close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY14555

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.06.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 14555
(13) C1
(19)
G 01N 33/50
A 61B 5/00
(2006.01)
(2006.01)
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ У БОЛЬНОГО
ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С
(21) Номер заявки: a 20090357
(22) 2009.03.13
(43) 2010.10.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(72) Авторы: Юркевич Игорь Викторович; Карпов Игорь Александрович
(BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Белорусский государственный медицинский университет" (BY)
(56) RU 2167424 C1, 2001.
SU 1767439 A1, 1992.
BY 14555 C1 2011.06.30
(57)
Способ диагностики цирроза печени у больного хроническим вирусным гепатитом С,
включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что в сыворотке
крови определяют количество белоксвязанной фукозы и при его значении 140 мг/л или
выше диагностируют цирроз печени.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и предназначено для
прогнозирования цирроза у больных с хроническим вирусным гепатитом C, что позволит
своевременно коррегировать лечебные мероприятия.
HCV - инфекция является, по данным Европейской ассоциации по изучению печени,
причиной 70 % случаев хронического вирусного гепатита, 40 % цирроза печени, 60 % гепатоцеллюлярной карциномы. Цирроз печени в исходе хронического гепатита C (ХГС) в
США и в Европе вышел на первое место среди показаний к трансплантации печени [1, 2].
Чем дольше существуют фиброз и цирроз, тем меньше возможностей для их коррекции. Отсюда следует важность раннего выявления и, при возможности, устранения пускового фактора фиброгенеза. Диагностика цирроза печени должна быть основана на
факторах, позволяющих прогнозировать темпы развития фиброза, и методах, дающих истинное представление о стадии болезни.
Известен способ определения цирроза печени путем ультразвукового исследования и
проведения пункционной биопсии печени с последующей гистологической оценкой биоптата [2]. Биопсия печени дает информацию о выраженности и распространенности фиброза и степени активности воспалительного процесса в печени. Эти патогистологические
характеристики позволяют до известной степени предсказать естественное течение заболевания и, следовательно, определить необходимость относительно срочного начала терапии.
Недостатками известного способа являются возможные ошибки при взятии образцов и
риск, связанный с этой процедурой, особенно учитывая наличие данных об активации
процесса после биопсии печени. При ультразвуковом исследовании диагностика цирроза
BY 14555 C1 2011.06.30
печени проводится на этапе "продвинутого цирроза". Однако достоверность диагностики
зависит от опыта специалиста по ультразвуковой диагностике, класса ультразвуковой аппаратуры и выраженности морфологических изменений в печени.
На стадии внедрения в клиническую практику находятся методы диагностики цирроза
с помощью сывороточных маркеров фиброза с использованием компонентов внеклеточного матрикса, участвующих в процессе печеночного фиброгенеза, таких как: сывороточный уровень коллагена IV типа, N-терминальный пептид проколлагена III типа,
гиалуроновая кислота, тканевые ингибиторы металлопротеаз 1 типа [3]. Однако данные
методы являются достаточно сложными и требуют больших материальных затрат при их
проведении.
Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики цирроза печени путем определения относительного содержания фракций лизофосфатидилхолина (ЛФХ), относительного содержания сфингомиелина (СМ), фосфатидилхолин фосфолиапидного
спектра крови и расчета коэффициента, определяемого по формуле ФХ2/СМхЛФХ, где
ФХ - относительное содержание фосфатидилхолина, СМ - относительное содержание
сфингомиелина, ЛФХ - относительное лизофосфатидилхолина, и при его значениях: 20-35
диагностируется хронический вирусный гепатит, 36-45 - хронический вирусный гепатит у
лиц, злоупотребляющих алкоголем, 50-69 - диагностируют цирроз [4].
Недостатком известного способа является высокая трудоемкость способа ввиду необходимости определения нескольких фракций фосфолипидов, а также использование данного способа у больных с циррозом печени различной этиологии, что снижает
информативность способа у различных групп больных.
Задачей настоящего изобретения является снижение трудоемкости диагностики цирроза печени в исходе хронического вирусного гепатита C и повышение информативности.
Поставленная задача достигается за счет того, что в способе диагностики цирроза печени у больного хроническим вирусным гепатитом C, включающем биохимическое исследование крови, в сыворотке крови определяют количество белоксвязанной фукозы и
при его значении 140 мг/л или выше диагностируют цирроз печени.
Определение белоксвязанной фукозы (БСФ) в сыворотке крови каждой группы больных проводилось по методу Дише и Шетлз в модификации Шараева П.Н. с использованием известного принципа фотометрии хромогена при максимуме поглощения 396 нм. [5, 6].
Этот хромоген образуется в условиях последовательного воздействия на фукозу, в том
числе на связанную ее форму, серной кислотой и солянокислым цистеином. При этом количество мешающего хромогена, образующегося из гексоз с максимумом поглощения при
430 нм, максимально уменьшается за счет увеличения времени гидролиза с серной кислотой до 10 мин.
Сущность изобретения заключается в следующем.
В две сухие центрифужные пробирки (№ 1 - опыт, № 2 - контроль) наливаем по 0,1 мл
исследуемой сыворотки крови и 0,5 мл этанола для осаждения фукозосодержащих гликопротеинов. Содержимое пробирок перемешиваем и через 4-5 минут центрифугируем 3000
об./мин., 10 мин.). Надосадочную жидкость выливаем. В осадке (опыт и контроль) определяем содержание БСФ. К полученным осадкам (опытные, контрольные) добавляем по
0,5 мл 0,1 н. едкого натрия. Пробирки с содержимым встряхиваем (перемешиваем пипетированием), опускаем в воду со льдом и в пробы добавляем по 2,3 мл раствора концентрированной серной кислоты 6:1 (6 частей концентрированной серной кислоты и 1 часть
воды), охлажденной до 1-4 °С. Содержимое пробирок осторожно перемешиваем, не вынимая из воды со льдом. Указанное выше количество кислоты в условиях охлаждения
также добавляем к стандартным растворам фукозы, взятым по 0,5 мл. Затем все охлажденные смеси помещаем на 10 мин в кипящую водяную баню с последующим охлаждением до 18-24 °С. Во все пробы, кроме контрольной (пробирка № 2), добавляем точно по
0,1 мл 3 %-ного раствора солянокислого цистеина, тотчас их перемешиваем и оставляем
2
BY 14555 C1 2011.06.30
на 60 мин при температуре 18-24 °С. Оптическую плотность опытной пробы измеряем на
спектрофотометре при 396 нм против соответствующей контрольной пробы (пробирка № 2).
Оптическую плотность стандартных растворов фукозы измеряем при 396 нм и по полученным данным строим калибровочный график, приведенный на чертеже, где Yкоэффициент абсорбции, полученный спектрофотометрометрией, X-концентрация фукозы.
По калибровочному графику находим содержание БСФ, концентрацию выражаем в
миллиграммах на 1 л исследуемой биологической жидкости. Оптическую плотность стандартных растворов фукозы измеряем при 396 нм и по полученным данным строим калибровочный график (с помощью программы OriginPro 7,5.). По калибровочному графику
находим содержание БСФ с помощью формулы y = A + B × x, где a и b - коэффициенты,
полученные программой, а x - искомая концентрация фукозы. Их концентрации выражаем
в миллиграммах на 1 л исследуемой биологической жидкости. Коэффициенты для пересчета A - 0,07044 и B - 3,85684.
При наличии цирроза уровень БСФ составляет 140 мг на 1 л и выше в зависимости от
стадии фиброза (максимальный уровень - у лиц с декомпенсированным циррозом).
Изобретение поясняется примерами.
Пример 1.
Пациент Г., 45 лет, диагноз: хронический гепатит C (Anti HCV + ) с трансформацией в
цирроз печени, класс тяжести A. В анамнезе anti-HCV впервые выявлены в 1999 году. Жалобы на слабость, повышенную утомляемость, кожный зуд, отмечается умеренная гепатоспленомегалия.
При исследовании уровня белка альбумин составил 40,62 г на 1 л.
При ультразвуковом исследовании - печень увеличена, эхоструктура неоднородна, сосудистый рисунок обеднен, портальная вена - 13 мм, селезенка 164-62 мм.
Проведено исследование согласно предлагаемому способу. Уровень БСФ составил 160 мг
на 1 л. Диагноз верифицирован данными клинической картины и ультразвукового исследования.
Пример 2.
Пациент Д., 57 лет, диагноз: хронический гепатит C (Anti HCV + ) с трансформацией в
цирроз печени, класс тяжести A. Портальная гипертензия (спленомегалия, периферические отеки). Печеночная энцефалопатия П. В анамнезе anti-HCV впервые выявлены в 2001
году. Жалобы на зуд кожных покровов, отеки на ногах. Отмечается умеренная гепатоспленомегалия, асцит.
При исследовании уровня белка альбумин составил 35,2 г на 1 л.
При ультразвуковом исследовании - печень увеличена, эхоструктура неоднородна, узлы до 24 мм, сосудистый рисунок обеднен, портальная вена - 14 мм, селезенка 128 x 60 мм.
Проведено исследование согласно заявляемому способу. Уровень БСФ составил
153 мг на 1 л. Диагноз верифицирован данными клинической картины и ультразвукового
исследования.
Заявляемый способ был апробирован на базе отделения № 3-2 (боксированное хронических вирусных гепатитов) учреждения здравоохранения "Городская клиническая инфекционная больница" г. Минска.
За период с 2006 по 2008 год в отделении № 3-2 (боксированное хронических вирусных гепатитов) учреждения здравоохранения "Городская клиническая инфекционная
больница" с целью оценки эффективности метода определения БСФ было обследовано
120 пациентов с хроническим вирусным гепатитом C. Возраст пациентов - от 26 до 63 лет.
В соответствии с целью исследования были выделены следующие группы больных:
1-я группа: 30 пациентов с хроническим вирусным гепатитом C (минимальной, умеренной, высокой клинико-биохимической активности);
2-я группа: 30 пациентов с циррозом печени в исходе хронического вирусного гепатита C;
3
BY 14555 C1 2011.06.30
3-я группа: контрольная группа из 30 здоровых доноров, не имевших на момент обследования острых и хронических заболеваний и имевших отрицательные результаты обследования на маркеры вирусного гепатита (список представлен). Все обследуемые
группы были репрезентативны и сопоставимы по возрастному, половому и количественному составу. Все пациенты наблюдались в динамике заболевания.
При оценке эффективности диагностики оценивались следующие показатели:
1. Клинические.
2. Биохимические (определение билирубина, аланинаминотрансферазы, тимоловой
пробы, протеинограммы, гаммаглутамилтранспептидазы, щелочная фосфатаза, альфаамилаза).
3. Определение уровня гликопротеинов и степени их фукозилирования.
4. Инструментальные (ультразвуковое исследование органов брюшной полости с
оценкой размеров органов и скорости кровотока; пункционная биопсия печени).
5. Молекулярно-биологические (определение генома вируса гепатита C методом полимеразно-цепной реакции и уровня вирусной нагрузки).
При оценке эффективности данного способа впервые проведено исследование уровня
фукозилирования гликопротеинов у лиц с HCV-инфекцией с различной степенью клинико-биохимической активности и различной стадийностью морфологического процесса в
печени.
По полученным данным уровень белоксвязанной фукозы в сыворотке крови у больных хроническим вирусным гепатитом C на стадии цирроза достоверно выше уровня белоксвязанной фукозы контрольной группы и группы пациентов с хроническим вирусным
гепатитом C без цирроза (191 ± 18,18мг/л; 72 ± 5,8мг/л; 115 ± 6,1 мг/л соответственно).
Таким образом, заявляемый способ позволяет проводить неинвазивное обследование
пациентов с определением биохимических показателей сыворотки крови, а именно БСФ.
Применение предложенного метода исследования позволяет диагностировать цирроз печени в исходе хронического вирусного гепатита C.
Источники информации:
1. Шахгильдянг И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика)/Вопросы практической эпидемиологии. - М., 2003. - С. 8-383.
2. Ивашкин В.Т. Диагностика, лечение и ведение пациентов с гепатитом C // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2006. - Т. 8. - № 2. - С. 102-125.
3. Минушкин О.Н., Леонтьев С.И., Масловский Л.В., Зверков И.В., Лазаватор А.Л.,
Кудинова Н.А. Применение дискриминантной счетной шкалы для оценки фиброзообразования в печени у больных с хроническими гепатитами // Гепатология. - № 1. - 2005. С. 16-23.
4. RU 2167424 C1, 2001.
5. Шараев П.Н., Ермаков Г.И., Ермакова М.К., Кочурова Л.В., Найденкина С.Н., Габдрахманова Н.К., Осипова М.Н. Метод определения белок- и олигомерсвязанной фукозы в
сыворотке крови // Клиническая лабораторная диагностика. - № 10. - 2003. - С. 14.
6. Dische Z., Shettles L.B. A Specific Color Reaction of Methylpentoses and a Spectrophotometric Micromethod For Their Determination // The Journal of Biological Chemistry. - 1948. P. 595-603.
4
BY 14555 C1 2011.06.30
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
122 Кб
Теги
патент, by14555
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа