья Владимировна; Соколов Сергей Михайлович;
Мельникова Людмила Александровна; Котеленец Антонина Ивановна
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение
"Республиканский
научно-практический центр гигиены" (BY)
BY 14267 C1 2011.04.30
BY (11) 14267
(13) C1
(19)
(56) ДУДЧИК Н.В. и др. Проблемы общественного здоровья и здравоохранения
Республики Беларусь: Материалы Республиканской научно-практической конференции. - Минск, 2005. - С.330-332.
SU 1686376 А1, 1991.
Определение токсичности химических
соединений, полимеров, материалов и
изделий с помощью люминесцентного
бактериального теста: Методические рекомендации. - Москва, 2000. - С. 13-16.
Альтернативные методы исследований
(экспресс-методы) для токсикологогигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей среды. Москва, 1999. - С.34-35.
ХОЛОДЕНКО В.П. и др. // Российский
химический журнал. - 2001. - Т. XLV. № 5-6. - С. 135-141.
(57)
Способ определения показателя токсичности LD50 химического вещества, отличающийся тем, что регистрируют импедиметрически время детекции DT тест-штамма бактерий Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 или Streptomyces griseoviridis БКР В-264, который
культивируют в питательной среде, не содержащей химическое вещество, и в среде, содержащей химическое вещество в нескольких концентрациях, при этом показатель токсичности LD50 определяют как такую концентрацию химического вещества, которая
увеличивает DT тест-штамма в 1,5 раза по сравнению с его DT в отсутствие химического
вещества.
Изобретение относится к разделу токсикологии и санитарной микробиологии.
Известен способ оценки токсичности химических веществ с использованием простейших Tetrahymena, заключающийся в том, что осуществляют подсчет числа клеток под
микроскопом в среде, не содержащей испытуемое химическое вещество, и в среде, содержащей испытуемое химическое вещество, и определяют показатель LD50 [1].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Однако способ-прототип обладает низкой чувствительностью, в связи с чем требуется длительное, до
96 часов, время проведения испытаний. Кроме того, тест-культура Tetrahymena обладает
разной чувствительностью к химическим веществам, при этом некоторые из веществ не
оказывают влияния на тест-культуру.
BY 14267 C1 2011.04.30
Общим признаком для заявляемого способа и прототипа является то, что осуществляют параллельное внесение в разных концентрациях в питательную среду, содержащую
ранее определенную концентрацию тест-культуры, химических веществ и их смесей и проводят их совместное культивирование с последующей обработкой полученных данных.
Задачей заявленного изобретения является разработка способа оценки токсичности
химических веществ и их смесей, позволяющего повысить чувствительность, сократить
время тестирования и увеличить число тест-культур для оценки токсичности широкого
круга химических веществ.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Предложен способ определения показателя токсичности LD50 химического вещества
путем регистрации импедиметрически времени детекции DT тест-штамма бактерий Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 или Streptomyces griseoviridis БКР В-264, который культивируют в питательной среде, не содержащей химическое вещество, и в среде,
содержащей химическое вещество в нескольких концентрациях, при этом показатель токсичности LD50 определяют как такую концентрацию химического веществ, которая увеличивает DT тест-штамма в 1,5 раза по сравнению с его DT в отсутствие химического
вещества.
Такой прием позволяет повысить чувствительность способа за счет того, что осуществляется импедиметрическая регистрация электрохимических изменений питательной
среды, а это позволяет провести детекцию роста тест-культуры в течение 2-10 часов, а
также увеличить число тест-культур для анализа.
Пример выполнения
Требуется определить LD50 для химических веществ 1 и 2.
В качестве тест-культур используют Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 и Streptomyces griseoviridis БКР В-264 из Национальной коллекции непатогенных микроорганизмов
(научная коллекция типовых и промышленно-ценных микроорганизмов) Института микробиологии НАН Беларуси.
В качестве питательной среды для Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 при проведении исследования используют среду следующего состава (на 1000,0 мл дистиллированной
воды):
1 Пептон
10,0 г
2 Дрожжевой экстракт
5,0 г
3 Глюкоза
10,0 г
4 NaCl
5,0 г
pH 7,2-7,4.
Стерилизация 121 °С в течение 20 мин.
В качестве питательной среды для Streptomyces griseoviridis БКР В-264 при проведении исследования используют овсяный агар.
Для приготовления рабочих культур тест-штаммы культивируют на соответствующих
питательных средах в термостате при (28±2) °С в течение 48 ч. Содержание клеток тестштаммов в инокуляте доводят до 104 КОЕ/мл, что является оптимальным для исследования. Подтверждение содержания клеток в рабочей культуре проводят путем высева на питательные агаризованные среды.
Приготовленные среды инокулируют тест-штаммами Rhodococcus rhodochrous БИМ
В-95 и Streptomyces griseoviridis БКР В-264, разливают в ячейки анализатора, вносят исследуемые вещества в последовательно увеличивающихся концентрациях и инкубируют в
термоинкубаторе при 28 °С в течение 10-12 часов.
Получены следующие результаты.
Время детекции роста тест-культуры DT (без исследуемых веществ) составляет: для
Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 2,2 часа, для Streptomyces griseoviridis БКР В-264
6,0 часа.
2
BY 14267 C1 2011.04.30
Для вещества 1 в последовательно увеличивающихся концентрациях время детекции
составляет:
Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95
Streptomyces griseoviridis БКР В-264
Концентрация 0,01 % - 2,2 часа
Концентрация 0,01 % - 6,2 часа
Концентрация 0,02 % - 2, 8 часа
Концентрация 0,02 % - 7,8 часа
Концентрация 0,03 % - 3,3 часа
Концентрация 0,03 % - 9,0 часа
Концентрация 0,04 % - 4,1 часа.
Концентрация 0,04 % - 11,1 часа.
Таким образом, при внесении в среду вещества 1 в концентрации 0,03 % время детекции тест-культуры Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 возросло с 2,2 часа до 3,3 часа, а
тест-культуры Streptomyces griseoviridis БКР В-264 возросло с 6,0 до 9,0 часа, т.е. увеличилось на 50 %. Поэтому LD50 для вещества 1 составляет 0,03 %.
Для вещества 2 в последовательно увеличивающихся концентрациях время детекции
составляет:
Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95
Streptomyces griseoviridis БКР В-264
Концентрация 0,1 % - 2,2 часа
Концентрация 0,1 % - 6,2 часа
Концентрация 1 % - 2,2 часа
Концентрация 1 % - 7,8 часа
Концентрация 10 % - 2,2 часа
Концентрация 10 % - 9,0 часа
Таким образом, при внесении в среду вещества 2 в концентрации 0,1-10 % время детекции тест-культуры Rhodococcus rhodochrous БИМ В-95 не изменялось, т.к. данная тесткультура не чувствительна к тестируемому веществу. Время детекции тест-культуры
Streptomyces griseoviridis БКР В-264 возросло с 6,0 до 9,0 часа для концентрации 10 %, т.е.
увеличилось на 50 %. Поэтому LD50 для вещества 2 составляет 10 %.
Кроме указанных тест-культур, в заявленном способе могут быть использованы в качестве тест-штаммов мицелиальные, дрожжеподобные грибы, бактерии, простейшие, обладающие чувствительностью к исследуемым веществам.
Параллельно было проведено определение LD50 для веществ 1 и 2 по способупрототипу. Получены следующие результаты: для определения LD50 вещества 1 потребовалось 96 часов, а показатель LD50 вещества 2 не был определен, т.к. тест-культура Tetrahymena не показала чувствительности к веществу 2.
Таким образом, достигаемый технический результат заявленного способа заключается
в увеличении чувствительности, уменьшении времени тестирования с 96 часов до 2,2 -9,0
часов, что дает основание рекомендовать его в качестве экспресс-метода, а также увеличении числа тест-культур при проведении определения токсичности.
Источники информации:
1. ДУДЧИК Н.В. и др. Проблемы общественного здоровья и здравоохранения Республики Беларусь: Материалы Республиканской научно-практической конференции. - Минск,
2005. - С. 330-332.
2. SU 1686376 А1, 1991.
3. Определение токсичности химических соединений, полимеров, материалов и изделий с помощью люминесцентного бактериального теста: Методические рекомендации. Москва, 2000. - С. 13-16.
4. Альтернативные методы исследований (экспресс-методы) для токсиколого-гигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей среды. - Москва, 1999. - С. 34-35.
5. ХОЛОДЕНКО В.П. и др. // Российский химический журнал. - 2001. - T. XLV. - № 5-6. С. 135-141.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
82 Кб
Теги
by14267, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа