close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14469

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.06.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
C 12N 1/20
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА
ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КАМПИЛОБАКТЕРИЙ
(21) Номер заявки: a 20091429
(22) 2009.10.07
(43) 2011.06.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр эпидемиологии
и микробиологии" (BY)
(72) Авторы: Титов Леонид Петрович;
Газимуарова Людмила Дмитриевна
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение "Республиканский
научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии" (BY)
BY 14469 C1 2011.06.30
BY (11) 14469
(13) C1
(19)
(56) SU 1386657 A1, 1988.
Инструкция 4.2.10-17-7-2006. Клиническая и лабораторная диагностика
кампилобактериоза. - Минск, 2006.
АЛИЕВА Е.В. Разработка лабораторных экспресс-методов и технологии
производства иммунодиагностических
препаратов для выявления возбудителей листериоза и кампилобактериоза:
Автореферат диссертации. - М., 2008. С. 9-10.
RU 2059714 C1, 1996.
RU 93003275 A, 1997.
Справочник заведующего // КДЛ. 2009. - № 4. - С. 50-62.
Справочник ветеринарного лаборанта. М.: Колос, 1981. - С. 41-42.
US 6077678 A, 2000.
RU 2086648 C1, 1997.
(57)
Питательная среда для культивирования кампилобактерий, содержащая источник
азотного питания, натрия хлорид, натрия карбонат, агар-агар и дистиллированную воду,
отличающаяся тем, что в качестве источника азотного питания содержит пептон для бактериологических питательных сред и дополнительно содержит дрожжевой экстракт сухой
при следующем соотношении компонентов, г/л:
пептон для бактериологических питательных сред 20,0-24,0
натрия хлорид
4,0-6,5
натрия карбонат
1,0-1,5
агар-агар
10,0-12,0
дрожжевой экстракт сухой
5,0-6,0
вода дистиллированная
до 1 л,
и имеет pH 7,2 ± 0,2.
Изобретение относится к медицинской и санитарной микробиологии и может быть
использовано при диагностике кампилобактерий из различных клинических источников,
объектов внешней среды и пищевых продуктов.
Источником инфекции кампилобактериозов являются многие виды животных, чаще
дикие и домашние птицы, в первую очередь куры.
BY 14469 C1 2011.06.30
Ведущими зарубежными фирмами "Merk", "ГНЦ прикладной микробиологии", г.
Оболенск, РФ, НПО "Питательные среды", г. Махачкала, выпускаются питательные среды
для культивирования и выделения кампилобактерий на основе гидролизатов казеина [2],
кильки [3], пептона протеина с добавлением электролита [1].
Наиболее близкой к предлагаемой среде является питательная среда для культивирования кампилобактерий [4], содержащая триптический гидролизат кормовых дрожжей,
стимулятор роста натрия пируват, натрия глютамат, натрия метабисульфит, железо сернокислое закисное, натрий хлористый, натрий углекислый, агар и воду.
Недостатками этой среды являются специфичный состав, сложность в приготовлении,
слабые вегетирующие и селективные свойства в отношении кампилобактерий.
Отсутствие отечественных питательных сред для диагностики кампилобактериозной
инфекции вызывает нарекания со стороны практической службы здравоохранения.
Задачей изобретения является создание питательной среды для культивирования и
выделения кампилобактерий, обеспечивающей стабильность результатов, по бактериологическим показателям не уступающей зарубежным аналогам.
Поставленная задача решается тем, что питательная среда для культивирования кампилобактерий, содержащая источник азотного питания, натрия хлорид, натрия карбонат,
агар-агар и дистиллированную воду, в качестве источника азотного питания содержит
пептон для бактериологических питательных сред и дополнительно содержит дрожжевой
экстракт сухой и натрия карбонат при следующем соотношении компонентов, г/л:
пептон для бактериологических питательных сред
20,0-24,0
натрия хлорид
4,0-6,5
натрия карбонат
1,0-1,5
агар-агар
10,0-12,0
дрожжевой экстракт сухой
5,0-6,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
и имеет рН 7,2 ± 0,2.
Пептон для бактериологических питательных сред выпускает Научно-исследовательский центр фармакотерапии (С.-Петербург). Его получают из рубцов, летошки
крупного рогатого скота и мяса кур.
Среда автоклавируется при 1 атм (121 °С) в течение 15 минут. Количественное соотношение компонентов питательной среды и pH 7,2 ± 0,2 обеспечивают типичный рост
культур Campylobacter sp. через (44 ± 4) часов инкубации при 42 °С в микроаэрофильных
условиях при посеве минимальных посевных доз (0,1 мл из разведения 10-6-10-7).
Изобретение иллюстрируют следующие примеры.
Пример 1
Для изготовления среды берут следующие навески ингредиентов, г:
пептон для бактериологических питательных сред
20,0
натрия хлорид
4,0
натрия карбонат
1,0
дрожжевой экстракт
5,0
агар бактериологический
10,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
рН 7,2 ± 0,2.
Навески тщательно перемешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения, кипятят 1-2 мин, автоклавируют при 121 °С в течение 15 минут. Для придания селективных свойств к среде добавляют смесь, состоящую из 3-х антибиотиков: полимиксин 1250 ME, ванкомицин - 5 мг, триметоприм - 2,5 мг. Антибиотики смешивают и помещают
в отдельный флакон. Смесь рассчитана на приготовление 0,5 литров среды. Перед употреблением в расплавленную и остуженную до 45-50 °С основу питательной среды добавляют 5,0-7,0 % дефибринированной крови человека, барана, лошади и затем растворенную
2
BY 14469 C1 2011.06.30
в стерильной дистиллированной воде (5 мл) смесь антибиотиков. Содержимое осторожно
перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 20-25 мл. Перед посевом среду
подсушивают при (37±1,0) °С в течение 30 минут. Предлагаемая среда обеспечивает рост
следующих тест-штаммов:
C.jejuni ATCC
№6
C.jejuni ATCC
29428
C.coli ATCC
43478
C.lari ATCC
(клинический изолят),
при посеве 0,1 мл микробной взвеси каждой культуры из разведения 10-6 через 48 часов
инкубации при (42,0 ± 0,5) °С в микроаэрофильных условиях (анаэростатах, эксикаторах,
свечных сосудах с использованием газогенерирующих пакетов). Наиболее эффективно
использование CO2-инкубатора.
Бактерии Campylobacter образуют на среде бесцветные или светло-серые колонии 12 мм в диаметре, не способные к гемолизу. При более длительном культивировании центр
их несколько уплотняется, они приобретают желтоватый оттенок. При небольшом количестве кампилобактерий может быть сплошной рост в виде влажной, прозрачной пленки
на поверхности питательной среды.
Результаты бактериологического контроля среды представлены в табл. 1.
Пример 2
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон для бактериологических питательных сред
22,0
натрия хлорид
5,3
натрия карбонат
1,2
дрожжевой экстракт
5,5
агар бактериологический
11,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
pH 7,2 ± 0,2.
Результаты бактериологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 3
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон для бактериологических питательных сред
24,0
натрия хлорид
6,5
натрия карбонат
1,5
дрожжевой экстракт
6,0
агар бактериологический
12,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
pH 7,2 ± 0,2.
Результаты бактериологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 1.
Пример 4
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон для бактериологических питательных сред
18,0
натрия хлорид
3,0
натрия карбонат
1,0
дрожжевой экстракт
4,0
агар бактериологический
9,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
pH 7,2 ± 0,2.
3
BY 14469 C1 2011.06.30
Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению ее ростовых свойств. Результаты бактериологического контроля представлены в
табл. 1.
Пример 5
Среду готовят в соответствии с примером 1.
пептон для бактериологических питательных сред
26,0
натрия хлорид
7,5
натрия карбонат
2,0
дрожжевой экстракт
6,5
агар бактериологический
13,0
вода дистиллированная
до 1,0 л,
pH 7,2 ± 0,2.
Результаты бактериологического контроля представлены в табл. 1 и аналогичны результатам проверки по примеру 4.
Из таблицы видно, что предлагаемая питательная среда, приготовленная в соответствии с примерами 1, 2, 3, обладает хорошими ростовыми свойствами, обеспечивая рост
культур типичной морфологии: колонии кампилобактерий слегка выпуклые светло-серого
цвета, 1-2 мм в диаметре, гомогенны.
Нарушение количественного соотношения компонентов среды ведет к резкому ухудшению микробиологических показателей качества препарата. Так, в случае приготовления
среды в соответствии с примерами 4, 5 наблюдается уменьшение числа и размера колоний
Campylobacter. Кроме того, снижение числа колоний способствует образованию сплошной
прозрачной пленки на поверхности питательной среды (пример 5), которая препятствует
выделению культуры при наличии роста контаминантной микрофлоры.
Таблица 1
Предлагаемая среда по примеру
Тест-штаммы
1
2
3
4
5
4,3*
48
40
37
30
C.lari (клиd 1,0-1,5**
1,0-1,5
1,0-1,5
0,8-1,0
нический
светлосветло-серые светло-серые светло-серые сплошной рост
изолят)
черные
прозрачные прозрачные прозрачные
C.jejuni
39
45
38
20
28
ATCC
29428
d 1,0-1,5
1,0-1,5
1,0-1,5
0,8-1,0
сплошной рост
C.coli ATCC
64
68
54
37
30
43478
d 1,0-1,5
1,0-1,5
1,5-2,0
0,7-1,0
сплошной рост
C.jejuni
0
65
63
55
46
ATCC
№6
d 1,0-1,5
1,0-1,5
1,5-2,0
0,8-1,0
сплошной рост
* количество выросших колоний;
** размер колоний.
Сравнительные данные роста культур на разработанной среде и среде-прототипе
представлены в табл. 2.
4
BY 14469 C1 2011.06.30
Тест-штаммы
C.lari (клинический
изолят)
C.jejuni
ATCC № 6
C.coli ATCC
43478
C.jejuni
ATCC 29428
Таблица 2
Оценка эффективности сухой питательной среды по сравнению
со средой-прототипом
Предлагаемая среда
Среда-прототип
стабильность
стабильность
скорость
скорость
основных
основных
чувствительность роста,
чувствительность роста,
биологических
биологических
час
час
свойств
свойств
сохраняет при
сохраняет при
10-6
40-48 пересевах до
10-6
48-72
пересевах до
6-8 пассажей
3-6 пассажей
сохраняет при
сохраняет при
-7
-6
10
40-48 пересевах до
10
48-72
пересевах до
6-8 пассажей
3-6 пассажей
сохраняет при
сохраняет при
10-7
40-48 пересевах до
10-6
48-72
пересевах до
6-8 пассажей
3-6 пассажей
сохраняет при
сохраняет при
10-6
40-48 пересевах до
10-6
48-72
пересевах до
6-8 пассажей
3-6 пассажей
Из таблицы видно, что как чувствительность, так и скорость роста на предлагаемой
среде выше по сравнению со средой-прототипом. Кроме того, на предлагаемой среде сохраняются все основные биологические свойства популяции (морфология, антигенные и
биохимические свойства) при более длительных пересевах (пассажах).
Таким образом, по сравнению со средой-прототипом предлагаемая питательная среда
имеет ряд преимуществ:
сокращает время инкубации до 48 часов вместо 72 часов на среде-прототипе, что позволяет ускорить предварительный диагноз;
обладает высокой чувствительностью, обеспечивает стабильные ростовые свойства
исследуемого возбудителя, поэтому с успехом может быть использована не только в клинической, но и санитарной микробиологии;
доступность и низкая стоимость по сравнению с импортными средами позволяет более успешно решать задачи диагностики и лечения заболеваний, вызванных этим возбудителем.
Источники информации:
1. Каталог "Бактериологические среды для санитарной и клинической микробиологии,
биотехнологии и контроля лекарственных средств". - г. Оболенск, 1999. - С. 27.
2. Справочник по микробиологическим питательным средам / Под ред.
М.М.Меджидова. - Махачкала: Дагестан кн. изд-во, 1999. - С. 33.
3. Microbiology Manual, Merck, 1996/97, p. 77.
4. A.c. СССР 1386657, МПК C 12N 1/20 // Бюл. № 13. - 1988.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
96 Кб
Теги
by14469, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа